宁波部分地区11914例新生儿耳聋基因筛查结果分析

目的 通过分析宁波部分地区新生儿常见耳聋基因的突变类型和突变频率,为临床耳聋基因检测及病因诊断提供参考依据。方法 采集2019年12月~2022年5月在宁波市妇女儿童医院出生的11 914例新生儿的足跟血片,应用荧光聚合酶链反应熔解曲线法对我国常见的4种耳聋基因GJB2(c.35delG、c.176-191del16、c.235delC和c.299-300delAT)、SLC26A4(c.919-2A>G、c.1226G>A、c.1707+5G>A、c.2027T>A、c.1229C>T、c.2168A>G、c.1975G>C和c.1174A>T)、GJB3(c.538C>T)和线粒体12SrRNA(m.1494C>T和m.1555A>G)进行检测。结果 在11 914例新生儿中,检出基因突变586例,检出率为4.92%;其中GJB2基因突变306例(2.57%),GJB3基因突变30例(0.25%),SLC26A4基因突变219例(1.84%),线粒体12S rRNA基因突变23例(0.19%);另有8例新生儿携带2种基因的突变位点(0.07%)。GJB2基因c.235delC检出率最高,占1.98%,其次是SLC26A4基因c.919-2A>G,占1.19%。10例耳聋基因突变的新生儿在后期随访中确诊听力异常。结论 宁波部分地区新生儿耳聋基因突变以GJB2基因突变为主,其中GJB2基因c.235delC和SLC26A4基因c.919-2A>G是该部分地区新生儿最常见的2种突变位点。开展新生儿耳聋基因筛查对于耳聋早期预防及病因诊断具有重要的意义。

肥胖儿童血清生化指标的代谢改变研究

目的 分析肥胖儿童血清生化指标的代谢改变及意义。方法 选取2022年1月至10月在宁波市妇女儿童医院就诊的70例肥胖儿童作为肥胖组,同时选取55名健康儿童作为对照组。采集受试者5ml空腹静脉血,离心分离血清后进行肝、肾功能实验室生化检查,包括白蛋白(albumin,ALB)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,CRE)、直接胆红素(directbilirubin,DBIL)、谷氨酰转移酶(glutamyltransferase,GGT)、球蛋白(globulin,GLO)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBIL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总胆固醇(total cholesterol,TCH)、三酰甘油(triglycerides,TG)、血清总蛋白(total protein,TP)、尿酸(uric acid,UA)水平及白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)、AST/ALT和BUN/CRE。结果 肥胖组儿童的血清ALB、ALP、ALT、AST、CRE、GGT、LDL、TCH、TG、TP和UA水平均升高,AST/ALT、BUN/CRE和HDL降低,差异有统计学意义(P<0.05);A/G、BUN、DBIL、GLO、IBIL和TBIL差异无统计学意义(P>0.05)。主成份分析及偏最小二乘判别分析模型比较两组儿童的差异,其中AST/ALT、UA和ALT对区分贡献最大;体质量指数与AST/ALT呈负相关(r=–0.327,P<0.05),与UA水平呈显著正相关(r=0.410,P<0.01)。结论 肥胖儿童存在明显的肝、肾功能受损,与健康儿童存在显著的代谢差异,其中以AST/ALT、UA指标差异最为显著。

KCNQ2基因变异相关癫痫的研究进展

KCNQ2基因编码电压门控钾离子通道亚基Kv7.2,该通道在稳定神经元、调节神经元兴奋性中发挥重要作用。KCNQ2基因变异导致电压门控钾离子通道功能受损或功能异常,从而诱发癫痫发作。KCNQ2基因变异相关癫痫患儿的发病时间早,多发病于新生儿期或婴儿早期,且临床表现具有多样性。本文对KCNQ2基因变异相关癫痫的发病机制、临床表现、变异特点及临床治疗等研究进展进行综述,以便早期发现此类癫痫患儿,指导临床诊疗工作。

