提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚,从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难,试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。为此,作者借鉴多年生的草本植物RNA提取方法—CTAB法,并在此基础上进行了改进,首次提取茶苗嫩根中的总RNA。电泳检测显示,该方法提取的总RNA 28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮,紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1.93。用于RT-PCR反应,成功克隆了492 bp的谷氨酰胺合成酶基因片段。说明用该方法提取的RNA纯度和完整性好。试用该方法从营养成分丰富的茶籽胚中提取总RNA,效果同样很好。

适于SSR分析的茶树高质量基因组DNA提取方法

对野生型、过渡型和栽培种茶树分子遗传多样性研究中遇到的DNA提取问题进行了试验,针对茶树组织内富含多酚、多糖、色素及次生代谢物质的特点,以茶树嫩叶为试材,采用改良CTAB法获得了高质量的茶树基因组DNA。运用本方法提取的茶树总DNA作为模板用多条EST-SSR引物和自身开发的基因组SSR引物进行PCR扩增并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条带,结果表明,改良后的方法适用于不同类型的茶树叶片DNA提取,所得DNA带型完整,质量较高,扩增SSR产物条带清晰,证实所提DNA适用于后续的SSR分析。