抑制糖原合酶激酶-3β对少突胶质前体细胞分化的阻碍作用

目的探讨抑制糖原合酶激酶3β(glycogensynthasekinase 3β,GSK3β)活性对少突胶质前体细胞(OPCs)分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)的阻碍作用及机制。方法原代分离培养OPCs,利用1.5m M氯化锂(Li Cl)抑制GSK3β96h,采用免疫荧光染色技术检测抑制GSK3β后,OLs的标记物抗碱性髓鞘蛋白抗体(MBP)和抗2,3-环核苷酸3’-磷酸水解酶(CNP)表达量的变化,并通过检测caspase 3的表达量来确定GSK3β对OPCs分化的阻碍作用是否与程序性死亡相关。结果 GSK3β被Li Cl抑制后,CNP和MBP的蛋白表达量明显减低,同时细胞形态也未出现类似于对照组的网状结构;在加入Li Cl处理96h后,caspase 3表达没有升高。结论抑制GSK3β活性可特异性阻断OPCs的正常分化过程,而非OPCs的程序性死亡所致。

氧化苦参碱对活化的小胶质细胞的抑制作用

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对激活的小胶质细胞的作用及机制。方法:培养BV2小胶质细胞株,实验分为对照组(Con),细菌脂多糖(LPS)组,OMT实验组。应用western-blot检测OMT对LPS激活的BV2细胞HSP60的影响,ELISA检测OMT对HSP60和TNF-α释放的作用。结果:LPS组中HSP60的表达及HSP60、TNF-α的释放都比对照组显著增加,加入OMT后,这些因子的水平都明显降低。结论:OMT可能抑制通过HSP60信号通路降低炎症因子的产生而发挥神经保护作用。

枸杞多糖对小胶质细胞HSP60-TLR4通路的抑制作用

本文为研究热休克蛋白60(HSP60)在枸杞多糖(LBPs)神经保护中的作用机制,采用的方法是培养小胶质细胞株BV2,实验分对照组、阳性对照组(细菌脂多糖,LPS)、实验组(LBPs)。应用western-blot检测LBPs对LPS激活的BV2细胞HSP60和Toll样受体4(TLR-4)的影响,ELISA方法检测LBPs对HSP60释放和细胞因子产生的作用。结果显示,LPS组中HSP60和TLR-4的表达及TNF-α和IL-1β的释放都比对照组显著增加,加入LBPs后,这些因子的水平都明显降低。由此得出结论,LBPs可能通过HSP60-TLR-4途径阻止小胶质细胞的活化而发挥神经保护作用。

纳洛酮对神经胶质瘤U87细胞的抗肿瘤作用及机制研究

目的探讨纳洛酮(Naloxone,NA)对神经胶质瘤U87细胞的抗肿瘤作用及其可能的机制。方法培养U87细胞,将U87细胞分为对照组和实验组(U87+NA),采用CCK-8细胞增殖实验检测NA对U87细胞活性的影响并确定最佳用药浓度;运用Western blot检测U87细胞中热休克蛋白60(HSP60)、热休克转录因子1(HSF-1)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)和Toll样受体4(TLR-4)的表达水平;通过免疫荧光技术进一步检测U87细胞在加入NA前、后U87细胞生长状况的变化。结果与对照组相比,0.5～4.0μM的NA处理U87细胞后,神经胶质瘤U87细胞的活性均降低(P<0.05)。实验组NF-κB和TLR-4的表达较对照组减少,HSP60、Caspase-3的表达增加(P均<0.05)。与对照组相比,0.5μM NA作用U87细胞48h后抑制了U87细胞的生长(P<0.05)。结论纳洛酮可促进U87细胞的凋亡,可能与HSP60高表达以及NF-κB、TLR-4低表达有关。

右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用

目的:研究右美沙芬(DM)对激活的小胶质细胞的作用及热休克蛋白60(HSP60)在DM神经保护中的作用机制。方法:培养BV2小胶质细胞株,分为对照组,细菌脂多糖组,(LPS),实验组(DM)。Western-blot检测DM对LPS激活的BV2细胞HSP60和Caspase 3的影响,ELISA检测DM对HSP60释放的作用。结果:LPS组中HSP60和Caspase 3的表达及释放都比对照组显著增加,加入DM后,这些因子的水平都明显降低。结论:DM可能通过HSP60信号通路途径阻止小胶质细胞的凋亡而发挥神经保护作用。

内向整流钾通道对少突胶质前体细胞发育的作用

目的研究内向整流钾通道Kir4.1对少突胶质细胞(OL)发育的作用。方法体外原代分离培养少突胶质前体细胞(OPC),利用PCR和Western blot技术检测OPC和成熟OL中Kir4.1和髓鞘相关蛋白MBP的基因和蛋白表达水平。用desipramine(DES)阻断Kir4.1通道后,再检测细胞增殖和分化及MBP的表达情况。结果Kir4.1在OL细胞中表达升高,阻断Kir4.1可以促进OPC增殖,但是抑制OPC向OL细胞分化。结论Kir4.1在OL细胞发育过程中发挥着重要作用。

儿童椎管内原始神经外胚层肿瘤的诊断与治疗

目的了解儿童椎管内原始神经外胚层肿瘤（primitive neuroectodermal tumor，PNET）的临床特点及治疗方法，提高对该病的临床诊治水平。方法回顾性分析2013年1月至2015年12月于我院手术治疗病理确诊的3例原始神经外胚层肿瘤患儿的临床资料，女2例，男1例，年龄分别为6、7、9岁。肌力进行性下降是患儿最常见的临床表现，术前均进行了增强MRI检查，提示2例病灶位于髓外硬膜下，1例局限于硬膜外。3例患儿均行显微外科手术治疗，其中病灶全切除2例，次全切除1例。术后标本均送病理行免疫组化，1例患儿术后行放化疗。结果3例患儿术后临床症状均较前缓解，术后病理提示光镜下肿瘤细胞呈现形态均一的小圆细胞，1例可见典型Homer-Wright菊形团结构，2例呈现不典型Homer-Wright菊形团样结构。免疫组织化学检查，1例CD99（-），为中枢型原始神经外胚层肿瘤（cPNET），2例CD99（＋），为外周型原始神经外胚层肿瘤（pPNET）。随访5～14个月，其中2例死亡，1例术后8个月未见复发。结论原始神经外胚层肿瘤是一种主要发生于儿童和青少年的罕见小圆细胞恶性肿瘤，预后极差；临床症状不典型，但对于肢体肌力进行性下降并且MRI提示椎管内巨大占位性病变的患儿，需考虑PNET可能。诊断需依靠病理学检查及免疫组化。手术切除肿瘤结合放化疗是目前主要治疗原则。