黄芪总皂苷调节Adora2b/IL-10信号通路抑制肝纤维化的实验研究

目的探究黄芪总皂苷调节腺苷A2b受体/白介素-10(Adora2b/IL-10)信号通路阻止肝纤维化进展的作用和机制。方法通过CCl4低剂量反复染毒的方法制备肝纤维化小鼠模型,给予黄芪总皂苷干预,并设立索拉菲尼阳性对照组,检测血清肝功能,HE染色观察肝组织炎症情况,Masson染色观察肝纤维化进展情况,免疫组化观察Col1蛋白表达情况,Western blot检测Adora2b、IL-10蛋白表达情况。结果模型组血清谷丙转氨酶(ALT)活性、总胆红素(TBiL)水平较正常组显著上升(P<0.01),黄芪总皂苷干预后能显著降低模型组ALT、TBiL水平(P<0.01)。HE染色和Masson染色显示,正常组小鼠肝组织无炎症和纤维化改变;模型组肝组织炎症细胞浸润明显,同时肝组织出现明显的纤维间隔;黄芪总皂苷干预后能显著改善组织炎症和肝纤维化进展。免疫组化结果显示,模型组小鼠肝组织的Col1蛋白表达较正常组显著增加(P<0.01),黄芪总皂苷干预后均能显著逆转这一变化。Western Blot结果显示,模型组小鼠肝组织Adora2b、IL-10蛋白表达较正常组显著降低(P<0.01);黄芪总皂苷干预后能显著逆转这一变化(P<0.01)。结论黄芪总皂苷显著阻止肝纤维化模型的肝纤维化进展,其机制可能与调节Adora2b/IL-10信号通路有关。

造血干细胞移植相关的移植物抗宿主病肠道菌群失调机制及治疗分析

造血干细胞移植(Hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是将自身或捐赠者身体中健康造血干细胞输注到受体体内的一种治疗方式,是治疗各种恶性肿瘤尤其是血液肿瘤最主要的方法[1]。但在某些情况下,接受HSCT治疗后患者会出现严重的不良反应,其中移植物抗宿主病(Graft versus-host disease,GvHD)是最严重的一种[2]。近年的研究发现HSCT治疗后GvHD等不良反应与肠道菌群之间存在密切的联系。GvHD患者肠道菌群的α多样性低于健康人[3]。

胃蛋白酶原和胃泌素-17在胃部疾病中的诊断价值

目的检测胃蛋白酶原和胃泌素-17在不同胃部疾病中的表达变化探讨其在不同胃部疾病中的诊断价值。方法收集行胃蛋白酶原和胃泌素-17检测并同时行胃镜检查患者850例,分析不同胃部疾病患者的胃蛋白酶原Ⅰ(PGI)、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ比值(PGR)及胃泌素-17(G-17)的表达水平。结果慢性萎缩性胃炎组、胃癌组PGI水平均低于非萎缩性胃炎组、消化性溃疡组消化性溃疡组PGⅡ水平均高于其他3组,慢性萎缩性胃炎组、胃癌组PGR均低于非萎缩性胃炎组、消化性溃疡组消化性溃疡组、胃癌组G-17水平均低于非萎缩性胃炎组、慢性萎缩性胃炎组(均P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示PGI检测慢性萎缩性胃炎的敏感度和特异度分别为82.08%、45.54%,检测胃癌的敏感度和特异度分别为67.12%、55.69%;PGR检测慢性萎缩性胃炎的敏感度和特异度分别为84.91%、62.77%,检测胃癌的敏感度和特异度分别为83.56%、74.46%;PGI联合PGR检测慢性萎缩性胃炎的敏感度和特异度分别为84.91%、65.85%,检测胃癌的敏感度和特异度分别为83.56%、76.00%。结论PGI、PGR对慢性萎缩性胃炎和胃癌的筛查具有较高的价值,对筛查阳性患者仍需胃镜及活检进行确诊。

