低毫安电化学疗法抑制磷酸肌醇3激酶／蛋白激酶B信号通道抗人乳腺癌细胞株MDA—MB231侵袭迁移的机制

目的探讨电化学疗法（ECT）对人乳腺癌MDA—MB231细胞株抗侵袭迁移的作用机制。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测1～15C的ECT和（0．05—1．00）μmol／LMK2206作用MDA—MB231细胞24h后的生长抑制率；Transwell实验检测5CECT对细胞侵袭、迁移能力改变；用反转录一聚合酶链反应（RT．PCR）、Westernblot法检测1～10CECT作用MDA-MB231细胞24h后血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）、蛋白激酶B（Akt）基因mRNA和蛋白的表达。结果Transwell实验证实5CECT作用后MDA．MB231细胞侵袭、迁移能力下降；RT—PCR结果显示5C、10C的ECT组与空白对照组比较，随着ECT电量的提高，侵袭基因VEGF、MMP-2的表达量逐渐降低，5CECT组VEGF基因的相对表达量为0．591±0．038，MMP-2基因为0．601±0．045，与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；磷酸肌醇3激酶（P13K）／Akt信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而Akt基因的表达量逐渐降低；相同抑制率的ECT组（1C）和MK2206组（0．05μmol／L）比较，两组降低VEGF、MMP-2、Akt基因表达量的差异无统计学意义（P〉0．05），MK,2206组能增高PTEN基因的表达量。Westernblot检测结果显示3C、5C、10C不同库仑剂量的ECT治疗组与空白对照组比较，随着ECT库仑剂量的提高VEGF、MMP-2蛋白表达量逐渐降低[3CECT组VEGF的相对表达量为0．426±0．072，MMP-2的相对表达量为0．214±0．016，与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）]，P13K／Akt信号通路中的磷酸化Akt（P—Akt）蛋白表达量逐渐降低，PTEN蛋白表达量逐渐增高，总Akt基因表达量无明显变化；相同抑制率的ECT组1C和MK2206组0．05±mol／L比较，ECT组更能降低VEGF、MMP-2的蛋白表达量且更能增高PTEN的蛋白表达量，但MK2206组更能降低p-Akt的蛋白表达量，对总Akt蛋白表达量两组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ECT具有抗乳腺癌侵袭性转移的作用，其机制可能是与抑制P13K／Akt信号通道相关。

低毫安电化学疗法诱导人乳腺癌耐药株MCF-7/阿霉素细胞凋亡及逆转多药耐药的研究

目的 探讨低毫安电化学疗法（ECT）对人乳腺癌耐药株MCF-7/阿霉素（ADR）细胞诱导凋亡及逆转多药耐药（MDR）的作用机制.方法 电化学处理细胞后继续培养6h和24h,用噻唑蓝（MTT）法、膜联蛋白V（Annexin V）染色、激光共聚焦显微镜观察ECT对肿瘤细胞的生长抑制、凋亡变化;荧光分光光度法检测细胞内ADR的浓度;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法、Western blot法检测多药耐药基因（MDR1）、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3基因mRNA和蛋白表达.结果 ECT能明显抑制MCF-7/ADR细胞的生长,实验组凋亡率比对照组明显增加（P＜0.05）;5 C ECT作用后,细胞内的ADR积累增加了4.61倍,实验组PTEN、Caspase-3的相对表达量及蛋白表达随电量的增加明显增高;5 C时P-糖蛋白（P-gp）的相对表达量为0.293 ±0.013、p-Akt蛋白的相对表达量为0.397±0.020,与空白对照组比较,表达明显下降（P＜0.01）.结论 ECT可抑制MCF-7/ADR细胞生长,诱导凋亡,具有逆转多药耐药性,其机制可能主要与ECT作用Akt基因抑制磷脂酰肌醇3-激酶/（PI3K）/Akt信号通路等参与的凋亡途径相关.