宁波市第二医院住院患者产ESBLs大肠埃希菌耐药性及基因型研究

目的 了解宁波市第二医院住院患者病原菌培养中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药情况及ESBLs基因分布情况。方法 收集2013-12-2014-05病原菌培养中分离的产ESBLs大肠埃希菌并分析耐药结果,以PCR法扩增ESBLs耐药基因并测序分析。结果 75株产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林完全耐药,对第三代头孢菌素、喹诺酮类、氨基糖苷类药物耐药率较高,多重耐药问题严重。PCR扩增阳性基因包括TEM、CT×-M-9组、CT×-M-1组、OXA-1组、SHV、OXA-10组,检出率分别为85.33%(64株)、81.33%(61株)、49.33%(37株)、10.67%(8株)、5.33%(4株)、4.00%(3株)。64株TEM基因均为TEM-1亚型。CT×-M基因中CT×-M-14、CT×-M-55检出率最高,分别为61.33%(46株)、29.33%(22株),还检出较少基因亚型CT×-M-3、CT×-M-15、CT×-M-24、CT×-M-27、CT×-M-65、CT×-M-69、CT×-M-79。8株OXA-1组基因均为OXA-1亚型,4株SHV基因均为SHV-12亚型,3株OXA-10基因均为OXA-10亚型。结论 宁波市第二医院病原菌培养中分离的产ESBLs大肠埃希菌耐药情况较严重;ESBLs基因型以CT×-M-14最常见。

自体外周血干细胞移植对乙型肝炎肝硬化失代偿期吲哚氰绿滞留率的影响分析

目的观察自体外周血干细胞移植治疗对乙型肝炎肝硬化失代偿期患者吲哚氰绿滞留率的影响。方法采用前瞻性、随机对照分组法,将60例乙型肝炎肝硬化失代偿期患者分成两组,每组30例,一组为移植组,在接受综合内科治疗的基础上接受自体外周血干细胞移植治疗,一组对照组,仅接受综合内科治疗。观察自体外周血干细胞移植后12周、24周、36周、48周症状和体征变化、血总胆红素(TBil)、凝血酶原活动度(PTA)、白蛋白(Alb)水平、吲哚氰绿15 min滞留率(ICG R15)的变化以及移植后的副反应、肿瘤发生率等,并与移植治疗前及同期对照组比较。结果外周血干细胞移植治疗后,大多数患者腹水等症状改善,未出现严重不良反应;移植后24周、36周、48周Alb水平、PTA与移植前及对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),移植后36周、48周ICG R15与移植前及12周比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论自体外周血干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期患者安全、有效。

免疫化学联合疗法治疗中晚期非小细胞肺癌的Meta分析

目的系统评价树突状细胞共培养细胞因子诱导的杀伤细胞(Dendritic cell-cytokine-induced killer cell,DC-CIK)联合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)的临床疗效及安全性,同时评价患者的生存质量及免疫功能。方法计算机检索PubMed、Cochrane Library、CNKI、维普和万方数据库,并辅手工检索,收集所有DC-CIK联合化疗与单纯化疗治疗中晚期NSCLC的随机对照试验(randomized controlled trials,RCT)。结合研究特点对纳入研究进行质量评价后,采用RevMan 5.2和Stata 12.0软件分别进行Meta分析和发表偏倚分析。结果共纳入11个RCT,769例患者。Meta分析结果显示,与单纯化疗组比较,DC-CIK联合化疗组生存率(overall survival,OS)、临床疗效[客观反应率(objective response rate,ORR)及疾病控制率(disease control rate,DCR)]、生存质量[Karnofsky(KPS)评分提高率]及免疫功能(治疗后血清中T淋巴细胞亚型CD3+、CD4+与CD4+/CD8+)均有所提高,且差异有统计学意义;两组在安全性(骨髓抑制、消化道反应与肝肾功能损害发生率)方面的差异无统计学意义。生存率和临床疗效观察指标显示无发表偏倚。结论在中晚期NSCLC治疗中,与单纯化疗比较,DC-CIK联合化疗能提高生存率和临床疗效,未增加严重的不良反应,同时有改善患者生活质量和免疫功能的趋势。

