人参皂苷Rg1联合骨髓间充质干细胞干预对急性肺损伤肺泡上皮细胞活力的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1联合骨髓间充质干细胞(BMSC)干预对急性肺损伤(ALI)肺泡上皮细胞活力的影响。方法:将人Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC-Ⅱ)分为5组。正常对照组细胞不处理。ALI模型组细胞用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)诱导3 h构建ALI细胞模型。Rg1干预组细胞先用5μmol/L人参皂苷Rg1处理24 h,再以0.5 mmol/L H_(2)O_(2)诱导3 h。BMSC干预组细胞用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)诱导3 h,再与BMSC以1∶10比例共培养24 h。联合干预组细胞先用人参皂苷Rg1处理,再用H_(2)O_(2)诱导3 h,然后与BMSC共培养,剂量同前。分组处理后,MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和活化的Caspase-3表达水平,应用试剂盒测定细胞中活性氧(ROS)水平,乳酸脱氢酶(LDH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌量。结果:与正常对照组比较,ALI模型组细胞增殖活性、PCNA表达水平降低,凋亡率、活化的Caspase-3表达水平升高;ROS水平、LDH含量升高,SOD活性降低;TNF-α和IL-1β分泌量升高(P<0.05)。人参皂苷Rg1、BMSC单独干预后,ALI模型细胞增殖活性、PCNA表达水平增加,细胞凋亡率和活化的Caspase-3表达水平降低;ROS、LDH含量降低,SOD活性增加;TNF-α和IL-1β分泌量降低(P<0.05);两者联合可协同增效(P<0.05),增殖活性由(51.09±3.16)%增至(94.14±5.38)%,凋亡率由(22.66±2.73)%降至(6.87±0.93)%。结论:人参皂苷Rg1和BMSC干预可通过降低氧化应激和炎症水平,减轻ALI模型细胞损伤,二者联合保护作用更显著。

lncRNA EGOT靶向miR-320a对LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)嗜酸性粒细胞转录因子(EGOT)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡、炎症反应的影响及可能机制。方法:将A549细胞分为对照组(Con)、LPS组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-EGOT组、LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-320a组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测EGOT和miR-320a表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定EGOT和miR-320a之间靶向作用。结果:与Con组比较,LPS组A549细胞凋亡率、IL-6和IL-1β水平均升高(P<0.05),EGOT表达水平降低(P<0.01),miR-320a表达水平明显升高(P<0.01)。与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-EGOT组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01)。与LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组比较,LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01)。双荧光素酶报告实验显示,EGOT靶向负性调控miR-320a表达。结论:lncRNA EGOT通过靶向miR-320a可减轻LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡。