医学院校生化教学面临的问题和改革的探讨

生物化学是医学院校重要的基础课 ,也是当代医学和生物学中的前沿学科。然而医学院校的生化教学面临许多问题和挑战。本文论述了医学院校生物化学教学面临的五个问题 。

医学院校生物技术专业酶工程教学初探

酶工程课程是生物技术专业的专业课。医学院校的生物技术专业学生培养在基于现代生物技术学习的同时,要充分利用"医"和"药"的资源,培养有"专业"特色的生物技术本科生。本文结合工作实践,探讨如何提高教学质量,希望能对培养有特色的医学院校的生物技术专业本科生有所启发。

人PTP1B基因cDNA全长的克隆和原核系统表达

目的构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cD-NA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达。方法取2型糖尿病人(BMI>28kg.m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收构建克隆载体pMD-hPTP1B,测序后设计带酶切位点BamHⅠ和EcoRⅠ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE后用Westernblot检测其特异表达,并进一步对rhPTP1B诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化。结果测序证实所得的hPTP1BcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hPTP1B的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质是其不溶性的包涵体形式。IPTG诱导的最佳浓度是0.05mmol.L-1,时间为5h,温度为37℃。结论成功克隆了人PTP1B基因,构建了相应的原核表达载体并对原核体系诱导表达的条件进行了优化,使其能在DE3中高效表达,为筛选高特异的小分子抑制剂和制备相应的单克隆抗体打下坚实的基础。

乳中生物活性物质的研究进展

哺乳动物的乳不仅营养物质丰富,而且含有激素、生长因子、酶、抗体和非抗体保护蛋白等多种生物活性物质,乳蛋白中蕴藏着大量生物活性肽。此外乳中还含有活细胞。这些生物活性物质对婴儿或新生幼仔的代谢、生长发育、免疫和抗菌等有非常重要的作用,有些生物活性物质参与乳腺的生长分化和保护。本文综述了乳源激素和生长因子、酶、抗体、非抗体保护蛋白以及生物活性肽等生物活性物质及其研究进展。

影响乳成分含量的因素

乳中各成分含量受多种因素的影响 ,这些因素包括泌乳时间、遗传、食物、转基因技术、环境、乳腺炎和酮病等。了解和调控这些因素有利于获得优质乳和理想的动物生长类型。

搭建工作室平台,助力青年教师教学能力提升

基于目前高校青年教师教学能力薄弱的现状,通过名师工作室平台,开展了示范教学、说课评课、听课反思、教学讲座、教改活动、参加比赛及学术交流等一系列教学学术活动。探讨并实践青年教师教学能力培养的渠道,以期为提升青年教师教学能力助力,为提高教学质量提供支撑和保障。

蛋白磷酸酶LY1基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

目的构建蛋白磷酸酶LY1基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法PCR扩增LY1的CDs基因片段,并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)-LY1。经限制性内切酶Nhe I、XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。SDS-PAGE、Western blot方法检测重组蛋白的表达。结果获得全长为1179bp的LY1基因片段,以构建的重组质粒pET28a(+)-LY1转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出分子量约为42kD的重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中。Western blot方法检测出LY1融合蛋白的表达。结论成功构建了原核表达载体pET28a(+)-LY1,并表达出重组LY1蛋白,为进一步单克隆抗体的制备和生物信号转导的相关研究奠定了实验基础。

羊毛固醇合成酶杂合敲除小鼠全脑转录组学分析

目的探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能异常及胆固醇水平变化对大脑功能分子水平的影响。方法通过RNA-Seq分析LSS(+/-)小鼠及野生型(WT)C57BL/6小鼠基因的表达,KEGG富集分析差异基因涉及的信号通路。用实时定量PCR以及Western blot法检测差异基因的表达。结果通过RNA-Seq分析,LSS(+/-)杂合敲除导致小鼠大脑中320个基因表达出现变化,其中上调基因145个,下调175个,KEGG富集分析差异基因涉及神经活化的受体与配体通路、河马信号途径及谷氨酸能突触途径。实时定量PCR分析结果显示CCKBR与Htr5b分别出现上调。Western blot结果显示CCKBR基因在LSS(+/-)小鼠全脑组织总蛋白中明显高表达。结论LSS(+/-)杂合敲除会影响小鼠大脑功能及行为。

一株新蛋白磷酸酶基因(Sy2)的原核表达载体构建及鉴定

目的用含有人Sy2酪氨酸磷酸酶基因的pOTB7质粒,构建Sy2原核表达重组子,并用该重组子转化原核细胞,表达出含Sy2的融合蛋白,为将来以此融合蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,进一步研究该基因的功能打好基础。方法用PCR扩增Sy2的PP2C结构域序列,限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pET28a(+)中,酶切、测序等鉴定后,重组子pET28a(+)-Sy2转染原核细胞,用载体标签His抗体经SDS-PAGE、Western blot方法检测Sy2重组蛋白的表达。结果成功构建出pET28a(+)-Sy2重组质粒,Western blot方法检测出融合蛋白的表达。结论成功构建原核表达载体并在原核细胞中表达成包涵体,这种包涵体可以作为抗原制备Sy2的单克隆抗体。

人羊膜材料的深低温(-196℃)保存方法可行性研究

目的探讨用液氮进行人羊膜深低温保存的可行性方法采用液氮深低温保存法及纯甘油4℃保存法保存人羊膜30 d、60 d和90 d,分别进行LDH活性及b FGF表达量的检测,并与新鲜人羊膜进行比较。结果用液氮深低温保存的人羊膜,在保存90 d后,其LDH活性及b FGF表达量均明显高于用纯甘油4℃保存的人羊膜,差异具有统计学意义(P<0.05),并且与新鲜羊膜LDH活性及b FGF表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论液氮深低温保存法对羊膜进行保存的方法是安全可行的。