宁波地区新生儿G6PD缺乏症基因突变特点及与酶活性的相关性分析

目的分析宁波地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症基因突变频率探讨基因型与酶活性相关性。方法收集新生儿78 338例,免疫荧光法行G6PD酶活性筛查;筛查阳性用比值法确诊,同时用多色熔解曲线分析(MMCA)法检测热点基因突变,如果没有发现热点突变,则对G6PD编码外显子进行Sanger测序(NM_001042351.1);同一筛查时间段内酶活性介于2.6~3.0U/g Hb的女性样本也纳入基因突变检测。结果 78338例新生儿G6PD筛查中酶活性≤2.6U/g Hb的阳性例数为405例,2.6~3.0U/g Hb之间的女性95例共500例样本纳入基因检测。其中男290例,女210例。检出280例不同位点突变,前三位分别为1388G>A(30.71%)、1376G>T(27.50%)、1024C>T(16.43%)。2例MMCA阴性样本经测序发现为1375C> T、350C> T突变。宁波地区G6PD新生儿人群突变携带率达0.36%(280/78 338)。结论宁波地区新生儿G6PD基因人群突变携带率较高新,生儿G6PD酶活性筛查应区分性别设定截断值,不同突变位点酶活性降低程度不同。

宁波新生儿遗传性耳聋基因突变1781例分析

目的分析宁波市遗传性耳聋基因的突变类型和频率。方法2019年1月至9月,对在宁波市妇女儿童医院出生的1781例新生儿进行耳聋基因筛查,包括4个常见基因位点,22个突变热点。结果共检出耳聋基因突变104例(5.84%),其中男性59例,女性45例。GJB2基因突变率3.31%(59/1781),GJB3基因突变率0.56%(10/1781),mtDNA基因突变率0.39%(7/1781),SLC26A4基因突变率1.57%(28/1781)。结论宁波新生儿耳聋基因总突变率稍高于全国水平,GJB2基因突变尤为突出,应加强新生儿耳聋基因筛查。

与儿童哮喘相关的易感基因的研究进展

支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是一种遗传和环境因素相互作用导致的多基因遗传病。前基因时代,定位克隆法与候选基因法发现的重率高且有价值的易感基因共25个。伴随人类基因组技术的发展,全基因组关联研究广泛应用,众多哮喘易感基因位点相继被发现,且基因位点共同作用能增加易感风险。尽管基因对哮喘及其相关性状有重要作用,但多种环境暴露也同样影响哮喘的发生。该文就儿童哮喘易感基因研究方法、近年来发现的主要易感基因、基因位点间交互作用及环境因素等作一综述。

心-面-皮肤综合征合并耳聋患儿基因变异1例报道

本文报道2020年9月13日宁波市妇女儿童医院收治的1例MAP2K1基因变异及GJB2基因变异引起的心-面-皮肤综合征合并耳聋患儿。该患儿女,9个月,表现为多发畸形(特殊面容、心脏畸形、胸廓畸形等)、生长发育迟缓及其他系统的临床表现等。全外显子组测序发现患儿MAP2K1基因c.383G>T(p.Gly128Val)杂合变异,还存在GJB2基因c.109G>A(p.V37I)和c.187G>T(p.V63L)复合杂合变异。分析心-面-皮肤综合征合并耳聋的临床特点及基因变异特征,丰富了该病的表型谱和致病变异谱。

