用基因表达谱芯片研究中医经脉-脏腑相关的机理

基因芯片(Genechip)，又称DNA芯片、DNA微阵列(DNA microarray)，包括寡核苷酸微阵列(Oligo-microarray)及DNAmicroarray，是生物芯片(biochip)中应用最广泛、技术最成熟的分支。一般可分为基因表达谱芯片和DNA测序芯片。现就基因表达谱芯片在中医经脉脏腑相关研究中应用思路及前景作一探讨。

基因芯片技术在经脉脏腑相关研究中的应用思考

目的:探讨基因芯片技术在经脉脏腑相关研究中可能存在的应用思路及前景。方法:采用文献分析方法,回顾与分析基因芯片在生物学和医学领域中的应用现状及有关经脉脏腑相关研究成果。结果:基因芯片在生物学和医学领域中可应用于高通量基因表达平行分析、大规模基因发现及基因分析、基因多态性分析和基因组研究等,特别在表达谱中有重大应用价值;经脉脏腑相关研究须从多学科、多系统、多方位、多环节、多水平进行立体交叉研究,使之更具系统化、序贯化,而基因芯片技术应用特点可适应这一需求。结论:基因芯片技术的广泛应用将全面推动经脉脏腑相关研究工作的深入。

经脉脏腑与脑相关研究是中西医理论结合的突破口

近年来虽然一直在强调中西医结合,如何结合却是困扰广大医务工作者和科研工作者的难题。经脉脏腑与脑相关体现了作为整体的人的功能调控途径。在神经科学高度发展的今天,用医学科学语言阐释传统中国医学,经脉脏腑与脑相关研究无疑将会起到积极的促进作用。经脉脏腑相关不仅是经络理论研究的核心,更可能是中西医理论结合的突破口。

心经经脉与下丘脑相关的差异表达基因的研究

目的:从差异表达基因方面探讨心经经脉与下丘脑相关的特异性分子基础。方法:采用结扎冠状动脉前降支法复制急性心肌缺血大鼠模型28只,随机分为正常对照组、模型组、电针肺经组和电针心经组,分别电针心经"神门"至"通里"段、肺经"太渊"至"列缺"段。刺激电压5V,频率2Hz,波宽300μs,电流强度1.1mA,正负向交替方波,每次电刺激20min,1次/d,共3次。取下丘脑组织,采用大鼠全基因U230序列芯片进行基因检测,大规模筛选差异表达基因。结果:与模型组比较,差异表达2倍以上的基因,电针心经组有190个上调、34个下调,电针肺经组有57个上调、26个下调。与肺经组比较,电针心经经脉引起了下丘脑中147个上调2倍以上的差异表达基因,28个为下调2倍以上的差异表达基因。结论:电针心经与电针肺经比较,其在下丘脑中枢调节过程中具有相对特异性作用途径。

心经经脉与心脏相关的差异表达基因的研究

目的:从基因差异表达方面探讨心经与心脏相关的特异性基础。方法:复制大鼠急性心肌缺血模型,分别电针心经“神门”至“通里”段、小肠经“养老”至“支正”段、肺经“太渊”至“列缺”段。刺激电压5V,频率2Hz,波宽300μs,正负向交替方波,每次电刺激20min,1次/d,共3次。取缺血心肌组织,采用大鼠全基因U230序列芯片进行芯片检测,大规模筛选差异表达基因。结果:与模型组比较,差异表达2倍以上的基因,电针心经组有20个上调70个下调;电针小肠经组有18个上调26个下调;电针肺经组有14个上调20个下调,且3组之间鲜有相同的基因表达。结论:经脉脏腑相关具有确实的分子基础,电针心经、小肠经、肺经具有相对特异性作用途径。

