抗炎免疫中药有效成分的药理学研究

综述近年来抗炎免疫中药的研究概况。将近年来研究较多的抗炎免疫中药活性成分,按苷类、生物碱类、黄酮类、挥发油类等化学结构分类简述其抗炎免疫作用,为进一步开发抗炎免疫中药和天然药物提供参考。

抗炎免疫中药的药动学研究

综述了近年来抗炎免疫中药药动学的研究近况,为进一步开发抗炎免疫中药和天然药物提供参考。

抗炎免疫药物在消化系统的组织分布

综述了抗炎免疫药物在消化系统的组织分布,重点介绍其在肝脏、胃、肠等组织的分布。分析了其对消化系统药效学、药动学以及不良反应的影响。对进行抗炎免疫药物的临床疗效和安全性评价,指导抗炎免疫药物的合理应用具有一定意义。

针对类风湿关节炎分子靶点的治疗药物研究进展

治疗类风湿关节炎(rheum atoid arthritis,RA)的药物虽有很多,但由于RA的发病机制和病因还没有完全阐明,目前还没有一种药物能够根治RA。随着对炎症过程的认识不断深入,特别对信号转导路径的认识,人们一直努力找寻一些调理疾病进程的具有特异性的干扰信号转导路径新的治疗药物。TNF-α阻断剂和IL-1受体拮抗剂等细胞因子拮抗剂在临床试验中治疗RA起到明显的效果。调节滑膜细胞G蛋白-AC-cAMP和Ras-MAPKs信号通路是中药白芍总苷和木瓜总苷发挥抗滑膜细胞增殖的重要分子机制。该文将对一些以细胞因子、炎症介质、细胞表面抗原、信号转导为靶点的药物研究情况进行综述。

类风湿关节炎中PGE_2与IL-1的关系及其药物研究

类风湿关节炎(RA)是一种常见的自身免疫性疾病,其发病机制涉及细胞因子、遗传和感染等多种因素,前列腺素E2(PGE2)是RA发生发展过程中重要的炎性介质之一,细胞因子如白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)在RA的骨损伤中起重要作用。为阐明RA的发生机制和寻找更安全有效的治疗药物提供参考,现就PGE2和IL-1在RA发生中的作用、PGE2及其相关因素和IL-1的关系及治疗RA的药物作用机制研究作一概述。

重组人白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用

目的研究重组人白细胞介素1受体拮抗剂(RhIL-1Ra)对大鼠佐剂性关节炎(AA)的影响,探讨部分机制。方法将SD大鼠随机分为6组:正常组、AA组、AA+RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid,sc)和AA+anakinra组。弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型,检测体重、足爪肿胀度、多发性关节炎指数、T、B细胞增殖度、腹腔巨噬细胞产生的IL-1、TNF-α和PGE2水平及关节滑膜的病理学改变。结果RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)改善了AA大鼠踝关节的炎性肿胀和病理学改变,RhIL-1Ra(40mg/kg,tid×7d)显著提高了ConA诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra(2·5、10、40mg/kg,tid×7d)抑制了LPS诱导的脾细胞增殖,RhIL-1Ra使AA大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1、TNF-α和PGE2减少。结论RhIL-1Ra对AA大鼠有治疗作用,影响腹腔巨噬细胞功能和T、B淋巴细胞可能是其发挥作用的部分机制。

白芍总苷对IL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rIL-1α(0.01、0.1、1、10μg.L-1)和1μg.L-1rIL-1α(3、6、12、24h)体外刺激下,CIA大鼠FLS产生的PGE2和cAMP水平均升高;TGP(2.5、12.5、62.5、125、250mg.L-1)体外给药可不同程度地抑制FLS的增殖反应和PGE2产生,而进一步升高cAMP水平。结论在不同浓度同一时间和同一浓度不同时间的rIL-1α体外刺激下,FLS产生PGE2和cAMP水平均升高;TGP体外作用FLS可抑制其增殖和产生PGE2,进一步升高cAMP的水平。

芍药苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号的调节作用

目的 研究芍药苷（paeoniflofin，Pae）对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠滑膜细胞G蛋白偶联信号转导的调节作用。方法用鸡Ⅱ型胶原诱导胶原性关节炎。在免疫后d 16～23，胶原性关节炎大鼠灌胃给予Pae（25、50、100mg·kg^-1）。通过足爪肿胀和关节炎指数评价关节炎。采用Western blot技术检测滑膜细胞中抑制性G蛋白（Gi）表达。用放免法检测滑膜细胞中cAMP水平，用激酶发光分析法测定滑膜细胞中蛋白激酶A（PKA）的活性。结果胶原性关节炎大鼠出现明显的继发性炎症反应。滑膜细胞中Gi蛋白表达增加，而cAMP水平和PKA活性明显降低。Pae抑制胶原性关节炎大鼠的炎症应答。在100mg·kg^-1，Pae抑制Gi的表达。在50mg·kg^-1和100mg·kg。剂量，Pae提高cAMP水平和PKA活性。体外研究发现，Pae（2．5、12．5、62．5mg·L^-1）降低滑膜细胞中Gi的表达，而提高降低的cAMP水平和PKA活性。结论胶原性关节炎大鼠滑膜细胞中G蛋白偶联的信号转导与滑膜炎病理机制密切相关；Pae对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用是通过调节G蛋白偶联的信号转导实现的。