粪菌移植治疗功能性便秘的动物实验研究进展

功能性便秘(FC)是消化系统的常见疾病之一,主要表现为排便困难、排便次数减少及大便干结等,但内镜下肉眼及病理结果提示无肠道器质性病变,且要求不符合便秘型肠易激综合征(IBS)的诊断标准。证据表明,肠道菌群紊乱在FC的发生发展中起重要作用^([1]),传统治疗手段对临床症状有缓解作用,但不能从病因上根除^([2])。粪菌移植(FMT)是将正常人的功能菌群植入患者的肠道中,重建正常的肠道菌群^([3])。

粪菌移植在慢性肝病中应用的研究进展

粪菌移植(FMT)是一种将健康供体的肠道微生物菌群移植到患者肠道内,全面地调节患者肠道菌群的治疗方式,用于重建或恢复部分肠道菌群稳态[1]。FMT作为重建肠道菌群的核心技术,除了针对肠道内疾病外,更多的研究投向了FMT对肠道外疾病的潜在治疗价值。肠道菌群已成为慢性肝病发生发展的重要因素,肠道细菌和它们的代谢物可以通过门静脉进入肝脏并影响其生理。

直肠癌手术中低位结扎肠系膜下动脉的争议

肠系膜下动脉(inferior mesenteric artery, IMA)的结扎是直肠癌手术中至关重要的一步,但其结扎水平却一直难以达成统一的认识。主要争议点是,关于术中左结肠动脉(left colic artery, LCA)是否保留,其吻合口漏发生率、IMA根部淋巴结(253站淋巴结)清扫、术中神经损伤及术后排便、排尿及性功能的影响等在各研究中心不能达成一致,这就造成了在手术时术者对于手术术式的选择难以形成统一的规范,因此不论对术者或是患者都会产生不同程度的影响。随着腹腔镜辅助下手术技术及高清镜、3D腹腔镜、4K高清镜、显微外科、三维CT血管造影技术的发展,之前术中的一些解剖难题及难以实施的精细手术操作也得到了很大程度的解决和改进,这些都为术者选择更加安全合理可行的术式提供了支撑。

优化肝癌治疗新策略——靶向菌群

肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌的常见类型,占85%以上。2020年全球新发肝癌病例数达91万例,死亡病例数83万例,预计到2040年,全球新发肝癌病例数将增加55.0%,达140万人,而死亡病例数将增加56.4%,达130万人^([1])。在我国,原发性肝癌尤其高发.

CC趋化因子配体2在肝纤维化进展中的作用及黄芪总皂苷的干预效应

目的探讨CC趋化因子配体2(CCL2)在肝纤维化进展及肝星状细胞(HSC)活化中的作用及黄芪总皂苷对其的干预效应。方法体内实验:制备四氯化碳(CCl4)小鼠肝纤维化模型,分别给予黄芪总皂苷及CCL2特异性抑制剂(Bindarit)进行干预,采集肝组织制作石蜡切片,行HE染色和Masson染色,观察组织炎症和胶原增生情况;q PCR和Western blot检测-平滑肌肌动蛋白(-SMA)、CCL2在肝组织的表达情况;免疫荧光染色后共聚焦显微镜观察-SMA、CCL2两者的共染情况。体外实验:培养小鼠HSC细胞系JS1细胞,予黄芪总皂苷及Bindarit干预24 h后,观察细胞-SMA、CCL2的表达变化。结果组织病理检测显示:Bindarit及黄芪总皂苷干预后肝组织炎症明显减轻,胶原沉积明显减少,肝组织-SMA、CCL2蛋白表达均低于模型组比较(均P<0.05);激光共聚焦观察显示:正常组CCL2与-SMA无明显共表达,模型组两者可见在汇管区和纤维间隔有较多共表达,Bindarit及黄芪总皂苷组共表达明显减少。体外实验显示:Bindarit及黄芪总皂苷均能抑制JS1细胞-SMA、CCL2的表达(均P<0.05)。结论 CCL2具有促进HSC活化及肝纤维化进展的作用,黄芪总皂苷抗肝纤维化的机制可能与抑制HSC内CCL2的表达有关。

