浙江省桃花水母18S rRNA基因序列分析及物种鉴定

采用PCR和DNA测序技术扩增和测序了2003-2008年间采自浙江省宁波、杭州、温州和金华4个地区7个地点桃花水母（Craspedacusta）核糖体小亚基rRNA（18S rRNA）基因,并与已知索氏桃花水母（Craspedacusta sow-erbyi）和中华桃花水母（Craspedacusta sinensis）18S rRNA基因序列进行了比对。结果显示：这7个地点的桃花水母与索氏桃花水母序列极为相似,相似度达99.67%-100%,遗传距离为0-0.002,而与同属中华桃花水母的遗传距离为0.013-0.015。分子系统学分析显示这7个地点桃花水母与索氏桃花水母分支的置信度高达100%。结果确定分析样品均为索氏桃花水母。

浙江省桃花水母遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术对浙江省杭州、宁波、温州和金华4个地区桃花水母群体的遗传多样性进行了分析，从80个随机引物中筛选出10个引物对4个群体28个个体的基因纽DNA进行扩增，共检测到230个位点，分子片段在200-2000bp之间，其中多态位点124个，占53．91％；群体间最大的遗传距离为0．6506，最小的遗传距离为0．2451，平均遗传距离为0．4825；各群体的多态位点比例俨）为27．78％-76．47％，平均杂合度（H）为0．0998-0．2977，shannon多样性指数（I）为0．1500-0．4390．整个群体的H，I和遗传分化指数（Gst）分别为0．2610、0．3931和0．2249．研究结果表明：桃花水母的遗传多样性较丰富，其中宁波象山和杭州玉泉群体遗传多样性水平低于整体水平，温州平阳和金华永康群体的遗传多样性水平高于整体水平，且群体内存在较大的遗传分化．

一小型水池中浮游生物数量动态与桃花水母消长的关系

2005年和2006年夏秋季,宁波一消防池中出现信阳桃花水母(Craspedacusta sowerbyi xinyangensis),对池中的浮游生物种类组成及种群数量变动特征进行了研究,并与未出现桃花水母的年份进行了比较分析。共记录浮游植物85种,分属8门53属,以绿藻门居优势占种类总数的42.35%,优势种为蓝、绿藻门的小球藻(Chorella vulgaris)、银灰平裂藻(Merismo pedia glauca)和不定微囊藻(Microcystis incerta);浮游动物记录44种属,原生动物和轮虫占绝对优势,分别占种类总数的47.74%和45.45%,优势种为多肢轮虫(Polyarthra sp.)。浮游植物丰度值高峰出现在11月为14065.60×104ind/L,蓝藻丰度居首位占61.05%;浮游动物丰度呈现5月和11月两个高峰,5月最高达5580ind/L,7月最低为900ind/L;原生动物和轮虫的丰度分别占总丰度的48.28%和43.92%,桡足类只占7.73%,生物量以轮虫最大。轮虫和桡足类数量在桃花水母出现前均达到高峰;桃花水母出现盛期轮虫丰度最低;桃花水母消失后再度回升;浮游植物、浮游动物和桃花水母三者处于动态平衡。桃花水母出现前至出现中期的4—8月份,池水为"寡污-中富营养类型"水质;水母出现末期及消失后的9—11月,发展为"中污-极富营养类型"水质。

岱衢族大黄鱼种质的AFLP分析

根据耳石年轮确定作为研究材料的浙江海区捕捞野生大黄鱼为岱衢族大黄鱼,并用AFLP技术进行种质分析。结果表明岱衢族大黄鱼可分为两类:岱衢族大黄鱼Ⅰ型和岱衢族大黄鱼Ⅱ型,这种划分与文献报道的岱衢族大黄鱼有“春综”和“秋综”两种群之分相吻合。岱衢族大黄鱼Ⅰ型生长速度比岱衢族大黄鱼Ⅱ型要快,海水养殖开发和利用岱衢族大黄鱼应选用岱衢族大黄鱼Ⅰ型作为亲本较好。获得的岱衢族大黄鱼种质AFLP指纹图谱,可以作为鉴定岱衢族大黄鱼的依据。