降钙素基因相关肽参与电针抗急性心肌缺血损伤的实验研究

目的:探讨电针刺激抗心肌缺血的机制。方法:采用异丙肾上腺素(Isoprenolonhydrochloride,ISO)腹腔注射建立大鼠急性心肌缺血实验模型。24只雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组8只。①电针治疗组:将大鼠麻醉后,注射2%ISO,按100mg/kg(即5mL/kg),i.p.,同时进行电针治疗。选取左侧“心俞”接正极和“厥阴俞”接负极。电针参数:输出波形为正负向交替脉冲波,脉冲宽度为300μs,频率2-20Hz,疏密波,输出电压为3.5-5V,以针柄轻度抖动为度,每次电针30min,共2次,间隔12h。②模型组:同电针治疗组,但不进行电针治疗。③对照组:将大鼠麻醉后,注射生理盐水,38℃,按5mL/kg体重i.p.。比色法测定血清肌酸激酶(creatinekinase,CK)值;放射免疫法测定血浆、心脏组织、脊髓(T1-T6)组织内降钙素基因相关肽(CGRP)含量。结果:电针治疗能够降低造模引起的血清CK水平升高;急性心肌缺血损伤可导致血浆CGRP含量降低,但心肌组织和脊髓中CGRP水平无明显变化;电针后,大鼠血浆中CGRP含量升高(P<0.01),心肌组织内CGRP含量仍无明显变化,但脊髓中CGRP含量有所升高(P<0.05)。对血浆、心脏组织及脊髓组织内的CGRP进行相关分析,未发现三者的明显相关性。结论:电针刺激具有一定的抗心肌缺血损伤作用,CGRP可能是参与电针抗心肌缺血的重要因子。

电针心经不同经脉段对急性心肌缺血家兔心功能的影响

目的 :比较电针心经腕段、心经肘段和心经肩段对急性心肌缺血家兔心功能的影响。方法 :将动物随机分为对照组、模型组和心经腕段组、心经肘段组、心经肩段组 ,以左心室内压峰值(LVP)、左心室内压变化上升最大速率 (LVPdp/dtmax)、心力环面积 (ACFL)、心肌收缩成分最大缩短速度 (Vmax)为指标 ,观察静脉注射脑垂体后叶素造成家兔急性心肌缺血心功能各指标的变化及电针对其的干预作用。结果 :电针心经腕段、心经肘段和心经肩段均能显著性地调节心功能 ,尤以心经腕段最为显著 ,而心经肩段的调节作用似较心经肘段为强 ,但两者比较差异不显著。结论 :心经腕段作为心经经脉一特定的经脉段 ,其调节心功能作用最具代表性。

针刺心经干预急性心肌缺血大鼠心脏基因表达谱研究

目的:从基因水平揭示针刺心经干预心肌缺血的作用机制。方法:采用结扎冠状动脉前降支法复制大鼠急性心肌梗死模型。比较肺经组与模型组、心经组与模型组的心脏基因表达谱变化。结果:与模型组比较,肺经组中大于2倍的差异表达基因(包括EST)有20个下调和14个上调,主要是免疫和炎性反应相关基因,细胞信号和传递蛋白相关基因等;心经组中有70个下调和20个上调,主要是离子通道和运输蛋白相关基因,细胞凋亡和应激反应蛋白相关基因,代谢相关基因,细胞信号和传递蛋白相关基因,DNA结合、转录和转录因子类基因,免疫和炎性反应相关基因等。结论:心经组、肺经组中大于2倍的差异表达基因的数目和类型有较大差异,提示针刺心经干预心肌缺血作用有相对特异性。

电针对大鼠急性心肌缺血的血自由基、内皮素和降钙素基因相关肽的作用

目的 :探讨电针的抗心肌缺血机制 ,进一步研究经脉脏腑相关理论。方法 :采用大剂量异丙肾上腺素 ( 1 0 0mg/kg)腹腔注射建立急性心肌缺血实验模型 ,观察电针“心俞”、“厥阴俞”对血清中肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、血浆中降钙素基因相关肽 (CGRP)和内皮素 (ET)含量的影响。结果 :电针“心俞”、“厥阴俞”能降低血清CK含量 (P <0 .0 5) ,和MDA含量 (P <0 .0 1 ) ,提高血清SOD含量 (P <0 .0 0 1 )和血浆CGRP/ET水平 (P <0 .0 0 1 )。结论 :电针对大鼠急性心肌缺血具有预防和治疗作用 ,可以保护心肌 ,改善心肌缺血损伤 。

针刺心俞、厥阴俞穴结合药物治疗急性缺血性脑卒中的临床研究

目的 :研究针刺心俞、厥阴俞穴结合药物对急性缺血性脑卒中 (简称AIS)患者的心脑功能损害的保护作用。方法 :将 40例患者按入院的先后顺序随机分为两组 :心俞、厥阴俞穴结合药物组 2 0例 (治疗组 )及单纯药物组 2 0例 (对照组 ) ,观察治疗前后头颅CT脑梗塞体积、心电图、降钙素基因相关肽 (CGRP)、血栓素B2 (TXB2 )、6 酮 前列腺素 1a( 6 Keto PGF1a)以及神经功能缺损评分和临床疗效等指标的变化。结果 :与对照组比较 ,治疗组在下列指标上优于对照组 :脑梗塞体积(P <0 0 1 )、心电图 (P <0 0 1 )、CGRP(P <0 0 1 )、TXB2 (P <0 0 0 1 )、6 Keto PGF1a(P <0 0 1 )、神经功能缺损评分 (P <0 0 0 1 )、临床疗效 (P <0 0 5)。结论 :针刺心俞。