宁波市地中海贫血筛查及基因分型

目的了解宁波市人群地中海贫血(简称地贫)基因分型情况,为今后宁波市地贫防控提供参考依据。方法选取2019年1月至2022年3月在宁波市妇女儿童医院就诊的疑似地贫患者为研究对象,采集末梢血制成干血斑标本并提取DNA。采用荧光PCR熔解曲线分析技术结合Sanger测序或多重连接依赖探针扩增(MLPA)进行地贫热点变异基因检测。结果共纳入疑似地贫患者2680例,检出地贫基因携带者1426例,总检出率为53.2%。其中,α-地贫595例,占41.7%,以--SEA/αα、αα/-α3.7和--SEA/-α3.7较常见;β-地贫807例,占56.6%,以βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD41-42/βN、βCD17/βN较常见;αβ-复合型地贫24例,占1.7%。其中,包括6种罕见变异类型,包括融合基因(Fusion)、--FIL、HBA2:c.376C>T、CD8/9(+G)、IVS-Ⅰ-2(T>C)和IVS-Ⅱ-1(G>A),均为宁波市的首次报道。结论宁波市疑似地贫患者中,地贫检出率较高,基因变异类型复杂,应提高对贫血患者行地贫基因检测的意识。

Cowden综合征1型1例患儿的临床表型与遗传学分析

目的探讨1例Cowden综合征1型(CS1)患儿的遗传学原因,明确其致病原因。方法选取2022年8月26日在宁波市妇女儿童医院就诊的1例CS1患儿作为研究对象,收集患儿的临床资料。采集外周血样提取DNA,进行全外显子组测序(WES),并通过Sanger测序技术对候选变异进行验证。结果患儿为13岁男性,表现为智力严重低下,精神异常亢奋、自闭症行为,牙齿稀疏且突出,巨头畸形和阴茎头色素性斑点斑。患儿母亲主要表现为多发处乳头状丘疹,错构瘤形息肉,甲状腺腺瘤和巨头畸形。WES检测结果提示患儿携带PTEN基因c.781C>T(p.Q261*)杂合变异,遗传自母亲。依据美国医学遗传学和基因组学学会指南,c.781C>T变异评判为可能致病性变异(PVS1+PM2Supporting)。结论PTEN基因c.781C>T变异考虑为该CS1患儿及其母亲的致病原因,上述发现有助于对该家系进行遗传咨询。

中国人群腺苷脱氨酶2缺乏症致病基因携带者筛查

目的分析中国人群腺苷脱氨酶2缺乏症(deficiency of adenosine deaminase 2,DADA2)致病基因频率,为有效开展中国人群DADA2的防控和干预工作提供依据。方法回顾性分析2015年1月至2021年1月于北京智因东方转化医学研究中心有限公司进行全外显子组测序的11.1万例原始数据,对ADA2基因致病和可能致病性突变进行携带者筛查,分析ADA2基因杂合突变的类型和等位基因频率。结果发现29种ADA2基因致病和可能致病性杂合突变,其中6种[c.730G>T(p.E244X)、c.1049_c.1061 delAGCTGCCTTACTT(p.K350Tfs*14)、c.940A>T(p.K314X)、c.1239+2(IVS8)T>C、c.1240-1(IVS8)G>A、c.1087C>T(p.Q363X)]既往未见报道,等位基因累计频率为0.58%。人群基因频率最高的为p.F355L(0.5%),其次为p.Y453C(0.014%)和p.P193L(0.013%),其他26种位点均小于0.01%,为罕见突变位点。结论通过筛查丰富了ADA2基因突变谱,明确了中国地区人群的ADA2基因突变的携带率约1/171,推测中国人群的DADA2患病率约1/116964。

胎儿游离DNA浓度低的影响因素及其与妊娠结局的关系

无创产前检测(non-invasive prenatal testing, NIPT)在21三体、18三体和13三体都具有较高的特异性和敏感性,甚至在其他常染色体非整倍体、性染色体非整倍体和微缺失/微重复综合征中也有较高的阳性预测值。NIPT检测的准确性取决于胎儿游离DNA浓度(fetal fraction, FF)。FF与采样孕周呈正相关,与孕妇体重或BMI呈负相关。孕妇年龄、受孕方式、母体血清标志物和胎儿非整倍体均可影响FF。此外,低胎儿游离DNA浓度(low fetal fraction, LFF)还可增加不良妊娠结局风险,如胎儿非整倍体、染色体变异和妊娠并发症等。在临床进行NIPT检测时,应重视FF孕妇。对于两次LFF孕妇,应建议进行后续的遗传咨询和侵入性产前诊断。