环状RNA-42398通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制肝星状细胞活化

目的:探讨小鼠环状RNA-42398(mmucirc42398)对肝星状细胞活化的影响及机制是否与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。方法:小鼠肝星状细胞株JS1,分成正常对照组、空载体阴性对照组(vector组)和mmucirc42398过表达组(mmucirc42398组),体外构建mmucirc42398过表达载体,通过脂质体瞬时转染法转入JS1细胞,48 h后RT-qPCR检测mmucirc42398的表达变化,PCR产物经一代测序验证其环化位点,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达。结果:与vector组相比,mmucirc42398组的mmucirc42398表达增加(P<0.01),PCR产物测序验证了其环化位点,提示mmucirc42398过表达质粒成功转入JS1细胞并高效表达;在JS1细胞中过表达mmucirc42398后,α-SMA和Col I蛋白表达显著降低(P<0.01),TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达无显著变化(P>0.05),但p-Smad2和p-Smad3蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论:mmucirc42398能抑制肝星状细胞的活化,其机制与调控TGF-β1/smads信号通路有关。

孤儿核受体TR4在非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的表达变化及浙八味煎剂的干预作用

目的探讨孤儿核受体TR4在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型中的表达变化及浙八味煎剂的干预作用.方法采用MCD+CCL4诱导小鼠建立NAFLD体内实验模型,中药复方"浙八味煎剂"干预4周后,通过病理结果观察模型小鼠的组织炎症、胶原增生和脂质沉积情况,试剂盒检测肝功能和甘油三酯,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子表达情况,免疫组化及Western blotting检测TR4蛋白表达情况.结果浙八味煎剂干预小鼠模型后可以降低血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性水平(P<0.05),降低甘油三酯(TG)含量(P<0.05),降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)炎症因子表达水平.病理观察显示,浙八味煎剂能抑制模型小鼠肝脏的脂肪沉积和炎症反应.免疫组化和Western blotting结果显示,TR4在NAFLD模型小鼠肝组织中表达明显增多,浙八味煎剂干预后TR4蛋白表达较模型组降低水平.结论浙八味煎剂能抑制NAFLD的进展,阻止肝组织炎症和纤维化,其机制可能与抑制肝组织TR4表达存在关联.

环状RNA-42398在肝纤维化模型中的表达变化及功能

目的:明确环状RNA-42398(mmu_circ_42398)在肝纤维化动物模型肝组织和细胞模型中的表达变化,并初步探讨其生物学功能。方法:制备小鼠肝纤维化动物模型,复制小鼠肝星状细胞(JS1)活化模型、小鼠肝细胞(AML12)氧化应激损伤模型、小鼠巨噬细胞炎症(RAW264.7)模型,分别设立正常组,qPCR检测mmu_circ_42398在上述模型肝组织和细胞中的表达变化,进一步采用生物信息学方法预测其靶基因,分析其生物学功能,绘制其ceRNA信号通路网络图。为了验证其功能,构建mmu_circ_42398过表达载体,将其转染至JS1细胞,然后检测细胞内a-SMA、ColI蛋白的表达改变。结果:相比对照组,mmu_circ_42398在小鼠肝纤维化模型肝组织中表达显著降低(P<0.05),在JS1活化、AML12氧化应激损伤、RAW264.7炎症损伤3种细胞模型中表达均显著降低(P<0.05)。生物信息学分析预测mmu_circ_42398可能通过结合靶基因miR-338-3p从而影响肝星状细胞的活化。在JS-1细胞中过表达mmu_circ_42398后,a-SMA、ColI蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:mmu_circ_42398表达在肝纤维化模型中发生了明显变化,其可能通过抑制肝星状细胞的活化,参与了肝纤维化的进展。