神经束内微电极记录家兔心电信号的实验研究

目的:采用神经束内微电极记录家兔心交感神经电信号,探讨不同状态下家兔心交感神经束内的电活动。方法:将特制铂铱合金微电极在16倍手术显微镜下植入心交感神经束内,用Biopac生物信号采集系统记录神经电信号,同时接入SKY-A4生物信号处理系统进行统计分析。比较正常状态下与心肌缺血时家兔心交感神经电信号的变化。结果:心交感神经电信号可持续记录,心肌缺血时心交感神经放电较正常时明显增强(P<0.01),微电极记录能很好反映神经束内电活动的变化。结论:神经束内微电极可稳定记录心交感神经电信号,能较好反映神经束内电活动的变化。

经络理论研究的重大战略意义和思路

经络理论是中医理论的核心,经脉脏腑相关是经络理论的核心。经脉脏腑与脑相关是中西医理论结合的突破口,是21世纪经络理论研究的重点和热点。在总结既往研究工作的基础上,深入探讨经脉脏腑与脑相关的研究进展和思路,认为大脑边缘系统-下丘脑-自主神经系统是经脉脏腑与脑相关研究的核心和神经连接组学的功能结构基础,从而继承、创新、发展中西医结合新理论。

电针“脾俞”对胃窦部溃疡大鼠胃肠平滑肌电活动的干预作用及其机制探讨

目的 :观察电针“脾俞”对胃窦部溃疡大鼠胃肠平滑肌电活动的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :采用冰醋酸损伤法复制急性胃窦部溃疡动物模型 ;分别植入记录电极于肾上腺交感神经、胃窦部、十二指肠和大肠 ;用RM 86多导生理记录仪和SMUP计算机软件分析系统 ,同步记录胃窦部溃疡模型大鼠针刺“脾俞”前后胃肠平滑肌电活动和心率变异性 (HRV)动态变化曲线、肾上腺交感神经放电情况。结果 :电针刺激“脾俞”后 ,胃肠平滑肌电活动抑制 ,LF HF比值上升至 0 .99,肾上腺交感神经放电活动频率上升。结论 :低频疏密波刺激“脾俞” ,可使急性胃窦部溃疡大鼠自主神经系统重新建立动态平衡 。

大鼠心肌缺血再灌注模型的有效复制方法

目的介绍一种无需人工呼吸,成活率高的复制心肌缺血再灌注模型大鼠的术式。方法选用正常健康SD大鼠,于3～4肋间开胸0.5～1.0cm,迅速暴露心脏,冠状动脉下穿线后,即刻复位关胸,提线时以标Ⅱ导联心电图改变为阻断血流指标,连续缺血15min,松线,缝合切口。结果此法复制模型成功率可达95%以上,术后无死亡。结论该复制心肌缺血再灌注模型大鼠的术式迅速简便,成功率和成活率高。

牵拉颈上交感神经节对家兔血压的影响

目的研究牵拉颈上交感神经节对家兔血压的影响。方法家兔麻醉后,行股动脉插管,检测血压,标准导联记录心电图。分离颈上交感神经,并游离出神经节,穿线结扎,用20 g质量向腹侧上方牵拉,同步记录分析家兔血压变化。结果在牵拉前,家兔血压维持在110/80 mmHg水平;分离颈部神经过程中,血压因受到刺激而一过性升高;牵拉颈上交感神经节以后,血压一过性降低,约20 s以后逐渐升高并维持在125/90 mmHg水平,直至牵拉结束。结论牵拉颈上交感神经节可以显著升高家兔的血压。

心主二经论

目的 :提出“心主二经”假说。方法 :从中医、针灸古代文献及现代研究成果入手 ,分析心经、心包经与心脏之间的关系。结果 :中医藏象学说、经络学说及现代针灸经络研究成果中蕴含着丰富的“心主二经”的思想和内容。结论 :手少阴经和手厥阴经均当为心所主 ,即心主二经。