野生与养殖三疣梭子蟹营养品质分析及比较

通过分析比较野生和养殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的肌肉、肝胰腺及生殖腺的营养成分,对其营养价值进行综合评价。采用国家标准方法测定组织中的粗蛋白质、粗脂肪、灰分、氨基酸和脂肪酸。结果表明,粗蛋白质以肌肉中含量最高,养殖蟹平均为81.69%,野生蟹平均为74.02%;粗脂肪以肝胰腺中含量最高,野生蟹为57.28%,是养殖蟹42.42%的1.4倍。共检出38种脂肪酸,肝胰腺的脂肪酸组成最丰富,其饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)总量显著高于卵巢和肌肉中的含量;而多不饱和脂肪酸(PUFA)总量及EPA+DHA含量则表现为肌肉>卵巢>肝胰腺(P<0.05);EPA+DHA两者含量之和高达20.21%～36.91%,占PU-FA的2/3以上;C18:2(n-6)、C18:3(n-3)和C20:4(n-6)等PUFA的含量,均表现为野生蟹显著高于养殖蟹(P<0.05)。氨基酸组成中以谷氨酸含量居首位,氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)评判氨基酸显示,赖氨酸的相对含量最为丰富,第一限制性氨基酸为含硫氨酸(蛋氨酸及胱氨酸);三疣梭子蟹的必需氨基酸(EAA)与总氨基酸(TAA)的比值(E/T)、与非必需氨基酸(NAA)的比值(E/N)皆高于FAO/WHO的评价标准,且野生蟹肌肉的E/T和E/N显著高于养殖蟹(P<0.05)。由此可知,三疣梭子蟹营养组成合理,且野生蟹品质优于养殖蟹。

坛紫菜体细胞单克隆叶状体途径及海上养殖

用海螺酶酶解坛紫菜叶状体制备游离的营养细胞,在显做镜下挑选出单个细胞放入96孔板,在20℃,1500～2000 lx,12D:12L条件下进行隔离培养。一部分细胞直接发育形成了叶状体:一种途径是单个细胞通过典型的两级分裂发育成叶状体,也有一些单细胞先形成叶片状的细胞团,然后在细胞团一端形成假根;另一种途径是部分单细胞先形成“愈伤组织”,经过一段时间培养后放散出类似“孢子”的细胞,其中部分“孢子”发育成叶状体。由单细胞克隆培养获得的叶状体经组织培养形成纯合丝状体,这种纯系丝状体扩大培养后转入传统的育苗途径下海养殖。纯系在苗网附着率、叶片质量和性成熟时间等经济性状方面比未经选育的普通种有优势。

河豚毒素及其发酵生产的研究进展

河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)常见于河豚体内,是一种毒性很强的氨基全氢化喹唑啉化合物。它是世界上最致命的生物毒素之一,同时也是对神经有选择性作用的强效麻醉药和戒毒良药。因此,科研人员在弄清TTX的产生途径及产生菌后,正在竭力研究其生产工艺及高产方式,以使其显著的医药学价值为人类所用。本文综述TTX的起源、理化性质及其生物活性等基本特性,并重点介绍近年的研究方向和热点问题,即TTX的产生菌和发酵生产等方面的研究。