13个哮喘易感基因型在宁波地区儿童哮喘的分布研究及新预测模型的建立

目的研究基于GWAS分析方法发现的9个哮喘易感基因位点IL1RL1(rs1420101)、TSLP(rs10455025)、HLA-DQA1(rs9272346)、IL33(rs992969)、SMAD3(rs2033784)、ERBB2(rs2952156)、ZPBP2(rs11557467)、GSDMB(rs2290400)、ORMDL3(rs4795405)及4个既往成熟的儿童哮喘易感基因4位点IL13(rs20541)、IL4(rs2243250)、ADRB2(rs1042713)、FCER1B(rs569108)在宁波地区儿童哮喘的分布研究,探索易感基因位点的相关性并建立新的儿童哮喘易感基因预测模型。方法采用荧光探针熔解曲线法对哮喘实验组293例和正常对照组214例(134例健康儿童和80例健康成人)进行13个易感基因位点基因型分型,并比较不同基因型和等位基因频率与宁波地区儿童哮喘的相关性;比较13个基因位点与宁波地区儿童哮喘IgE阳性组(n=81)和IgE阴性组(n=79)的相关性;应用R语言运行REGENT建立新的儿童哮喘易感基因预测模型,并验证准确性。结果IL1RL1(rs1420101)位点存在突变的TC基因型和TT基因型组合频率高于对照组(P<0.05),IL1RL1(rs1420101)位点T等位基因频率高于对照组(P<0.05);IgE阳性组TSLP(rs10455025)位点存在突变的CA和CC基因型频率低于IgE阴性组(P<0.05);13位点哮喘易感基因预测模型应用R语言运行REGENT预测风险值,以风险值0.915作为区分高低危得到预测指标:准确度60.8%,特异度49.1%,χ2为4.852,P为0.028,OR(95%CI)为1.491(1.044~2.129)。结论IL1RL1(rs1420101)位点与宁波地区儿童哮喘易感存在相关性。TSLP(rs10455025)位点与宁波地区IgE阴性的儿童哮喘存在相关性。由13位点建立的哮喘易感基因预测模型具有一定的哮喘预测效能。

新生儿基因筛查在遗传性疾病中的应用进展

近年来,随着分子生物学的快速发展,高通量测序(next generation sequencing,NGS)等基因检测技术在遗传性疾病筛查诊断领域有极高的应用价值,特别是在新生儿疾病防治方面。新生儿基因筛查旨在早期发现新生儿患遗传性疾病风险,为临床诊断和治疗提供依据。本文综述新生儿基因筛查作为一级筛查在基因表型明确的单基因遗传性疾病(遗传性耳聋、脊髓性肌萎缩症、地中海贫血、原发性免疫缺陷及进行性假肥大性肌营养不良等)中的应用、作为二级筛查联合生化筛查在遗传代谢性疾病中的应用及其在重症监护病房危重症新生儿疾病诊断中的应用。