芍药苷对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及其产生细胞因子的影响

目的研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)吞噬功能及其产生细胞因子的影响。方法采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导AA大鼠模型,无菌取PMΦ,吞噬功能采用中性红法测定,PMΦ培养上清液中IL-1活性的测定采用小鼠胸腺细胞增殖法,TNF-α和PGE2含量的测定采用放射免疫测定法。结果PF能抑制关节肿胀,降低AA大鼠PMΦ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平。结论PF对AA大鼠的抗炎和免疫抑制作用与其降低AA大鼠PMΦ过强的吞噬功能和产生IL-1、TNF-α和PGE2的水平有关。

肿瘤坏死因子-α对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用。方法:制备大鼠CIA模型,并分离培养正常大鼠和CIA大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)。考察TNF-α在0.02～20μg.L-1浓度时对培养的正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)和白介素1β(IL-1β)的影响,选择TNF-α的最佳刺激浓度。观察不同浓度(15.625～250 mg.L-1)的白芍总苷在TNF-α的最佳刺激浓度时对CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌PGE2,cAMP和IL-1β的影响。用MTT法检测FLS的增殖反应,放射免疫测定法检测PGE2,cAMP和IL-1β的水平。结果:TNF-α在20μg.L-1的浓度时均显著抑制正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS分泌cAMP,显著促进PGE2和IL-1β的分泌,故选20μg.L-1为TNF-α的最佳刺激浓度。TGP能显著抑制20μg.L-1TNF-α对CIA大鼠FLS的促增殖反应,明显上调降低的cAMP水平,明显下调升高的PGE2和IL-1β水平,且具有一定的浓度依赖性。结论:TNF-α可以促进CIA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2和IL-1β。TGP则能明显逆转TNF-α对FLS的影响。

人sTRAIL基因的克隆、表达纯化及对人A549细胞的抗肿瘤活性作用

目的人TRAIL基因胞外区片段(114-281氨基酸残基,sTRAIL)的克隆、表达、纯化及对人肺腺癌A549细胞的抗肿瘤活性研究。方法采用PCR技术从人胎盘和肺cD-NA文库中扩增出全长人TRAIL基因,克隆到pUC19质粒载体上进行测序。然后再采用PCR技术,以全长人TRAIL基因为模板,扩增出sTRAIL基因片段并定向克隆到pET-11 a表达载体中,转化大肠杆菌BL21进行表达。表达后的产物经变性、复性和分离纯化,纯化后的sTRAIL用结晶紫染色法和流式细胞仪法测定其对人肺癌细胞A549的细胞毒性作用。结果从人胎盘和肺cDNA文库中都能扩增出全长人TRAIL基因,经测序表明与已发表的人TRAIL基因序列一致。扩增出的人sTRAIL基因克隆到表达质粒载体pET-11a,经IPTG诱导表达,表达量占细菌全菌蛋白的50%,纯化后的sTRAIL纯度大于98%,结晶紫法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性作用的IC50为(24±5.2)μg.L-1,流式细胞仪法测定对人A549肺癌细胞的细胞毒性具有明显的效应-时间依赖关系。结论本实验成功地克隆了人sTRAIL基因并实现其高表达,摸索出包涵体sTRAIL的变性、复性及其纯化方法,纯化后的sTRAIL蛋白对人A549肺癌细胞具有明显的细胞毒性作用,为进一步研究其功能与临床应用奠定了基础。

复方氨酚烷胺胶囊人体相对生物利用度研究

目的:研究复方氨酚烷胺胶囊人体相对生物利用度。方法:20例健康志愿者单剂量口服复方氨酚烷胺胶囊受试验制剂或参比制剂后12 h内多点采集血样,采用HPLC法测定人血清中对乙酰氨基酚和咖啡因的浓度。采用双周期两制剂交叉试验设计。血药浓度-时间数据经DAS软件处理后得药动学数据,并进行等效性检验。结果:2种制剂中对乙酰氨基酚和咖啡因的血药浓度经时变化和药动学参数相近,以参比制剂做对照,受试制剂中对乙酰氨基酚和咖啡因的相对生物利用度如下:F值(以AUC0-t计算)分别为(102．05±14．19)％和(112．39±32．24)％,F’(以AUC0-∞计算)分别为(101．32±15．49)％和(105．27±45．63)％,均符合生物等效性要求。结论:2种复方氨酚烷胺胶囊的口服生物利用度具有生物等效性。