三维路径图引导在颅内动脉瘤介入治疗中的应用

目的探讨平板旋转血管造影结合三维路径图在颅内动脉瘤介入治疗进程中的价值。方法将40例确诊颅内动脉瘤并行介入治疗的患者分成两组,二维组(在二维路径图引导下行弹簧圈填塞)20例,三维组(在三维路径图引导下行弹簧圈填塞)20例。比较两组在手术时间、X线辐射剂量、透视时间上的差异。结果三维组手术时间(39.15±9.96)min明显少于二维组[(54.40±7.70)min],两者差异有统计学意义(t=-5.415,P=0.000);三维组X射线辐射剂量(184 902.4±53 479.4)mGy.cm2明显少于二维组[(239 734.5±48 555.2)mGy.cm2],两者差异有统计学意义(t=-3.395,P=0.002);三维组透视时间(840.35±381.7)s明显少于二维组[(1 161.45±503.25)s],两者差异有统计学意义(t=-2.273,P=0.029)。结论应用三维路径图引导进行颅内动脉瘤介入治疗有助于减少手术时间、透视时间、X射线辐射剂量。

PIAS1与肿瘤

PIAS1(protein inhibitor of activated signal transducer and activators of transcription 1)蛋白是一种可以抑制信号转导与转录激活子1(signal transducer and activators of transcription 1,STAT1)的特异性抑制蛋白,也具有小泛素样修饰剂(small ubiquitin-like modifier,SUMO)连接酶E3的活性,参与多种转录因子的活性调控和多种蛋白质的SUMO化修饰。PIAS1在肿瘤的发生发展过程中是一把"双刃剑",既有促进作用,也有抑制作用。PIAS1在肺癌、前列腺癌、乳腺癌、淋巴瘤等组织中高表达,可以通过促进肿瘤细胞的增殖和转移,抑制肿瘤细胞的凋亡作用,来调控肿瘤的发生发展;但是PIAS1在胃癌、结肠癌等组织上表达较低。本文综述PIAS1在肿瘤发生发展过程中的调控作用,为肿瘤的靶向治疗提供新的思路。

PCR-SSP技术应用于类孟买血型定型的可行性——附2例报告

目的探讨PCR-SSP技术用于类孟买血型快速定型的可行性。方法利用Primer5软件针对A101等位基因cDNA第261、703SNP位点不同的碱基自主设计4对序列特异性引物,对2例血清定型疑似类孟买血型做PCRSSP检测,并对其ABO基因第6、7外显子和FUT1基因做测序分析。结果 2例检测对象基因型分别为B/B、A/O;ABO基因测序分别为B101/B101、A101/O01,FUT1基因测序分别为FUT1基因第547-552位AG纯合缺失(AGAGAG→AGAG),547-552位AG杂合缺失和658位C→T杂合突变。结论 PCR-SSP方法可用于类孟买血型的快速分子初筛,作为1种独立的实验手段弥补血清学定型的不足,提高疑似类孟买血型定型的准确率。

DC—CIK联合索拉菲尼对肺腺癌细胞的抗瘤效应及机制研究

目的研究树突状细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cell co-cultured cytokine-induced killer cells, DC-CIK）联合索拉菲尼对肺腺癌细胞A549（KRAS基因突变型）和PC-9（EGFR基因突变型）的抗瘤效应及其机制。方法从肺癌患者外周血单个核细胞（PBMC）中常规诱导DC与CIK，1周后共培养，收集第7天DC-CIK，流式细胞术（FCM）分析其表型。MTT法检测索拉菲尼对肿瘤细胞的半数抑制浓度（IC50）。以DC-CIK和/或索拉菲尼处理肿瘤细胞，CCK-8法和实时无标记细胞分析技术（real-time cellular analysis，RTCA）分别检测和动态监测肿瘤细胞的增殖情况；Annexin-V/PI双染法检测凋亡率。实时荧光定量PCR及FCM分别检测索拉菲尼作用24 h后自然杀伤细胞活化性配体（NKG2DLs）的mRNA和蛋白表达。结果索拉菲尼对A549和PC-9作用24 h的IC50差异无统计学意义（P〉0.05）。联合组中的增殖抑制率和总凋亡率显著高于单一因素组，且增殖抑制率随效靶比增加而提高（P〈0.05）；而联合组中的标准化细胞指数明显低于单一因素组。NKG2D封闭可以减弱DC-CIK的增殖抑制作用（P〈0.05）。5 μmol/L索拉菲尼作用24 h后，肿瘤细胞中NKG2DLs（ULBP1、UBLP2、ULBP3）的mRNA和蛋白质的表达量均有不同程度增加。结论索拉菲尼对KRAS基因突变型和EGFR基因突变型肺腺癌细胞的增殖抑制作用差异无统计学意义；DC-CIK联合索拉菲尼对肿瘤细胞的抗瘤作用明显优于单一因素，可能是通过调节NKG2D-NKG2DLs通路和凋亡诱导作用实现的。

