基于EGFR/MAPK/MUC5AC通路探讨益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的影响

目的基于表皮生长因子受体/丝裂原活化蛋白激酶/黏蛋白5AC(EGFR/MAPK/MUC5AC)通路探析益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的治疗作用及机制。方法将SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、氨溴索组及益肺健脾方低、中、高剂量组。烟熏联合脂多糖滴注、番泻叶灌胃泻下的方式复制肺脾两虚型COPD大鼠模型。阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)观察大鼠支气管黏液分泌及杯状细胞增生程度;苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠肺组织病理形态;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织MUC5AC、EGFR蛋白和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白及磷酸化蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测大鼠肺组织EGFR、JNK、p38 MAPK、MUC5AC及ERK mRNA的表达。结果AB-PAS染色显示氨溴索组及益肺健脾方各剂量组杯状细胞增生明显改善。HE染色下见氨溴索组及益肺健脾方高剂量组明显改善肺组织病理损伤。相较于空白组,模型组肺组织中ERK、MUC5AC、p38 MAPK、JNK及EGFR mRNA的表达皆明显升高(P<0.01),MUC5AC、EGFR蛋白和p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及磷酸化蛋白表达量皆明显升高(P<0.01)。相比于模型组,氨溴索组及益肺健脾方中、高剂量组各蛋白表达量明显下降(P<0.01,P<0.05),低剂量组EGFR、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量皆降低(P<0.01,P<0.05);高剂量组与氨溴索组EGFR、ERK、JNK、p38 MAPK及MUC5AC mRNA的表达皆降低(P<0.01,P<0.05),中、低剂量组MUC5AC mRNA的表达下降(P<0.05)。结论益肺健脾方可减少MUC5AC的表达,从而改善气道黏液高分泌,其作用机制与EGFR/MAPK信号通路有关。

益肺健脾方降低香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞的炎性损伤和黏液高分泌:基于抑制TLR4/NF-κB信号通路

目的探究益肺健脾方通过TLR4/NF-κB信号通路改善人支气管上皮细胞(16HBE)炎性损伤和黏液高分泌的机制。方法将40只SD大鼠随机分为两组:空白血清组、含药血清组,20只/组,对空白血清组和含药血清组大鼠分别以生理盐水、益肺健脾方药液灌胃,末次灌胃后对大鼠进行麻醉并于无菌状态下腹主动脉采血收集益肺健脾方含药血清;自制气体抽吸泵制备香烟烟雾溶液(CSE),刺激人支气管上皮细胞16HBE,并用CCK8法筛选CSE和益肺健脾方含药血清干预慢性阻塞性肺疾病细胞模型的最佳作用浓度以及最佳作用时间;qRT-PCR法检测TLR4基因沉默和过表达对16HBE中TLR4mRNA的表达;Westernblot法和qRT-PCR法检测益肺健脾方对TLR4沉默和过表达后TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA和蛋白表达的影响;ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的表达。结果选择20%含药血清作用24h作为益肺健脾方最佳给药浓度及给药时间;与CSE组相比,CSE+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA及相应蛋白的表达显著降低;与CSE+含药血清组相比,CSE+siRNA-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA及相应蛋白的表达降低;与CSE+Lv-TLR4组相比,CSE+Lv-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA及相应蛋白的表达显著降低;与CSE+含药血清组相比,CSE+Lv-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA及相应蛋白的表达显著升高(P<0.05);与CSE组相比,CSE+含药血清组的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8炎症因子水平下降(P<0.05);结论益肺健脾方可干预TLR4/NF-κB信号通路,作用于COPD细胞模型,降低MUC的分泌抑制COPD气道炎症和黏液高分泌,降低与NF-κB信号通路相关的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8炎症因子的表达,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的基因及MUC蛋白表达有关。

