骨保护素修饰的Beagle犬骨髓基质细胞表达体系的建立与鉴定

目的利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表达穿梭载体,建立经骨保护素基因(OPG)修饰的Beagle犬骨髓基质细胞(BMSC)瞬时表达体系并检测其表达能力,为基因工程与组织工程联合治疗牙周病提供细胞基础。方法体外分离、培养Beagle犬BMSC,通过脂质体法将已鉴定的目的基因瞬时转染至BMSC,并用RT-PCR鉴定OPG是否有转录,同时通过Westernblot方法检测OPG在6周内的表达水平。结果重组质粒pSecTag2/B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳显示切下的片段均与预期大小相符,经测序证实此基因与GeneBank中[gi:33878056]提供的序列一致;鉴定正确的重组质粒在BMSC中有转录,并且在39d内都明显有OPG表达。结论建立了骨保护素基因修饰的骨髓基质细胞瞬时表达体系。

骨保护素配体在大鼠牙龈炎症组织中的表达

目的观察骨保护素配体(Osteoprotegerin Ligand,OPGL)在鼠炎症性牙龈组织中的表达。方法12只Wistar大鼠随机分为实验组和正常对照组。实验组用丝线结扎大鼠第二磨牙并喂高糖水方法建立牙龈炎模型,术后1周处死动物,制作组织标本,用免疫组织化学方法检测OPGL在大鼠牙龈组织中的表达。结果实验组术后3d局部检查即显示牙龈组织探诊出血;术后1周牙龈探诊出血明显,免疫组织化学结果显示OPGL在鼠炎症性牙龈组织中的阳性表达细胞明显增多;OPGL表达细胞主要为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、牙龈上皮细胞、成纤维细胞。对照组牙龈组织内OPGL阳性表达细胞数目较少。结论大鼠炎症性牙龈组织中OPGL表达升高,提示OPGL可能与牙龈炎症有关。

变链素的纯化

目的从变异链球菌临床株中分离纯化变链素,为进一步从分子水平研究变链素奠定基础。方法通过抑菌活性检测,从变异链球菌临床株中选择出抑菌活性较强的菌株。用氯仿抽提法从该菌株培养液中粗提变链素,经固相萃取和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对粗提物进行纯化。结果获得变链素活性较强的菌株1G。从其200 mL液体培养基中粗提出变链素约15μg,经固相萃取柱洗脱,再经过RP-HPLC的2次纯化,得到有抑菌活性的成分,此为纯化的变链素。结论变链素相对分子质量小,分离提纯步骤复杂,本实验得到纯化的变链素,为下一步研究变链素的氨基酸序列和基因序列奠定了基础。