显微红外成像和衰减全反射技术在不同种属黄精中的鉴别研究

探讨了显微成像和衰减全反射两种红外模式对不同种属黄精的鉴别。以6种不同种属的黄精样品为研究对象,一份样品经冰冻切片机进行取样,采用显微红外仪器进行扫描;另一份样品经烘干打粉,采用衰减全反射模式扫描。结果表明,以多糖含量高低作为鉴别依据,衰减全反射模式可以快速判别出是否含有多糖以及简单比较不同种属黄精间含量差异,而显微红外模式可以直观地显示出多糖在不同种属黄精间的含量分布差异。比较两种鉴别模式,衰减全反射模式更快捷,显微红外更直观、准确、灵敏度高。

益气活血法改善糖尿病肾病大鼠肾小管重吸收功能的研究

目的:观察益气活血药对黄芪丹参对糖尿病肾病模型大鼠尿蛋白、肾功能、肾小管重吸收的影响,并探讨其机制。方法:采用链脲佐菌素单次大剂量(55mg/kg)腹腔注射,诱导大鼠糖尿病肾病(DN),造模成功后随机分成模型组、益气活血组(黄芪和丹参注射液给药组)、格列喹酮组,同时设置正常对照组。于给药第6周尾静脉注射FITC-BSA,取各组大鼠的尿液检测24h尿蛋白量,血液测定血糖、血清尿素氮、血清肌酐、血清甘油三酯及血清总胆固醇;取肾脏制成组织匀浆测定LPO、SOD、GSH-Px和高级糖基化终产物(AGEs),肾脏石蜡切片用于PAS、HE及免疫组化染色。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低,血糖、24h尿蛋白量、血清肌酐、血清尿素氮、血清甘油三酯、血清总胆固醇均显著增加,肾组织中LPO和AGEs的含量显著增加(P<0.01),GSH-Px和SOD的活性显著下降(P<0.05)。益气活血药对可显著降低DN大鼠24h尿蛋白量(P<0.01),显著降低血清肌酐、血清尿素氮,血清甘油三酯和血清总胆固醇的水平(P<0.05),并可以降低DN大鼠肾组织中LPO和AGEs的含量(P<0.05),升高GSH-Px的活性(P<0.05)。肾脏切片染色结果显示益气活血药对可显著改善糖尿病肾脏肾小管的病变,并提高肾小管对FITC-BSA的重吸收能力。免疫组化结果表明黄芪丹参合用可以增加肾小管上皮细胞megalin表达。结论:益气活血法治疗可以改善糖尿病肾病大鼠肾小管的病变,减少蛋白尿,改善肾小管重吸收功能,其机制可能与增加肾脏组织的抗氧化活性,增加肾小管上皮细胞megalin表达有关。

不同生长时期凤丹内生真菌的分离鉴定及多样性研究

目的对不同生长时期凤丹根皮内生真菌进行分离鉴定。方法运用组织分离法进行分离,采用形态学与分子生物学相结合的手段进行鉴定。结果共得到内生真菌45株,分属于9属13种,其中枯萎期4属4种,分别为Fusarium Keratoplasticum、Myrotheeium prestonii、Septoriella phragmitis、Cosmospora cymosa,相对分离频率为40%。花期6属9种,分别为Fusarium acutatum、Fusarium circinatum、Fusarium fujikuroi、Alternaria alternata、Alternaria arborescens、Climacocystis montana、Pyrenochaeta lycopersici、Penicillium crustosum、Rhexocercosporidium panacis,相对分离频率为60%。结论凤丹根皮中内生真菌组成丰富,且在不同生长时期其种类组成具有多样性。

