基于网络药理学探索鬼箭羽治疗糖尿病的机制

目的 通过网络药理学预测鬼箭羽治疗糖尿病的作用机制。方法 鬼箭羽药物成分靶点来自中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)。用基因数据库查询相应基因,利用Cytoscape软件构建网络图。采用基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测鬼箭羽治疗糖尿病的作用机制及潜在靶点。结果 “药物-化合物-靶点-疾病”网络图包含了21种活性成分和154个交叉靶点,主要靶点包括视网膜母细胞瘤基因1(RB1)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT1)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)。通过GO功能富集分析,共获得了20个项目(P<0.05)。KEGG通路富集分析筛选了13条信号通路(P<0.05),其中的脂质和动脉粥样硬化、流体剪切应力与动脉粥样硬化、高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)信号通路,对糖尿病有作用。结论 鬼箭羽的活性成分可通过作用于RB1、CCND1、AKT1、MAPK1、MAPK3等多个靶点来调节胰岛素的分泌,从而对糖尿病发挥治疗作用。

藤梨根乙醇提取物通过AKT/PUMA通路诱导结直肠癌细胞凋亡

目的研究藤梨根乙醇提取物(TLG)对结直肠癌细胞的作用及其抗肿瘤机制。方法利用MTT检测TLG对人结直肠腺癌细胞HCT-15、LoVo的毒性,细胞平板克隆实验检测TLG对结直肠癌细胞HCT-15、LoVo增殖的影响,Hoechst-33258染色法和流式细胞术检测TLG对结直肠癌细胞凋亡的影响,Western blot实验检测TLG对HCT-15中相关蛋白Caspase-3、PARP、P65、PUMA、AKT、GSK-3β表达的影响,双荧光素酶报告基因实验检测TLG对HCT-15中相关启动子活性的影响。结果结直肠癌细胞HCT-15、LoVo经TLG处理后,与对照组相比,细胞活力以时间及剂量依赖性下降(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β抑制剂处理后能够恢复增殖(P<0.001);不同浓度TLG处理后,细胞凋亡率提高(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后能够遏制TLG诱导的凋亡(P<0.01,P<0.001);Western blot显示HCT-15细胞中的p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达量随TLG浓度上升而减少(P<0.01),Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA蛋白表达量随TLG浓度上升而增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),同时转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β抑制剂处理后能够阻滞TLG对下游蛋白Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA的影响(P<0.05,P<0.01,P<0.001);报告基因结果显示NF-κB、PUMA启动子活性随TLG浓度上升而增强(P<0.05,P<0.01),同时转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后恢复(P<0.01,P<0.001)。结论TLG可以显著诱导结直肠癌细胞凋亡,发挥较强的抑制肿瘤作用,其机制可能与AKT/PUMA信号通路有关。

藤梨根乙醇提取物诱导小细胞肺癌凋亡的机制研究

目的:研究藤梨根乙醇提取物(TLG)对H1688、H446细胞凋亡的影响,并探究其相关的分子机制。方法:用不同浓度TLG处理H446、H1688细胞:使用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测Erk1/2、Foxo3a、PUMA、Cleaved PAr P蛋白表达量。结果:经TLG处理后,与不加药组相比,细胞的增殖抑制率以剂量依赖性形式增加;细胞凋亡率增加;Western Blot显示Erk1/2蛋白表达量随着TLG浓度的增加而降低;Foxo3a、PUMA、Cleaved PAr P蛋白表达量随着TLG浓度的增加而增加。结论:TLG可促进小细胞肺癌细胞H1688、H446的凋亡,其机制可能是通过Erk1/2-Foxo3a-PUMA轴发挥作用。

葛根素对慢性偏头痛小鼠三叉神经节细胞钠离子电流及动作电位的影响

目的通过观察葛根素对硝酸甘油诱导的慢性偏头痛模型小鼠行为学、三叉神经节细胞钠离子电流抑制率和动作电位的影响,探讨其治疗慢性偏头痛的作用机制。方法随机取6只雄性C57BL/6小鼠,处死后分离三叉神经节细胞,检测不同浓度的葛根素对电压依赖性钠离子通道电流的抑制率。建立硝酸甘油诱导的慢性偏头痛小鼠模型,给予药物干预后,qRT-PCR检测三叉神经节细胞神经元电压门控钠通道基因(voltage-gated sodium channelα1-subunit gene,SCN1A)m RNA表达;用膜片钳记录各组小鼠三叉神经节细胞的动作电位参数。结果葛根素对正常小鼠三叉神经节细胞的电压门控性钠离子通道抑制率的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为29.96μmol/L。与对照组比较,模型组小鼠0~30、30~60、60~90、90~120 min各时间段抓头次数及2 h内抓头次数总和显著增加(P<0.05、0.001),三叉神经节细胞中SCN1A m RNA表达显著升高(P<0.001),动作电位发放频率和静息膜电位显著升高(P<0.001)。与模型组比较,葛根素(50、100、200 mg/kg)组30~60 min抓头次数和2 h内抓头次数总和显著减少(P<0.05、0.01),葛根素(200 mg/kg)组90~120 min抓头次数显著减少(P<0.001);葛根素(100、200 mg/kg)组小鼠三叉神经节细胞中SCN1A m RNA表达显著降低(P<0.001);葛根素(50、100、200 mg/kg)组小鼠三叉神经节细胞动作电位发放频率和静息膜电位显著下降(P<0.001)。结论葛根素通过阻断三叉神经节细胞钠离子电流和SCN1A mRNA表达,降低动作电位静息膜电位和发放频率,减少慢性偏头痛发作,有望成为临床治疗慢性偏头痛的辅助治疗药物。