宁波市儿童地中海贫血基因变异分析及其与红细胞参数的相关性

目的探究宁波市儿童地中海贫血基因变异类型及构成,并分析其与红细胞参数的相关性。方法以2019年1月至2020年12月在宁波市妇女儿童医院进行地中海贫血基因检测的785例儿童作为回顾性研究对象,分析当地儿童地中海贫血基因变异类型及构成情况;并从中选取地中海贫血基因变异携带者238例和同期体检的健康儿童100例(对照组)进行血常规检测,分析地中海贫血基因突变类型与血液学指标的相关性。结果在进行地中海贫血基因检测的785例儿童中,共有571例确诊为地中海贫血基因变异携带者,检出率为72.7%,包括α-地中海贫血228例、β-地中海贫血337例、αβ-复合型地中海贫血6例,涵盖17种变异类型、25种基因组合形式。对照组、α-地中海贫血组和β-地中海贫血组的红细胞计数(RBC)、红细胞比容(HCT)、血红蛋白浓度(Hb)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞体积(MCV)和红细胞分布宽度(RDW)比较,差异均有统计学意义(H/F=125.03、86.24、141.06、192.99、121.46、198.63、178.06,P均<0.001);本次检测中常见的4种基因型--^(SEA)/αα、β^(IVS-Ⅱ-654)/β^(N)、β^(CD41-42)/β^(N)、β^(CD17)/β^(N)患儿HCT、Hb、MCH、MCV和RDW比较,差异均有统计学意义(F=5.03、3.34、6.24、10.33、6.83,P均<0.05)。结论宁波市儿童地中海贫血基因型具有多样性,不同基因型的红细胞参数差异较大。

MYH3基因p.R672C变异致Freeman-Burian综合征一家系

先证者,女,29岁,身高150 cm,双手屈曲挛缩,指骨向尺侧偏,眼距宽,嘴巴小,呈"吹口哨"面容,智力正常(图1A~1D)。孕2产0,第1胎孕早期自然流产,第2胎孕24周超声检查胎儿双手始终呈握拳状,略呈重叠指,羊水过多,选择终止妊娠。先证者父亲双手挛缩,面容与先证者类似(图1E~1F)。

非单纯性睑-唇-齿综合征一个家系的遗传学分析

目的探讨1个非单纯性睑-唇-齿综合征(BCDS)家系的遗传学病因。方法选取2020年9月28日于宁波市妇女儿童医院就诊的1个BCDS家系为研究对象。通过全外显子组测序对胎儿及其父母和哥哥进行基因与拷贝数变异(CNVs)分析,用Sanger测序和实时荧光定量PCR(qPCR)分别对结果进行验证。结果胎儿及其哥哥、父亲、祖父均携带CTNND1基因c.83delG(p.A29Rfs*55)杂合变异,既往未见报道。此外,胎儿的哥哥还携带母源性GJB2基因c.235delC(p.L79Cfs*3)和父源性GJB3基因c.538C>T(p.R180X)双杂合变异;CNVs分析发现母亲17q12区存在1.46 Mb缺失,涉及HNF1B、ZNHIT3等16个OMIM基因,对胎儿的外祖父母进行qPCR验证,证实为新发变异。根据美国医学遗传学和基因组学学会相关指南,c.83delG及c.235delC均评判为致病性变异(PVS1+PP1_Moderate+PM2_Supporting,PVS1+PM3_VeryStrong+PS3_Moderate);c.538C>T评判为意义不明变异(PS3+PM2_Supporting);17q12微缺失评判为致病性(pathogenic,total score:1.0)。结论CTNND1基因c.83delG(p.A29Rfs*55)变异可能是该非单纯性BCDS家系的遗传学病因。GJB2基因c.235delC和GJB3基因c.538C>T变异可能为哥哥耳聋的致病原因。17q12微缺失可能为母亲双肾囊肿的致病原因。上述发现为该家系的遗传咨询和再生育提供了指导。

宁波地区腺苷脱氨酶2缺乏症致病基因携带者筛查

目的分析宁波地区腺苷脱氨酶2缺乏症(DADA2)致病基因ADA2携带率,为宁波地区DADA2的诊治提供循证医学依据。方法采用回顾性分析方法对宁波市妇女儿童医院2019年01月至2023年01月的4039例进行全外显子组测序受检者的原始数据进行ADA2基因致病和可能致病性变异携带者筛查,分析致病基因携带者变异的类型和携带率。结果共发现46例ADA2基因致病性杂合变异携带者,总携带率为1.15%(46/4039),8种不同的变异类型包括c.1065C>A(p.F355L)、c.1380G>C(p.M460I)、c.916C>T(p.R306X)、c.629T>A(p.I210N)、c.321delA(p.A109Lfs*11)、c.1358A>G(p.Y453C)、c.278T>C(p.I93T)和c.139G>T(p.G47W)。其中p.F355L人群携带率最高为0.79%(32/4039),其次为p.M460I和p.R306X位点,人群携率分别为0.10%和0.07%,其他5种变异位点携带率≤0.05%,为罕见变异位点。结论通过筛查明确了宁波地区人群的ADA2基因变异的携带率约为1/172,推测宁波地区人群DADA2的患病率约为1/118336。