不同产地、不同部位的丹参与南丹参的红外光谱研究

以丹参为研究对象,采用傅里叶红外光谱技术结合二阶导数红外光谱对不同产地、不同部位的丹参药材进行区分。结果表明,丹参的红外光谱图中主要吸收峰在3 271、2 929、1 607、1 510、1 397、1 260、1 143、1 026、872cm^(-1)附近,不同产地丹参的吸收峰基本相似,但吸收峰的位置及强度存在一定差异;同一产地丹参的不同部位红外光谱及其特征吸收峰有差异,在1 800～800cm^(-1)范围,须根的吸收峰强度>根头部>主根,推测须根中丹参酮类、丹酚酸类及糖类含量较根头部和主根中高。同时研究了丹参与其伪品南丹参,在1 607与1 026cm^(-1)附近,丹参吸收峰强度均明显高于南丹参,说明丹参中丹酚酸类和糖类的含量较南丹参高。对不同产地丹参进行系统聚类分析,结果发现,有效成分的分布与丹参的生态和产地呈一定的相关性,样品聚为两大类。红外光谱结合聚类分析法在丹参的鉴别中,不仅可以提供丹参主要化学成分的相关信息,还可以对不同产地的丹参进行分类鉴别。

不同产地、不同种属黄精的红外光谱鉴别研究

采用傅里叶红外光谱技术结合二阶导数光谱对不同产地的黄精进行鉴别。研究结果表明,不同产地多花黄精的红外光谱图在整体上比较相似,其主要吸收峰均在3270、2933、1623、1411、1372、1319、1269、1103、1019、926、865、815 cm-1附近,但吸收峰的位置、峰强度等方面存在明显差异,在1018 cm-1附近是糖类的特征吸收峰,由红外光谱图可推测安徽省池州市、岳西县、江西省宜春市多花黄精中糖类成分含量较高,湖北省黄冈市、安徽省黄山区、石台县次之,安徽省休宁县、金寨县相对较少。6种黄精属植物的红外光谱图在吸收峰的位置、形状、强度等方面均有差异,故可推测黄精属不同植物在化学成分及含量上均存在明显差异。二阶导数图呈现出许多原始图谱中被掩盖的谱峰的变化特征,将谱图间的差异更为明显得表现出来,进一步提高了谱图的分辨率,与普通红外光谱图相比,二阶导数红外光谱图进一步直观地验证了上述结果。

不同产地桔梗的红外光谱整体成分鉴别研究

采用傅里叶变换红外光谱法和显微红外光谱技术对不同产地桔梗进行鉴别。结果表明,不同产地桔梗的一阶红外光谱图整体上差别并不明显,二阶导数处理后,各产地的特征峰差异得以显现,显微红外光谱图则进一步直观清晰地显现出桔梗皂苷d的含量多少与分布区域,进一步佐证了不同产地桔梗间桔梗皂苷d的含量差异的结果。根据不同产地地理远近来分析,不同省之间的桔梗的物质含量与分布的差距比较明显;同省不同市之间几乎没有太大的差距,可能原因是同省不同市的地理距离太小。因此,红外光谱法和显微红外光谱技术提供了大量桔梗的整体化学成分信息,递进式地验证了不同产地桔梗之间的所含物质的量及分布有差异,可以初步鉴别不同产地桔梗,为今后系统完整的选择桔梗入药产地提供依据。

黄精的显微红外成像光谱鉴别研究

目的:采用显微红外成像光谱对不同产地多花黄精和不同种黄精进行鉴别。方法:在波数为1018 cm^(–1)的条件下,使用显微红外成像光谱对7个不同产地多花黄精和5种黄精属植物的切片进行扫描,以糖类含量高低及分布情况作为鉴别的判断依据。结果:不同产地及不同种黄精显微图像有明显区别,表明其化学成分存在差异。不同产地多花黄精中,贵州省铜仁市样品中糖类成分含量较高,其次是黄山市祁门县和湖北省赤壁县样品,浙江省天目山、湖南省怀化市、江西省瑞昌市样品中糖类成分含量相对较低,贵州省六盘水市样品中糖类成分含量最低;5种黄精属药材中多糖类成分由高到低的顺序为黄精、长梗黄精、轮叶黄精、滇黄精、多花黄精。结论:采用显微红外成像光谱技术能够有效区分不同产地多花黄精和不同种黄精。与传统红外光谱相比,显微红外成像光谱可研究各扫描微区的组分分布情况,使其含量分析表达更加直观,具有可视性、高灵敏度等特点。

益气活血法对高糖损伤NRK-52E细胞摄取蛋白质的影响

目的:以黄芪丹参药对为代表考察益气活血法对高糖损伤肾小管上皮细胞(NRK-52E)摄取蛋白质功能的影响。方法:MTT法考察黄芪丹参合用对高糖损伤NRK-52E细胞增殖的影响,荧光显微镜及荧光分光光度计分析NRK-52E对FITC-BSA的摄取作用,免疫组化观察megalin表达。结果:益气活血法能剂量依赖性地减少高糖引起NRK-52E细胞数减少;高糖能导致NRK-52E细胞对FITC-BSA摄取减少,megalin表达减少,益气活血法能改善NRK-52E细胞对FITC-BSA的摄取,增加megalin表达。结论:益气活血法能保护高糖损伤NRK-52E细胞,并且通过增加megalin表达,减少高糖对NRK-52E摄取蛋白质功能的损伤。

响应面法优化凤丹内生真菌发酵工艺探究

目的研究响应面法优化一株凤丹优势内生真菌发酵工艺。方法在单因素试验结果的基础上,运用响应面法设计,对凤丹优势内生真菌发酵工艺进行优化。结果最优发酵工艺为蔗糖含量20 g·L^(-1),酵母浸膏含量5 g·L^(-1),KH_2PO_3含量1. 00 g·L^(-1),K_2HPO_3含量1. 00 g·L^(-1)。在该条件下,发酵所得的菌丝体实际生物量为1. 647 g。结论实验所得数据的多元回归模型与实际情况较好拟合,表明该优化工艺稳定可靠,通过响应面法最终获得了凤丹内生真菌最优发酵工艺。

凤丹内生真菌Fusarium oxysporum次生代谢产物的研究

目的研究凤丹内生真菌Fusarium oxysporum的次生代谢产物。方法运用多种色谱法对菌株F. oxysporum发酵液的醋酸乙酯萃取部位进行分离纯化,采用波谱分析对化合物的结构进行鉴定。结果从菌株F. oxysporum发酵液的醋酸乙酯萃取部位中共分离得到23个化合物,分别鉴定为(2S)-脯氨酸(1)、(22E,24R)-7,22-二烯-3β,5α,6β-麦角三醇(2)、环-(S-脯氨酸-S-亮氨酸)(3)、环-(L-丙氨酸-L-脯氨酸)(4)、环-(缬氨酸-脯氨酸)(5)、环-(R-脯氨酸-S-苯丙氨酸)(6)、环-(D-顺-4-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(7)、环-(L-反-4-羟基脯氨酸-L-苯丙氨酸)(8)、环-(谷氨酸-酪氨酸)(9)、环-(L-4-反-羟基脯氨酸-L-亮氨酸)(10)、环-(L-色氨酸-L-脯氨酸)(11)、环-(L-亮氨酸-甘氨酸)(12)、N-(3-(1H-吲哚-3-基)丙基)乙酰胺(13)、吲哚-3-乙酸(14)、2-哌啶酮(15)、2-吡咯烷酮(16)、胸腺嘧啶(17)、(5S)-5-((4-羟基苯基)甲基)-2,4-咪唑烷二酮(18)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(19)、环-(丙氨酸-亮氨酸)(20)、环-(S-脯氨酸-S-苯丙氨酸)(21)、环-(酪氨酸-脯氨酸)(22)、环-(L-苯丙氨酸-L-酪氨酸)(23)。结论除化合物2、6、14外,其余化合物均为首次从该菌株发酵液中分离得到。