浅析医学整合课程中寄生虫学部分的授课策略

目的探讨《人体寄生虫学》内容在医学整合课程中的授课策略和重点。方法从人体寄生虫学的角度分析教学内容的重复情况和模式,因应提出医学整合课程的中人体寄生虫学内容在不同专业的授课内容和课时安排。结果和结论随着高等医学教育改革的不断深入,系统模块整合课程逐渐成为各医科院校采用的教学模式。此课程将人体解剖学、生理学、生物化学、病原生物学和免疫学等基础课程整合,但是在实践过程中,系统模块整合课程也需要进一步的完善和改进。从人体寄生虫学知识传授的角度分析,本模块课程在教学中应注意结合临床,并以临床症状和致病机理作为授课重点。

地摊经济背景下我国食源性寄生虫病防控工作的思考

地摊经济是指通过摆地摊获得收入来源的一种经济形式。地摊经济对缓解就业压力,改善低收入人群的生活具有一定的现实意义,是我国市场经济的补充,有助于促进经济的发展,但也可能为食源性寄生虫病的防控带来一定的挑战。本文简要介绍了当前我国地摊美食中常见食材的食源性寄生虫感染情况以及人群中食源性寄生虫病的流行情况,为地摊经济背景下我国食源性寄生虫病的防控提出了建议。

Chinese1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

目的构建弓形虫Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均简称Wh3)株棒状体蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至p MD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3D结构。结果各组均PCR扩增出约2.1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以p ET-28a和p EGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。

基于USMLE的留学生病原生物学教学体会

病原生物学作为连接基础与临床的桥梁课程,是医学教学中不可缺少的重要内容。为了提高留学生的教学水平,文章根据留学生的文化差异特点,以美国执业医师考试(United states medical licensing examination,USMLE)为指导,探索教学方法、手段、内容等方面的变革,运用多种教学方法开展病原生物学理论课与实验课教学,以期为留学生毕业回国顺利通过执业医师资格考试奠定基础。

nanos1基因在日本血吸虫不同发育时期的定位

目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行系统进化分析。体外转录地高辛(DIG)标记的RNA探针,并将其用于日本血吸虫感染后第18、24和42天3个发育时期的雌雄虫整体原位杂交,以确定nanos1基因在日本血吸虫的定位。结果PCR扩增获得日本血吸虫nanos1基因,生物信息学分析结果表明其编码的蛋白与曼氏血吸虫nanos2蛋白同源性最高。体外转录成功的RNA探针用于日本血吸虫整体原位杂交,在感染后第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺以及18天雌虫的卵巢检测到阳性杂交信号,而各个发育阶段的雄虫均未观察到明显阳性杂交信号。结论日本血吸虫nanos1基因高表达于感染后第18天雌虫的卵巢以及第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺。该研究初步揭示了日本血吸虫nanos1基因的表达模式,为研究nanos1基因的功能提供了重要线索。

弓形虫ROP16蛋白诱导肝癌细胞凋亡的检测

目的观察弓形虫ROP16蛋白转染肝癌细胞Hep G2后,肝癌细胞的凋亡比率的变化以及细胞凋亡蛋白的表达水平变化。方法克隆弓形虫ROP16基因,构建真核转染质粒,并用脂质体转染的方式转染Hep G2细胞,48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡比率,用western blotting和RT-PCR的方法检测细胞凋亡相关蛋白caspase-9、Bax、Bcl-2等的表达水平。结果与未转染细胞组相比,弓形虫ROP16转染Hep G2细胞后,肝癌细胞的凋亡比率明显升高。促细胞凋亡蛋白caspase-9、Bax的蛋白表达水平和基因转录水平均升高,而抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平和转录水平下降。结论 ROP16蛋白可以诱导肝癌细胞Hep G2发生凋亡。

Toll样受体在肝癌细胞的表达及作用

目的观察Toll样受体(TLR2、TLR4和TLR9)在肝癌细胞组织、癌旁正常组织和肝硬化组织中的表达情况。并重点检测TLR9在肝癌细胞中的作用。方法用RT-PCR方法检测肝细胞癌组织、癌旁正常组织和肝硬化组织中的表达情况TLR2、TLR4、TLR9的表达;用TLR9的激动剂Cp G寡脱氧核苷酸(Cp G ODN)10μg/ml分别作用Hep G2细胞6小时、12小时和24小时后,用MTT法检测细胞生长抑制率。结果与正常组织相比,肝癌细胞组织、肝硬化组织中的TLR9的表达水平明显升高,但TLR2和TLR4的表达水平并没有明显统计学差异;TLR 9激动剂Cp G ODN作用于Hep G2细胞后不同时间均能明显促进细胞生长。结论 TLR9激动剂Cp G ODN可促进肝癌细胞的增殖,提示TLR9可能是肝癌治疗的靶点之一。