与类风湿关节炎相关的G蛋白偶联受体及治疗药物作用靶点

很多胞外信号直接或间接通过G蛋白偶联受体向胞内传输。多种G蛋白偶联受体包括趋化因子受体、前列腺素(prostaglandins,PGs)受体、β2-肾上腺素受体(β2-adrener-gicreceptor)、致炎肽P物质(proinflammatorypeptidesub-stanceP,SP)受体、蛋白酶活化受体2(protease-activatedre-ceptor2,PAR-2)等在免疫应答调节中起至关重要的作用。该文综述了与类风湿关节炎相关的G蛋白偶联受体(Gpro-tein-coupledreceptors,GPCRs)信号转导的一些蛋白作用,包括G蛋白偶联受体激酶、视紫红质抑制蛋白(arrestin)、G蛋白信号转导调节因子、G蛋白偶联致炎受体等。作用于这些信号或其转导过程的药物正成为类风湿关节炎治疗的新策略之一。

芍芪多苷对胶原性关节炎大鼠单核巨噬细胞的影响

目的:研究芍芪多苷(SQDG)在炎症不同时期对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠单核巨噬细胞功能的影响。方法:建立鸡Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型,Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC);贴壁法分离PBMC中的单核巨噬细胞(monocyte/macrophage,Mo/Mφ),吞噬中性红方法检测Mo/Mφ的吞噬功能;小鼠淋巴细胞增殖法检测IL-1活性;MTT法检测T淋巴细胞增殖功能。结果:SQDG(21.25、42.5、85mg/kg)ig给药能增强正常大鼠Mo/Mφ的吞噬功能;抑制CIA大鼠过强的Mo/Mφ的吞噬功能,并使其分泌增高的IL-1水平降至正常范围内;体外试验SQDG(10、20、40、80、160mg/L)使正常大鼠的Mo/Mφ的吞噬功能增强,对IL-1的产生无影响;SQDG作用后的Mo/Mφ对T淋巴细胞增殖功能无明显影响。d7体外给予SQDG可使CIA大鼠增强的Mo/Mφ的吞噬功能降低;分泌升高的IL-1水平降低;和SQDG作用后的Mo/Mφ对T淋巴细胞增殖功能无明显影响;d15、d23体外给予SQDG可使CIA大鼠Mo/Mφ明显增强的吞噬功能降低;升高的IL-1水平降低;和SQDG作用后的Mo/Mφ使增强的T淋巴细胞增殖反应降低。结论:SQDG可能通过调节单核巨噬细胞的功能,调节CIA大鼠异常的免疫功能。

白芍总苷治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用与其影响肝星状细胞功能的关系

目的:研究白芍总苷(TGP)通过影响肝星状细胞(HSC)的功能发挥治疗四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的作用。方法:建立CCl_4诱导化学性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法检测血清及体外HSC培养上清中透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;流式细胞仪检测HSC凋亡率。苏木素-伊红染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变。结果:在CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,TGP给药(40,80,160mg·kg^(-1),ig)均明显降低血清ALT,AST,ALP,HA和PCⅢ水平;升高白蛋白水平及白蛋白球蛋白比值(A/G)。TGP(60,120和240mg·L^(-1))能明显降低HSC体外分泌的HA和PCⅢ水平,促进HSC凋亡,明显改善肝脏病理组织状况。结论:TGP对CCl_4致大鼠肝纤维化具有治疗作用,该作用与其降低HSC分泌HA和PCⅢ、促进HSC凋亡有关。

尼美舒利与阿霉素联合应用对肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨尼美舒利(n im esu lide,NIM)联合阿霉素(adriamyc in,ADM)对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT比色法检测药物的生长抑制作用,应用金正均法判断两药的相互作用,吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变,流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示NIM(25、50、100μmol.L-1)与ADM(0.156,0.313,0.625 mg.L-1)联合应用对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制均有不同程度的协同作用(q>1.15),联合用药组与ADM各单药组相比差异有显著性(P<0.01)。吖啶橙荧光染色可见典型的凋亡形态学特征。FCM检测凋亡显示NIM 100μmol.L-1和ADM2.5 mg.L-1单独及联合应用48 h后DNA直方图上均出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,联合用药组凋亡率(19.6%)明显高于各单独用药组(2.48%和10.6%)。结论NIM与ADM联合应用具有协同抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖与诱导其凋亡作用。