NS-398和DHA联合抑制β-eatenin、c-mye对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂NS-398和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）联合对胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及机制。方法体外培养胆管癌QBC939细胞，设立NS-398组、DHA组、联合组和空白组，将0，25，50，100，150，200μmol／L的NS-398和0，15，30，45，60，75μg／ml的DHA分别联合作用于QBC939细胞；应用CCK8法检测QBC939细胞的生长抑制率：采用流式细胞术检测细胞凋亡：应用实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA检测细胞中β-catenin和c-myc的表达。结果NS-398和DHA在体外均能抑制QBC939细胞生长，NS-398为100pomol／L联合DHA为45μg／ml作用后，细胞生长抑制率达90％（F=5．85，P〈0．05），二者联合能明显促进QBC939细胞凋亡（F=8．16，P〈0．01）。实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA实验均显示联合能明显抑制β-catenin（F=7．61，P〈0．01）、（F=7．75，P〈0．01）、（F=8．17，P〈0．01）和c-myc（F=7．92，P〈0．01）、（F=8．76，P〈0．01）、（F=8．12，P〈0．01）表达。结论NS-398和DHA联合能明显抑制QBC939细胞生长，促进早期凋亡，二者联合对QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过抑制β-catenin和c-myc的表达，促进细胞早期凋亡。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌胞外酶及核酸酶编码基因研究

目的调查一组耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中蛋白酶、葡激酶、透明质酸酶、脂酶及核酸酶编码基因携带状况,分析MRSA胞外酶基因的构成。方法 24株MRSA分离自浙江湖州解放军98医院,用仪器法和金黄色葡萄球菌看家基因spaPCR法鉴定菌种后,再作甲氧西林耐药决定基因mecAPCR检测,确认为MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)的方法检测丝氨酸蛋白酶编码基因ssp、splB、葡激酶编码基因sak、透明质酸酶编码基因hysA、脂酶编码基因lip及核酸酶编码基因nuc。结果 6种酶分子编码基因均呈阳性,阳性率100.0%;杀白细胞素编码基因pvl、lukE、psm-mec检出率分别为62.5%、100.0%、100.0%,lukM、psmα等两种基因中无阳性发现;溶血素编码基因hla、hld、hlg-2检出率分别为91.7%、100.0%、100.0%,hlb、hlg等两种基因中无阳性发现;24株MRSA基因检测结果可分为3种阳性检出模式,其中ssp、splB、sak、hysA、lip、nuc、pvl、lukE、psmmec、hla、hld、hlg-2共12种基因阳性模式有15株,占62.5%。结论 24株MRSA中的每一株均有多种胞外酶和多种细胞毒素编码基因阳性,胞外酶与细胞毒素的共同作用可能是金黄色葡萄球菌导致宿主炎症的主要机制,MRSA同时携带多种胞外酶和多种细胞毒素编码基因为国内首次发现。

miR-19a与TNF-α在口腔扁平苔藓患者中的表达情况及相关性

目的探究口腔扁平苔藓(OLP)患者miR-19a与TNF-α的表达情况,分析二者与临床病理参数的关系,并分析二者的相关性。方法 2015年1月—2016年1月宁波市第二医院经病理诊断为OLP患者的口腔黏膜组织标本43例作为研究组,另取同期口腔鳞状细胞癌组织标本30例和体检健康者正常口腔组织标本30例作为对照组,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-19a与TNF-αmRNA的表达情况,并分析其与口腔扁平苔藓患者临床参数的关系。结果与正常口腔黏膜组相比,口腔扁平苔藓组中miR-19a(t=5.912,P<0.001)和TNF-αmRNA(t=21.938,P<0.001)表达水平显著增加。与口腔鳞状细胞癌组相比,口腔扁平苔藓组miR-19a(t=3.980,P<0.001)和TNF-αmRNA(t=6.052,P<0.001)表达水平显著降低。miR-19a和TNF-α表达水平与患者年龄、性别、病程、临床表型有关(P<0.05)。在口腔扁平苔藓组织中随miR-19a表达水平的增加,TNF-αmRNA表达水平逐渐增加,二者呈正相关(r=0.495,P<0.05)。结论 OLP患者组织中miR-19a与TNF-αmRNA表达水平显著增加,与患者年龄、性别、病程及临床表型有关,且二者呈正相关。

镍暴露相关的肺癌发生分子机制研究

人体镍及其化合物暴露主要是通过吸入和摄入,已有的流行病学研究,肺癌发病率与镍元素相关暴露有显著的相关性。然而,镍及其化合物可通过多种途径从多个方面作用于组织细胞,诱导肺癌发生的分子机制尚不明确。本文主要对镍及其化合物影响细胞凋亡、自噬、侵袭和转移、增殖等方面进行综述,进一步促进与镍相关的肺癌致病机制的深入研究。