黑鱾血液的生理生化指标研究

本文采用F-820半自动血细胞分析仪和全自动生化分析仪，对黑纪的血液常规指标及血清中的17项生化指标进行了分析测定，并用Wright’s染色法制作血涂片对白细胞进行分类计数．结果表明：（1）黑纪的血红细胞数量为（2．49±0．47）×10^12个／dm^3；白细胞数量为（1．08±0．21）×10^11个／dm^3；在白细胞中以嗜中性粒细胞数量最多，占52．42％±4．67％，其次为淋巴细胞，占25．72％±2．88％；单核细胞体积最大，占总数的3．27％±0．62％．（2）黑纪红细胞脆性大，抗性差，在0．65％～0．70％的NaCl溶液中开始溶血，在0．50％～0．55％的NaCl溶液中完全溶血．（3）黑纪的血红蛋白（HGB）为109．11±15．72g／dm^3，高于一般鱼类，与其较强的耐低氧生理能力相适应．（4）血清中血糖浓度为4．72±1．35mmol／dm^3，明显低于凶猛肉食性鱼类，与其岛礁性生态习性和杂食性相吻合．（5）雌雄鱼的乳酸脱氢酶分别为332．67±188．48U／dm^3和905．66±257．85U／dm^3，雌鱼显著高于雄鱼，可能与繁殖活动相关．

活水产品暂养及运输中的营养品质下降与安全问题初探

随着国民生活水平的提高,水产养殖业的不断发展,人们对水产品的消费也越来越多。同时,现代消费者的食品营养与安全意识日益增强,对水产品的质量也有了更高的要求,不再满足于冰鲜和冷冻水产品。大量活鲜的鱼类、虾类、蟹类、贝类源源不断地从产地销往全国各地。

黑魢(Girella leonina)淀粉酶与蛋白酶的活力研究

通过测定1＋龄黑鱾的胃、盲囊、肝脏和肠道4个消化组织中蛋白酶和淀粉酶活性，并研究其与温度及pH值的关系，可以为黑纪的合理投饵提供理论依据．实验设9个温度梯度（10～50℃）和14个pH缓冲液梯度（pH2．0～9．0），用淀粉-碘显色法测淀粉酶活力，用福林-酚试剂法测蛋白酶活力．结果表明：黑纪盲囊、肠道中淀粉酶和蛋白酶活力均较高，最适温度为35℃，淀粉酶最高活力为每克鲜组织46．02U和42．61U蛋白酶最高活力为每克鲜组织156．52u和147．79U；胃中酶的最适温度为40℃，肝脏中淀粉酶温度要求稍低，最适温度为30℃，酶活力值也最低；胃淀粉酶和胃蛋白酶最适pH值分别为6．5和3．5，盲囊、肠道和肝脏组织中的最适pH值相近，为7．0-8．0．可以认为黑鲍胃中主要存在着酸性蛋白酶，胃是食物蛋白质初步分解消化的场所；Q10值充分反映了温度对消化酶活力的影响，当温度从10℃上升至20℃时。2种消化酶活力增幅显著，可作为开始投饵的温度指标．

基因枪法建立紫菜丝状体遗传转化模式

以坛紫菜和条斑紫菜的自由丝状体为材料,利用基因枪法分别转化CaMV35S、SV40、FCP、Amt、Ubi 5种启动子与报告基因组合,转化后48h进行原位组织化学染色检测,首次针对重要经济红藻紫菜的自由丝状体建立并优化遗传转化技术,为紫菜研究提供了新工具。结果显示,SV40启动子可以驱动laeZ报告基因(编码β-半乳糖苷酶)在紫菜丝状体中的瞬间表达,空白与阴性对照未检测到本底;其它4种启动子未检测到基因表达。进一步优化实验发现,在可裂膜650psi、轰击距离6cm下获得最高转化效率为8.0×10^(-5),经定量检测与双因子方差分析,是最佳转化参数,提示基因枪参数对外源基因转化效率具显著影响。

嫁的齿舌带及其齿片的形态差异分析

在光镜和电镜下对嫁(Cellana toreuma)的齿舌形态进行观察研究。嫁的齿舌带每1横列具有2枚侧齿和2枚缘齿,缺乏中央齿,齿式为1.1.0.1.1。齿舌带前端弯曲,齿片排列松散且存在明显的磨损现象;中段齿片排列紧密、整齐;后端齿片无色且宽度有略微的缩小。侧齿呈镰刀型,具1个齿尖,基部呈三角形且具突起,尖齿部分细长;缘齿具3个齿尖,第2尖齿靠近第3尖齿。采用多个比例参数来比较嫁齿舌带及其前、中、后3段上的齿片形态,发现嫁齿舌带前、中、后3段各比例参数的值存在一定的关系,即中段大于前段、中段大于后段。

坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化

坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用。构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义。利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序。从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶SmaⅠ和NotⅠ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70。通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功。

凡纳滨对虾-缢蛏生态循环养殖池塘中浮游植物群落结构与水质因子相关性研究

为研究凡纳滨对虾(Litoperaaeus vannamei)与缢蛏(Siaoraovacula constricta)生态循环养殖过程中浮游植物群落结构及其与水质因子变化特征之间的相关性,本实验于2018年6月至11月在宁波市鄞州区椿霖养殖场对虾蛏循环养殖池塘中水质及浮游植物的动态开展了逐月采样监测,分析了养虾塘与养蛏塘中的浮游植物群落结构变化及水质因子变动。结果显示:(1)对虾养殖期间共鉴定出6个门101种浮游植物(包含9个未定种),从种的数量上来看,硅藻门>甲藻门>绿藻门>蓝藻门>裸藻门>隐藻门,其中包含优势种14种,养殖初期优势种为硅藻门的新月菱形藻(Nitzschia closteriu)、牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)等,随后甲藻门的海洋原甲藻(Prorocentrum micans)和绿藻门的小球藻(Chlorella vulgaris)等逐渐占据优势,后期仍以硅藻门为主要优势种。(2)浮游植物的丰度介于6.8×10~5-2.5×10~8cell/L,生物量为2.04-65.72mg/L,Shannon-Wiener多样性指数范围为1.34-2.56,均匀度指数范围为0.43-0.72,多样性水平较高,物种分布的均匀度较好。(3)对浮游植物群落结构与水质因子进行CCA分析后得到硅藻门种群变化主要与温度、盐度、pH密切相关(P<0.05);绿藻门种群优势受氮含量(总氮、亚硝酸盐氮、氨氮)的影响较大;而甲藻门、蓝藻门种类则与磷含量(总磷、活性磷)与温度相关。

坛紫菜叶状体的无菌化培养及其应用

对坛紫菜叶状体的无菌处理方法进行了优化,并利用紫菜外生菌对无菌处理后的紫菜叶片进行了人工感染。经0.7%KI和0.1%(w/v)氨苄青霉素对紫菜叶片进行预处理后,利用氨苄青霉素、硫酸链霉素、新霉素、庆大霉素及卡那霉素等5种抗生素及其不同组合对紫菜叶片进行处理,筛选出最佳抗生素组合、浓度和培养条件。结果表明:氨苄青霉素(终浓度300μg/mL)、卡那霉素(终浓度100μg/mL)与庆大霉素(终浓度100μg/mL)3种抗生素组合对坛紫菜叶状体进行无菌处理18 h,对紫菜细胞的毒害较小,并且3种抗生素合用对89.5%紫菜外生细菌的抑菌率达80%以上;外生菌感染结果研究表明:用105/mL真菌孢子液和细菌菌液回染紫菜,培养22 d后,实验组紫菜生长状况较对照组好,对照组紫菜出现褪色。用108/mL真菌孢子液分别回染健康紫菜、穿刺紫菜(用灭菌刀片在紫菜表面划1～2 mm的伤口),分别在18℃、28℃和35℃条件下培养。实验结果表明28℃和35℃高温和穿刺均会影响无菌紫菜健康生长,且加菌紫菜在高温和穿刺条件下,则会出现明显病斑,而18℃培养的加菌紫菜则生长良好。

