单细胞电泳用于检测人精子DNA链断裂

目的 引进精子单细胞凝胶电泳 (single- cell gel electropherosis,SCGE)实验方法 ,用以检测人类精子 DNA链断裂。方法 载有精子和凝胶的玻片首先在 p H10的弱碱性裂解液中作用 1h,精子核分别用 10 mmol/ L 二硫苏糖醇处理 1h,10 μg/ ml RNA酶处理 4h,2 0 0 μg/ ml蛋白酶 K处理 15 h。精子核用15 μg/ ml的 EB染色 5 min。计数彗星细胞百分率 ,并用本试验室建立的精子 SCGE实验方法观察 H2 O2 在体外条件下对正常精子细胞 DNA的损伤作用。结果 8名受试彗星精子细胞百分率为 2 %～ 38% ,不同个体之间有明显差异。精子细胞在 1.0 mmol/ L H2 O2 的 PBS中孵育 0 .5～ 4h,彗星细胞百分率显著增加 ,并有明显的时间 -效应趋势。精子细胞在 0 .12 5～ 1.0 0 0 mmol/ L H2 O2 的 PBS中孵育 1h,彗星细胞百分率显著增加 ,并有明显的剂量 -效应关系。结论 SCGE可用于检测人类精子细胞 DNA链断裂 ,使用这一实验方法成功地检测出 H2 O2 引起的人类精子 DNA损伤。