胆红素对L-02细胞凋亡以及Bcl-2及Bax体外表达影响的研究

目的探讨胆红素对健康人肝细胞系L-02凋亡的影响及Bcl-2、Bax基因对凋亡过程的调节。方法将不同浓度的胆红素(终浓度分别为0、100、150、200、250、300mg/L)作用于体外培养的健康人肝细胞L-02,采用流式细胞仪和碘化丙啶(PI)双标等技术观察细胞的凋亡率和免疫组织化学方法检测细胞凋亡状态及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 Bcl-2蛋白的表达,对照组为阴性表达,低浓度组弱阳性表达,高浓度组强阳性表达。Bax蛋白的表达,对照组可见表达,低浓度组表达增多,高浓度组明显增多,强阳性表达。表明Bcl-2蛋白表达越强,凋亡指数越少;Bax蛋白表达越强,凋亡指数越强。结论 Bcl-2、Bax蛋白均参与了胆红素所诱导的L-02细胞凋亡的调节,并在细胞凋亡的发生、发展中起重要作用。

体外胆红素对L-02细胞生长与凋亡的影响

目的探讨胆红素对正常人肝细胞系L-02生长及凋亡的影响。方法将不同浓度的胆红素(终浓度分别为0、100、150、200、250、300 mg/L)作用于体外培养的正常人肝细胞L-02,分别通过光镜、Hoechst 33258荧光染色、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪Annexin-V和PI双标等技术观察不同浓度胆红素对L-02细胞的相对存活率的影响、细胞的凋亡梯度和凋亡率。结果经不同浓度胆红素溶液作用后,L-02细胞的增殖能力明显下降,其作用呈剂量依赖性;光镜观察显示凋亡细胞变圆,体积缩小;Hoechst 33258荧光强染;MTT法发现细胞生长受到抑制;经琼脂糖凝胶电泳发现200、250、300 mg/L胆红素溶液组可见到DNA梯形条带;流式细胞仪检测示各实验组细胞凋亡率为(1.24±0.72)%、(5.88±1.66)%、(19.69±3.52)%、(31.11±6.94)%、(57.3±8.71)%;均明显高于对照组细胞凋亡率(1.16±0.58)%(P<0.01)。结论胆红素可抑制L-02细胞生长并诱导其凋亡。

无精及严重少精症患者Y染色体微缺失分析

目的探讨Y染色体微缺失与汉族先天性男性不育患者睾丸大小、性激素水平的关系。方法采用多重PCR技术检测209例非梗阻性无精子症患者及122例严重少精子症患者AZFa、AZFb和AZFc 3个区域的6个序列标签位点;对照组为70例已正常生育且精液质量正常的男性。结果 331例男性不育患者中发现了23例Y染色体微缺失,发生率为6.95%。其中,非梗阻性无精子症患者10例,严重少精子症患者13例;23例微缺失患者中,11例为AZFc区缺失,1例为AZFb区缺失,10例为AZFa区缺失,1例为AZFa+AZFc区缺失;70例已正常生育且精液质量正常的男性未检查到Y染色体微缺失。结论 Y染色体长臂微缺失是男性严重精子发生异常的重要原因之一,因此有必要对非梗阻性无精子症及严重少精子症患者进行Y染色体微缺失检测。