乙酰乳香酸抑制日本血吸虫虫卵肉芽肿形成及对PLA_2、LTB_4、PGE_2和MMP-9的影响

目的探讨乙酰乳香酸(ABA)抑制日本血吸虫虫卵肉芽肿形成及其对生化介质磷脂酶A2(PLA2)、白三烯B4(LTB4)、前列腺素E2(PGE2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的作用。方法 6周龄SPF级C57鼠随机分成5组:A组为未感染血吸虫尾蚴同期正常鼠,B、C、D、E组经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(20±2)条,小鼠感染尾蚴21 d后,B组经腹腔注射溶剂环糊精280 mg/(kg.d)×20 d,C组感染后不加治疗,D、E组分别腹腔注射ABA140 mg/(kg.d)×20 d、280 mg/(kg.d)×20 d。所有小鼠12周龄时处死取血,收集血清,转氨酶试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST);ELISA法检测血清LTB4和肝匀浆PGE2;RT-PCR法检测肝匀浆PLA2和MMP-9mRNA的表达量;Western blot检测肝匀浆MMP-9的蛋白含量。取小鼠肝组织中叶固定、切片做HE染色,观察并测量肝虫卵肉芽肿面积,计算与正常肝组织的比值。结果 E组ALT、AST和LTB4的水平均显著低于B、C组(P<0.05),D组ALT、AST和LTB4的水平虽均低于B、C组,但差异无统计学意义。E组虫卵肉芽肿面积与正常肝组织的比值均显著小于B、C组(P<0.05),D组虫卵肉芽肿面积正常肝组织的比值虽均小于B、C组,但差异无统计学意义。另外,D组和E组肝匀浆中PGE2的水平均显著低于B组和C组(P<0.05);D组和E组的MMP-9 mRNA表达量显著低于B组和C组(P<0.05),D组和E组的MMP-9 mRNA的表达量显著高于A组(P<0.05);D组和E组MMP-9的水平显著低于B组和C组(P<0.05),D组和E组MMP-9的水平虽高于A组,但差异无统计学意义。A、B、C、D、E组PLA2mRNA的表达量无明显变化。结论ABA对抑制血吸虫虫卵肉芽肿炎症有一定效果,ABA可降低血清LTB4和肝匀浆中PGE2、MMP-9的生成,是抑制肉芽肿炎症反应的重要生化介质。

弓形虫Tg Hly-Ⅲ蛋白诱导虫体从宿主细胞逸出

目的检测外源性弓形虫三型溶血素(TgHly-Ⅲ)蛋白诱导弓形虫逸出的效果和分子机制。方法通过在线软件预测TgHly-Ⅲ的功能与结构,外源表达TgHly-Ⅲ蛋白,并用其孵育感染弓形虫的宿主细胞,用流式细胞仪在不同时间点检测逸出虫体数目;用免疫印迹检测宿主细胞凋亡相关蛋白的表达水平;用不同阻断剂阻断虫体钙离子、运动能力和细胞凋亡、程序性坏死通路,检测TgHly-Ⅲ诱导虫体逸出效果。结果 TgHly-Ⅲ在序列上具有较高的保守性,具有膜穿孔功能;外源表达的TgHly-Ⅲ可有效诱导弓形虫从宿主细胞逸出,并且此种逸出依赖于虫体内钙离子和虫体的运动能力;阻断宿主细胞凋亡途径后,TgHly-Ⅲ诱导虫体逸出效率显著降低,并且TgHly-Ⅲ孵育可以提高宿主细胞凋亡相关蛋白Bax的表达和JNK、p38的磷酸化水平。结论 TgHly-Ⅲ可以通过细胞凋亡途径诱导虫体从宿主细胞逸出,这类逸出与虫体钙离子和运动能力有关。

三峡工程运行后水位变化对安徽和县陈桥洲滩地钉螺孳生分布的影响

目的探讨三峡工程运行后水位变化对长江安徽段下游滩地钉螺孳生分布的影响。方法收集1990-2016年间和县陈桥洲长江日均水位数据、滩地螺情与药物灭螺资料,并结合滩地现场调查了解滩地开发利用情况,分析大坝启用前后水位变化特点,探讨其与滩地开发利用和钉螺孳生分布的关系。结果三峡大坝启用后,陈桥洲长江水位总体有所下降,滩地年淹水天数中位数由大坝启用前的59 d减少至21 d(Z=2.440,P=0.015);圩外滩地开垦面积由大坝启用前的0.95 km^2上升为4.55 km^2,目前已达到圩外滩地面积的85.0%;药物灭螺覆盖率降低,年覆盖率中位数由大坝启用前的33.0%降为0.0%(Z=4.116,P<0.001);钉螺面积下降缓慢,年面积中位数由大坝启用前的317.6 hm^2下降为264.6 hm^2(Z=1.744,P=0.081);钉螺密度下降迅速,年中位数由大坝启用前的0.84只/0.11 m^2下降为0.27只/0.11 m^2(Z=3.779,P<0.001)。结论三峡大坝启用后长江安徽段下游水位下降有利于滩地开发利用,不利于钉螺的孳生和扩散,这对血吸虫病控制起到了积极作用。