安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的系统评价

目的:系统评价安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的有效性及安全性。方法:计算机检索PubMed、EMbase、Web of Science、Cochrane Library、万方、维普网、中国知网、SinoMed等数据库中的安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的随机对照试验(Randomized Controlled Trial,RCT),检索时限为2018年1月至2020年3月。由2名研究员根据纳入排除标准独立进行文献筛选和文献质量评价,用Revman5.3统计软件对纳入的随机对照试验进行Meta分析。结果:共纳入8个随机对照试验,共784例患者,试验组474例患者,对照组310例患者。Meta分析结果显示:安罗替尼在延长患者无进展生存期(Progression-Free Survival,PFS)[HR=0.34,95%CI(0.30,0.39),P<0.00001]、总生存期(Overall Survival,OS)[HR=0.73,95%CI(0.63,0.85),P<0.0001]以及提高患者疾病控制率(Disease Control Rate,DCR)[RR=1.66,95%CI(1.06,2.58),P=0.03]、客观有效率(Objective Response Rate,ORR)[RR=2.03,95%CI(1.06,3.58),P=0.03]方面有优势,不良反应可控。结论:与安慰剂或全身化疗相比,安罗替尼可有效提高晚期非小细胞肺癌的疾病控制率和客观有效率,并延长患者中位无进展生存期和中位总生存期,但纳入文献数量偏少、样本量少且分析结果提示异质性较大,仍需样本数量更大、质量更高的临床随机对照试验来对结果进行进一步论证。

基于Toll样受体4/核因子κB通路观察香烟烟雾溶液刺激对人支气管上皮样细胞相关基因表达的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)基因沉默或过表达后香烟烟雾溶液(CSE)对人支气管上皮样细胞(16HBE)相关基因表达的影响。方法 2020年8—12月,用常规培养的人支气管上皮样细胞16HBE作为空白对照组,实验设干扰小RNA(siRNA)TLR4-1组(hs-TLR4-si-1+16HBE)、siRNA TLR4-2组(hs-TLR4-si-2+16HBE)、siRNA TLR4-3组(hs-TLR4-si-3+16HBE),另设阴性对照组(NC+16HBE),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)筛选TLR4基因最佳沉默效果;自制CSE作用于16HBE,实验设常规培养的16HBE作为空白对照组、CSE组(CSE+16HBE)、siRNA TLR4组(CSE+hs-TLR4-si-2+16HBE)、siRNA TLR4-NC组(CSE+NC+16HBE)、Lv-TLR4组(CSE+Lv-TLR4+16HBE)、Lv-TLR4-NC组(CSE+Lv-TLR4-NC+16HBE),qRT-PCR检测TLR4、核因子κB(NF-κB)以及黏蛋白MUC5AC、MUC7、MUC8基因mRNA的表达。结果 与空白对照组相比,siRNA TLR4-2组TLR4 mRNA表达显著降低(1.00±0.22比0.47±0.04,P<0.05),因此选择hs-TLR4-si-2作为TLR4基因沉默的最佳siRNA。与空白对照组相比,CSE组TLR4(1.00±0.09比1.81±0.18)、NF-κB(1.00±0.04比1.65±0.11)、MUC5AC(1.00±0.12比2.09±0.24)、MUC7(1.00±0.20比2.21±0.26)、MUC8(1.00±0.11比1.75±0.06)mRNA表达均升高(均P<0.05);与CSE组相比,CSE+siRNA TLR4组TLR4(1.81±0.18比1.43±0.17)、NF-κB(1.65±0.11比1.12±0.05)、MUC5AC(2.09±0.24比1.38±0.13)、MUC7(2.21±0.26比1.46±0.30)、MUC8(1.75±0.06比1.23±0.03)mRNA表达均降低(均P<0.05),CSE+Lv-TLR4组TLR4(1.81±0.18比2.42±0.06)、NF-κB(1.65±0.11比1.94±0.07)、MUC5AC(2.09±0.24比2.56±0.19)、MUC7(2.21±0.26比2.72±0.33)、MUC8(1.75±0.06比2.10±0.10)mRNA表达均升高(均P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路与CSE所产生的气道炎症有关,且其下游相关基因及黏蛋白表达受TLR4基因调控,TLR4的过度表达会加重CSE导致的气道炎症及慢性阻塞性肺疾病(COPD),抑制TLR4/NF-κB信号通路可在一定程度上减轻CSE所导致的气道炎症及COPD。