白芍总苷对小鼠化学性肝损伤的保护作用及机制

目的探讨白芍总苷对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及可能机制。方法建立CCl4诱导小鼠化学性肝损伤模型,分光光度法检测血浆中ALT、AST水平和肝匀浆MDA、SOD、GSH-Px含量,HE染色法对肝脏组织作病理检查。结果白芍总苷(60、120、240mg/kg)灌胃给药均能降低血浆中升高的转氨酶水平,病理检查也发现其可明显减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润。同时发现白芍总苷可降低肝匀浆中升高的MDA水平,使降低的肝匀浆SOD、GSH-Px酶活性升高。结论白芍总苷对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤具有保护作用,其机制与其抗自由基、提高抗氧化物酶的活性等有关。

TGFβ信号转导通路及以其为靶点的肝纤维化治疗

肝纤维化是指由多种慢性疾病引起的肝脏持续的创伤修复反应而导致的细胞外基质(ECM)过度沉积和肝脏功能的受损。激活的肝星状细胞(HSC)是促进ECM过度沉积的主要细胞。转化生长因子β(TGFβ)可激活HSC和调节ECM的合成和沉积,被认为是肝纤维化中最关键的因素。介导TGFβ信号进入细胞核内的最主要途径是Smad转导通路,而越来越多的证据表明,非Smad途径也参与了TGFβ的信号转导。TGFβ信号通路对维持内环境的稳态非常重要并涉及多种病理状态。这种具有多重生物活性的细胞因子对正常健康的维持同样非常重要,所以在TGFβ信号转导中通过阻断对纤维化的形成具有特异性作用的下游通路且不影响其他的生物活性而治疗肝纤维化具有重要的挑战性。

褪黑素对CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型肝星状细胞凋亡和功能的影响

目的探讨褪黑素(MT)对肝星状细胞(HSC)凋亡和功能的影响。方法予SD大鼠背部皮下注射CCl4造肝纤维化模型。体内实验MT组大鼠灌胃给予MT〔0.125、0.5、2.0mg/(kg.d)〕8周,HE染色观察病理改变,放免法检测血清透明质酸(HA)与Ⅲ型前胶原(PCⅢ)。体外实验从模型组来源的HSC给予MT(10、0.1μmol/L和1nmol/L),从正常组来源的HSC给予生理盐水;48h后,流式细胞术检测HSC细胞凋亡,放免法检测培养上清中HA、PCⅢ。结果体内实验中,MT各剂量组均明显改善CCl4引起的肝脏病理改变,降低血清HA、PCⅢ。体外实验中,MT10μmol/L显著诱导HSC凋亡,各浓度MT均明显降低HA、PCⅢ的水平。结论MT可能通过诱导HSC凋亡和抑制其合成或分泌HA与PCⅢ而改善CCl4致大鼠肝纤维化。

儿茶素对环磷酰胺诱导小鼠迟发性超敏反应的影响

目的：研究儿茶素对环磷酰胺诱导小鼠迟发性超敏反应的影响。方法：以2,4-二硝基氯苯（DNCB）诱导小鼠迟发性超敏反应（DTH）,致敏后立即腹腔注射（ip）环磷酰胺（Cy）125 mg.kg^-1和致敏前3 d ip Cy 250mg.kg^-1分别诱导小鼠降低和增强的DTH反应,用耳肿胀度、胸腺指数和脾指数作为主要检测指标。以ConA诱导胸腺T淋巴细胞,观察不同剂量或浓度的儿茶素体内外对胸腺T淋巴细胞增殖和IL-2生成的影响。MTT法检测胸腺T淋巴细胞增殖,ConA诱导的胸腺T淋巴细胞培养上清中IL-2活性检测采用活化的小鼠胸腺细胞MTT比色法。结果：于致敏前3 d灌胃儿茶素30,60,120 mg.kg^-1.d^-1,连续7 d,在Cy诱导的DTH反应降低小鼠模型,儿茶素在60,120 mg.kg-1剂量可显著上调其低下的耳肿胀度、胸腺和脾指数,并上调胸腺T淋巴细胞增殖反应以及产生的IL-2水平;在Cy诱导的DTH反应增强小鼠模型,儿茶素60,120 mg.kg^-1可显著下调其增高的耳肿胀、胸腺和脾指数,儿茶素30,60,120 mg.kg-1可显著抑制其增强的胸腺T淋巴细胞增殖反应以及产生的IL-2水平。儿茶素体外在25~200 mg.L^-1浓度时能增强Cy诱导的DTH反应降低的小鼠胸腺T淋巴细胞增殖和IL-2水平;儿茶素在12.5~200 mg.L^-1浓度时能降低Cy诱导的DTH反应增强的小鼠胸腺T淋巴细胞增殖和IL-2水平。结论：儿茶素对小鼠的细胞免疫具有调节作用。