非酒精性脂肪性肝纤维化动物模型的改良和建立

目的:构建一种较为简便可靠的非酒精性脂肪性肝纤维化(NASF)小鼠模型。方法:选择C57BL/6J雄性小鼠,采用蛋氨酸-胆碱缺乏饲料(MCD)联合每周1次腹腔注射10%CCl4-橄榄油溶液(剂量为2 mL/kg),造模第4周、第6周末处死动物采血和肝组织,检测各组血清肝功能(ALT、AST、TBIL)水平,血清和肝脏甘油三酯(TG)含量,观察各组肝组织HE染色、油红O染色、Masson染色情况,采用免疫组织化学方法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果:相比对照组,模型组小鼠血清ALT、AST、TBIL活性明显升高(P<0.01);肝脏TG含量显著增加(P<0.01);模型组肝组织出现广泛炎症反应、脂肪变性、胶原沉积;半定量分析显示,脂滴面积、胶原染色面积及α-SMA蛋白阳性表达面积显著增加(P<0.01);其中6周模型组较4周模型组病理改变更为明显。结论:采用MCD联合反复低剂量腹腔注射CCl4可成功建立NASF小鼠模型。

粪菌移植的临床应用之关键技术问题和发展趋势

粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)是一种将健康供体的肠道微生物菌群移植到患者肠道内,全面地调节患者肠道菌群的治疗方式,用于重建或恢复部分肠道菌群稳态。FMT作为重建肠道菌群的核心技术,越来越多的研究探索了其适应证、方法学、有效性、安全性和伦理学,除了针对肠道内疾病外,更多的研究投向了FMT对肠道外疾病的潜在治疗价值。本文就FMT技术的关键问题、热点问题和未来发展趋势等问题作一探讨。

妊娠期肝内胆汁淤积症胆汁酸的变化及其意义

妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是妊娠中晚期孕妇特有的疾病,对母体的影响主要以肝功能损害、皮肤瘙痒为主,随着胎儿及其附属物的娩出,临床症状可迅速缓解。ICP主要影响妊娠结局,易造成流产、早产、宫内窘迫,甚至胎死宫内。ICP孕妇产下的新生儿患有心肌炎及肺损伤的可能性也较大[1-2]。目前,临床诊断ICP主要根据患者的临床表现及实验室检查,但仍无法做到精准预测,血清总胆汁酸的测定为主要诊断依据,不过也存在局限性。该文主要针对胆汁酸的变化特点及其对母儿的影响、作用机制进行简单综述。

浙八味煎剂治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的实验研究

目的研究临床经验方"浙八味煎剂"对非酒精性脂肪性肝纤维化(NASF)小鼠模型的治疗作用。方法C57 BL/6J雄性小鼠,采用随机数字表法随机分为4组,正常组.模型组、浙八味煎剂高、低剂量组,每组8只。采用课题组改良的蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)结合反复低剂量腹腔注射CCI.制备动物模型。造模第3周首日开始予浙八味煎剂进行灌胃,6周末处死动物采血和肝组织,检测各组血清肝功能(ALT、AST、TBil)水平,血清和肝脏甘油三酯(TG)含量,观察各组肝组织HE染色、油红p染色、天狼猩红病理染色情况,采用免疫组化方法检测肝组织a-平滑肌肌动蛋白(x-SMA)表达情况。采用单因素方差分析和LSD检验方法进行数据分析。结果相对正常组,模型组小鼠血清ALT.AST.TBil活性及肝脏TG含量明显升高(均P<0.01);肝组织出现广泛炎症反应,油红0阳性染色、Masson胶原染色及aSMA蛋白阳性表达面积显著增加(均P<0.01);浙八味煎剂高剂量组显著降低血清ALT、AST、TBil活性及肝脏TG含量(均P<0.01).显著减少肝组织油红0阳性染色、Masson胶原染色及a-SMA蛋白阳性表达面积(均P<0.01)。结论“浙八味煎剂”对非酒精性脂肪性肝纤维化模型小鼠具有良好的治疗作用,抑制星状细胞活化可能是其部分机制。