3号染色体三体、嵌合及单亲二体的临床特征及遗传咨询

3号染色体属于中着丝粒染色体,可由于减数分裂后期同源染色体不分离,或减数分裂末期和有丝分裂后期姐妹染色单体不分离,导致三体及嵌合型三体。完全型的3号染色体三体(trisomy3)极其少见,在妊娠早期自然流产标本中核型检出率约占0.8%,目前在活产儿中尚未见报道。3号染色体三体主要以嵌合方式存在,嵌合型3号染色体三体是一种较为罕见的常染色体异常,多见于宫内生长受限、身材矮小、骨骼发育异常等先天性发育异常,也有正常存活无异常临床表型的报道;3号染色体单亲二体的相关报道较少。本综述综合既往的文献、数据库等数据,对3号染色体三体、嵌合型3号染色体三体、母源性及父源性3号染色体单亲二体的产生机制、发生率、临床表型、相关治疗、预后及再发风险等进行总结,以期对3号染色体产前遗传学诊断及遗传咨询提供帮助。

全外显子组测序发现1例TFAP2A基因新发变异导致的胎儿腮-眼-面综合征

目的 对1例孕期提示颈背部皱褶厚度(NF)增厚,多囊肾,羊水过少的胎儿流产物进行基因芯片检测以及全外显子组测序以明确其病因。方法 使用超声观察先证者的结构和器官,使用基因芯片(CMA)和全外显子组测序(WES)检测先证者流产物的皮肤组织,提取父母静脉血2mL对胎儿表型相关变异位点进行Sanger测序验证。结果 产前超声提示先证者的NF厚度为9.3 mm,其肾脏表现为肥大和多囊,颈部有水囊瘤,CMA结果无异常,WES发现胎儿TFAP2A基因4号外显子存在可能致病性杂合变异NM_001042425:c.637C>T(p.Arg213Cys),Sanger测序提示该变异为新发变异。结论 结合超声影像和WES的结果,胎儿被诊断为胎儿腮-眼-面综合征(BOFS;OMIM:113620),病因为TFAP2A基因的可能致病性杂合变异。对胎儿全外显子组测序将成为超声发现异常后进行产前诊断的重要手段。

Kabuki综合征患儿2例的基因变异及临床表型分析

目的探讨2例KMT2D基因变异所致Kabuki综合征(KS)的患儿,并总结其临床特征与基因变异的特点。方法以分别于2021年8月19日和11月10日就诊于宁波市妇女儿童医院的2例KS患儿作为研究对象,收集其临床资料,对其进行全外显子组测序(WES),并对候选变异进行Sanger测序家系验证。结果2例患儿均表现为运动、语言发育迟缓、特殊面容、智力障碍等。WES检测发现其分别携带KMT2D基因的c.10205del(p.Leu3402Argfs*3)及c.5104C>T(p.Arg1702*)杂合变异,根据美国医学遗传学和基因组学学会相关指南均评估为致病性变异(PVS1+PM6+PM2_Supporting+PP4)。结论KMT2D基因的c.10205del(p.Leu3402Argfs*3)和c.5104C>T(p.Arg1702*)新发变异可能是2例KS患儿的遗传学病因。上述发现不仅为临床确诊和遗传咨询提供了依据,并且丰富了KMT2D基因的变异谱。