丙戊酸钠对匹罗卡品点燃小鼠GABAB受体表达的影响

目的研究丙戊酸钠对匹罗卡品点燃小鼠海马GABAB受体的影响,探讨GABAB受体在癫痫发病机制中的意义。方法雄性昆明小鼠,随机分为4组,每组10只。应用氯化锂联合匹罗卡品腹腔注射建立点燃模型,连续1周每天给予50 mg/kg丙戊酸钠灌胃;应用免疫组化、实时荧光定量PCR(q-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)等技术,检测各组小鼠海马GABAB受体蛋白表达情况。结果与匹罗卡品点燃比较,丙戊酸钠组小鼠行为学和局部场电位信号(LFP)表现均相对稳定,免疫组织化学法显示丙戊酸钠组GABAB受体表达量(0.19±0.01)显著升高(P<0.05),q-PCR显示丙戊酸钠组GABAB受体表达倍数(2.81±0.3)明显增加(P<0.05),Western Blot可见丙戊酸钠组GABAB受体表达量(0.67±0.17)明显升高(P<0.05)。结论丙戊酸钠能够通过提高小鼠海马GABAB受体mRNA及蛋白的表达水平抑制匹罗卡品点燃小鼠的癫痫发作。

小胶质细胞在大鼠暂时性局灶脑缺血再灌注后脑损伤区活化反应的初步研究

目的:探讨暂时性局灶脑缺血后小胶质细胞的反应规律,进一步探讨小胶质细胞在脑缺血损伤中的作用。方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,应用组织学、免疫组化染色及免疫荧光双标技术,观察大脑中动脉阻塞30 min,再灌注0.5、3、6 h以及1、3、7、14 d和28 d后脑组织的损伤情况,小胶质细胞的形态学和数量变化。结果:组织学观察结果显示:MACO30 min再灌注0.5 h后,梗死区出现神经元肿胀,脑水肿;再灌注3 h和6 h,脑水肿加重,部分神经元出现核固缩,对侧脑组织也出现水肿。脑水肿和神经元固缩在再灌注1 d时最重。再灌注3 d开始,脑水肿程度逐渐减弱,缺血区浸润的小胶质细胞增多。再灌注7 d时,缺血灶小胶质细胞浸润最明显,伴胶质结节形成,再灌注14 d,胶质瘢痕逐渐减小。再灌注28 d,大多数动物梗死区仅存少量小胶质细胞,个别未能修复的坏死灶液化并形成囊腔。免疫组化和免疫荧光双标记结果显示:假手术组小胶质细胞的胞体小,突起细长柔和。脑缺血30 min再灌注0.5 h可见小胶质细胞的体积增大,突起少而短。缺血再灌注6 h,小胶质细胞的胞体增大,突起减少或消失。再灌注1 d和3 d,小胶质细胞的数量明显多于假手术组(P<0.05)。再灌注7 d,细胞数量增加达到高峰。再灌注14 d以后,小胶质细胞的数量进一步减少,再灌注28 d后小胶质细胞的数量少于再灌注7 d,但仍多于假手术组和缺血再灌注3 d(P<0.05)。结论:暂时性局灶脑缺血能够引起小胶质细胞活化和增生,经历损伤性、反应性、效应性和恢复性变化四个阶段。小胶质细胞在脑缺血损伤组织的清除和损伤修复等方面发挥重要作用。

高血糖经抑制磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶加重脑缺血再灌注损伤

目的:探讨磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)在高血糖加重脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:通过注射链脲佐菌素制备糖尿病高血糖模型,线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型;分为假手术组(sham组),正常血糖脑缺血再灌注24 h组(NM I/R 24 h组)、72 h组(NM I/R 72 h组),高血糖脑缺血再灌注24 h组(HM I/R 24 h组)以及72 h组(HM I/R 72 h组),采用组织学、免疫组织化学及免疫印迹等方法,比较观察脑组织的损伤及p-AMPK的表达。结果:NM I/R 24 h组、NM I/R 72 h组大鼠均可见神经功能缺失的表现,HM组大鼠神经功能缺失评分明显高于NM组。NM I/R 24 h组梗死区脑组织疏松水肿,神经元固缩;HM组大鼠脑组织疏松水肿及固缩神经元较NM组大鼠明显增加;与NM I/R 72 h组比较,HM组大鼠仍存在脑组织疏松水肿,较多固缩神经元。免疫组织化学显色和免疫印迹结果可见,I/R 24 h和I/R 72 h,HM组p-AMPK相对蛋白量明显低于NM组。p-AMPK定位观察可见,p-AMPK与神经元共表达,但不与星形胶质细胞共表达。结论:糖尿病高血糖加重大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,可能与神经元磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶减少有关。

Ghrelin对癫痫大鼠γ-氨基丁酸表达及癫痫发作的影响

目的探讨Ghrelin对海人酸（KA）致痫大鼠海马神经元的影响及其与海马内γ-氨基丁酸（GABA）表达变化的相关性。方法建立大鼠海人酸致痫模型，并注射外源性Ghrelin进行干预。观察大鼠行为学变化，利用苏木素-伊红（HE）染色、尼氏染色观察海马神经元变化，利用免疫荧光检测海马内GABA表达的变化。结果KA注射后，经过潜伏期后大鼠开始出现癫痫发作，Ghrelin干预组潜伏期（12．3±3．5）min较癫痫组潜伏期（8．7±1．2）min明显延长（P〈0．05），强直阵挛持续时间（10．8±1．4）min较癫痫组（15．2±2．7）min明显降低（P〈0．05）。HE染色及尼氏染色显示癫痫大鼠海马神经细胞形态学变化明显、神经元缺失严重，统计分析示Ghrelin干预组各时间点神经细胞凋亡、缺失较癫痫组减轻（P〈0．05）。免疫荧光检测统计结果示注射KA后大鼠海马组织24h内GABA能神经元数量与对照组比较随时间延长而持续减少，Ghrelin干预后其减少趋势更为平缓，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ghrelin对KA致痫大鼠海马神经元具有保护作用，其保护作用与其影响GABA在中枢神经系统中的表达明显相关。

GABABR活性水平对致痫大鼠认知功能及Arc／Arg3．1表达的影响

目的探讨GABABR活性变化对癫痫大鼠认知功能及Arc／Arg3．1的影响。方法建立氯化锂-匹罗卡品致痫模型，随机分成正常组、巴氯酚组、CGP组、单纯点燃组。避暗、水迷宫实验观察大鼠认知情况，免疫组化、荧光定量PCR、免疫印迹检测海马组织内GABABR（GB1、GB2）、Arc／Arg3．1蛋白及mRNA表达情况。结果避暗实验：4组大鼠穿梭次数为：6．8±0．6、1．2±0．2、5．4±0．5及3．6±0．3，潜伏期为：26．1±3．9、152．2±12．9、65．8±7．0、91．2±9．1，与水迷宫行为学变化趋势一致，显示致痫大鼠认知功能减退，巴氯酚进一步抑制致痫大鼠学习和记忆获取能力，CGP35348可改善致痫大鼠认知功能。Arc／Arg3．1及GB1、GB2相对表达量检测显：致痫大鼠较正常大鼠Arc／Arg3．1及GB1、GB2表达量明显增高，致痫组大鼠相对比，巴氯酚组Arc／Arg3．1表达量下降，GB1、GB2增高；而CGP35348组Arc／Arg3．1表达量增高，GB1、GB2降低。结论GABABR活性水平可以调控Arc／Arg3．1表达，并影响致痫大鼠认知功能。