LncRNA Linc00152靶向miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA Linc00152靶向调控miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR法检测正常胃黏膜细胞GES-1及4种胃癌细胞(MGC803、BGC803、SGC7901、AGS)中Linc00152的表达水平。MGC-803细胞分为pcDNA3.1-GFP-Linc00152组、pcDNA3.1-GFP组;AGS细胞分为si-Linc00152组、si-NC组,分别转染相应的Linc00152过表达和抑制载体。qRT-PCR法检测Linc00152、细胞周期素D1(cyclin D1,CCND1)和miR-193a-3p基因的表达水平,CCK-8检测细胞的活性,细胞克隆试验检测细胞的克隆能力,Annexin VFITC/PI染色后采用流式细胞术检测转染细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭,荧光素酶报告试验检测Linc00152和miR-193a-3p靶向关系,Western blotting检测Bcl-2、Bax、CCND1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。并将si-Linc00152组、si-NC组细胞接种裸鼠,观察裸鼠体质量和一般状态,处死后称重记录肿瘤体积、质量,qRT-PCR法测定肿瘤组织Linc00152、CCND1和miR-193a-3p的表达水平。结果 与GES-1细胞相比,胃癌细胞MGC803、BGC803、SGC7901、AGS中Linc00152的表达升高,其中Linc00152在胃癌MGC803细胞中表达较低,而在胃癌AGS细胞中的表达较高,选用胃癌MGC803、AGS细胞进行后续试验。与pcDNA3.1-GFP组相比,pcDNA3.1-GFP-Linc00152组细胞的活性显著升高,克隆能力增强,细胞凋亡减少,侵袭能力显著上升,CCND1、Bcl-2、波形蛋白的表达显著升高,miR-193a-3p和E-钙黏蛋白的表达显著降低。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,Linc00152可直接调控miR-193a-3p的转录活性,且Linc00152可显著上调MGC-803细胞CCND1蛋白表达。与si-NC组相比,si-Linc00152组的裸鼠体内的异种移植瘤体积和体质量显著下降,CCND1和Linc00152的表达显著下降,miR-193a-3p的表达显著上升。结论 Linc00152可靶向作用于miR-193a-3p促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与细胞周期、上皮细胞间充质转化以及细胞凋亡有关。

巨噬细胞来源外泌体促进肝星状细胞活化及对血小板衍生生长因子表达的影响

目的探究巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞活化的作用及其可能的机制。方法采用差异超速离心法提取巨噬细胞外泌体,将外泌体与小鼠肝星状细胞株JS1细胞共培养,设立磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。细胞免疫荧光观察F-actin表达情况,细胞活力检测(CCK8)法检测两组JS1细胞的存活率,western blot和RT-PCR法检测两组JS1细胞的活化指标[Ⅰ胶型原蛋白(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]及其关键信号通路激活指标[转化生长因子(TGF)-β1/Smads、血小板衍生生长因子(PDGF)]的表达水平。两组间数据比较采用独立样本t检验。结果透射电镜观察外泌体膜结构清晰,外泌体标志蛋白CD63、CD81表达阳性,提示外泌体提取成功。外泌体与JS1细胞共培养,与PBS对照组比较,外泌体组JS1细胞的增殖率差异无统计学意义(P>0.05);外泌体组细胞F-actin表达明显增多;外泌体组JS1细胞α-SMA和ColⅠ的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P值均<0.05),PBS组和外泌体组α-SMA的mRNA相对表达量分别为0.25±0.07、1.43±0.19,ColⅠ的mRNA相对表达量分别为1.03±0.04、1.57±0.06;外泌体组JS1细胞PDGF的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),PBS组和外泌体组PDGF的mRNA相对表达量分别为0.27±0.04、1.65±0.12;两组细胞的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论巨噬细胞来源的外泌体显著促进肝星状细胞活化,其机制可能与上调JS1细胞内PDGF的表达有关。

环状RNA在结直肠癌中的作用

环状RNA作为一种新型RNA,广泛存在于真核细胞中,是具有稳定闭合环结构的RNA分子。环状RNA因其表达特异性、稳定性成为肿瘤研究领域的热点。环状RNA参与了结直肠癌细胞增殖、凋亡、转移等病理过程,与结直肠癌的发生发展、治疗、预后预测及耐药性密切相关。本文介绍了环状RNA的生物特性、生物学功能及其在结直肠癌领域的最新研究进展,旨在初步明确结直肠癌的发病机制,发现新的诊断、预后生物标志物及治疗靶点,为改善耐药性及发展精确医疗提供新的思路。