基于权重赋值法与灰色聚类法评价虾蛏串联养殖池塘的生态修复效果

水产养殖业的尾水排放已成为水域生态环境的污染源之一,为探究凡纳滨对虾-缢蛏串联养殖模式的生态修复效果,对凡纳滨对虾-缢蛏串联养殖池塘的水生态进行周年跟踪测定,并采用权重赋值法与灰色聚类法对其生态修复效果进行评价。结果显示:串联模式下浮游植物的丰度介于6.8×10^(5)~2.5×10^(8)cell/L,生物量为2.04~65.72 mg/L,Shannon-Wiener多样性指数范围为1.34~2.56,均匀度指数范围为0.43~0.72,多样性水平较高,物种分布的均匀度较好;与传统虾蛏混养模式相比,虾蛏串联养殖模式对养殖池塘水生态环境有明显的修复作用。基于权重赋值法的生态修复效果评价表明,虾蛏串养模式的综合改善率为28.96%,生态修复目标综合值为0.6347,整体修复效果为良;灰色聚类法评价结果表明,虾蛏串联养殖模式的生态修复评价得分为1.6413,比传统虾蛏混养塘评价得分提高39.76%。因此,相比传统虾蛏混养模式,虾蛏串联养殖模式更加有利于维持池塘生态稳定,对养殖池塘水生态环境有明显的修复作用,这一结果为养殖尾水达标排放提供了一个新思路。

循环水养殖黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)水体中循环率对水质因子和细菌群落多样性的影响

为探讨循环水养殖系统中循环率对水质因子和细菌群落多样性的影响,以黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)为研究对象,研究了4次/天(低循环率)、8次/天(中循环率)、12次/天(高循环率)三个流量下,养殖桶和生物过滤桶两部分细菌群落结构、多样性以及细菌群落与环境因子的相关性。高通量测序结果表明:黑鲷循环水养殖中优势细菌类群为变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)和厚壁菌门(Firmicutes)。流量的升高可增加系统的细菌多样性,且高循环率过滤桶中具有净化水质降低营养盐功能的有益菌属更为多样化及丰度更高,同时,其系统去氨氮和总氮效果更好,去除率分别是49.5%和22.3%,氨氮去除率是低循环率组的2.9倍和中循环率的3.6倍,总氮去除率是低循环率组的8.2倍和中循环率组的20.5倍。PCoA分析和聚类分析结果表明,各实验组养殖桶与生物过滤桶中细菌群落组成有着明显的差异,中、高循环率组过滤桶菌落结构与低循环率的有明显的差异。环境因子与细菌群落结构相关性分析结果表明,总磷、活性磷酸盐、亚硝酸盐和总氮等指标对细菌群落结构影响相对较大,但未发现两者间有很显著的相关性。

养殖银鲳摄食人工颗粒饲料驯化方法

银鲳(Pampus argenteus)肉厚、刺少、味佳、营养丰富,并且经济价值高、市场需求旺盛,已成为我国名贵的海产品。然而20世纪90年代后,由于过度捕捞,其资源量出现明显下降,海洋捕捞产量长期维持零增长,加之海洋环境逐年恶化,银鲳资源衰退更为迅速。

水杨酸对浒苔生长和生理特性的影响

为探讨水杨酸(SA)对不同增殖方式来源的浒苔生长和生理特性的影响,本文选取营养繁殖得到的浒苔(VU)和孢子/配子繁殖得到的浒苔(SU)作为供试材料,设置不同的水杨酸浓度,测定两种浒苔的生长、叶绿素荧光、超氧化物歧化酶(SOD)和可溶性蛋白含量等生理指标.结果表明:低浓度水杨酸可以促进VU和SU的生长,对VU促进效果更为显著;在0.2μg·mL^(-1)水杨酸浓度下,VU相对生长速率达到最大值21.0%,且与SU相比,VU最大光化学效率提高了9.8%.水杨酸对两种浒苔的SOD活性影响较大,在水杨酸浓度为0.2、0.5μg·mL^(-1)下,VU的SOD活性增幅分别达52.0%、198.6%,SU的SOD活性增幅分别达54.1%、38.0%.水杨酸促进了浒苔的相对电子传递速率、光合作用和蛋白质含量.水杨酸对两种增殖方式来源的浒苔的生长均有促进作用,尤其是对VU的促进作用更为明显.