冠心病患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞、高敏C反应蛋白、白细胞计数的变化及意义

目的:探讨不同类型冠心病(CHD)患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Treg)和CD4^+CD25^(high)T细胞(CD4^+CD25^(high)Treg)水平的变化。同时对照高敏C反应蛋白(hsCRP)和外周血白细胞计数(PWBC)的情况,探讨免疫反应、炎症与冠状动脉粥样斑块不稳定性之间的联系。方法:选取CHD患者97例,其中急性心肌梗死(AMI)组40例,不稳定型心绞痛(UAP)组40例,稳定型心绞痛(SAP)组17例。另外选取冠状动脉造影正常者和健康体检者21例作为对照组。采用流式细胞术检测各组的外周血CD4^+CD25^+Treg和CD4^+CD25(high) Treg水平,同时检测各组受检者的hsCRP和PWBC计数。结果:AMI组和UAP组患者体内CD4^+CD25^+Treg占CD4^+T细胞的比例较SAP组和对照组极其显著减少(P<0.01)。各组的CD4+CD25^(high)Treg水平差异无显著性(P>0.05)。AMI组、UAP组、SAP组和对照组的hsCRP呈现逐渐减低的趋势(P<0.05)。PWBC计数以AMI组为最高,与另外3组比较差异均有显著性(P<0.05);UAP组次之,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。CHD患者PWBC计数和hsCRP呈正相关(r=0.307,P<0.01),CD4^+CD25^+Treg和PWBC计数呈负相关(r=-0.181,P<0.05)。结论:急性冠脉综合征(ACS)患者动脉粥样斑块的不稳定与炎症和免疫反应有关。ACS患者外周血液具有免疫负调节作用的CD4^+CD25^+Treg的水平显著减低,打破了自身免疫平衡,可能是导致动脉粥样斑块的不稳定的原因。

FQ-PCR检测HPV基因型的临床应用分析

目的了解人乳头瘤病毒感染患者HPV6,11型和HPV16,18型的分布。探讨HPV-DNA分型检测的临床应用价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测1567例HPV感染者疣体组织或分泌物中的HPV6,11型和HPV16,18型。结果男女性均可感染HPV6,11和HPV16,18型,男性感染者以HPV6,11型为主,感染率为27.68%(157/567)。女性1000人次中,确诊感染HPV有659人,HPV阳性320人次,检出率为32%,其中低危型208例,即HPV6,11型阳性率为31.56%;高危型112例,即HPV16,18型为16.99%。结论FQ-PCR具有灵敏度高、特异性强、简捷方便的特点,适于临床推广应用。HPV DNA分型检测技术可以快速区分高危型及低危型HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和宫颈癌变作出可能性预测。

800例骨髓细胞形态学诊断结果分析

目的探讨骨髓细胞形态学与临床血液病诊断的相关性。方法将2003~2006年该院门诊及住院部送检的800例骨髓穿刺合格标本进行细胞形态学检查与组化染色,作出实验室骨髓细胞形态学诊断。结果对骨髓细胞形态学诊断结果分析,发现骨髓细胞学诊断与临床诊断结果符合率较高的疾病分别是：缺铁性贫血（IDA）占93%,特发性血小板减少性紫癜（ITP）占91.5%,急性淋巴细胞白血病占83.2%。结论骨髓细胞形态学诊断对血液病的诊断及对原因不明疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断有着非常重要价值,仍然是目前血液系统疾病诊断及鉴别诊断最便捷、最基础、最有效的手段之一。

重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达

目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM-T/sig-tumstatin为模板,扩增与TNF带重叠区的型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段,以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF。sig-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRE Sneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-TNF片段(558bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRE Sneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRE Sneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α。转染了pIRE S-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别。结论成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-α的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在2型糖尿病肾病早期诊断中的应用

目的 比较半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C）、血肌酐（Scr）和肌酐清除率（CCr）在2型糖尿病肾病早期诊断中的价值。方法 将62例2型糖尿病患者按尿白蛋白排泄率（UAE）分为3组，A组为正常蛋白尿患者20例（UAE＜20μg／min），B组为微量蛋白尿患者23例（UAE20～200／μg／min），C组为大量蛋白尿患者19例（UAE〉200μg／min）。测定各组血肌酐及CystatinC，并计算肌酐清除率。同时检测尿CystatinC和CCl-微球蛋白（a1-M），并按尿a1-M间的浓度分为阴性组、微量组和阳性组。结果 血CystatinC和CCr在各组间的差异有显著性（P〈0．05），而Scr在A组和B组间的差异无显差著性，而C组的Scr高于A、B组，差异有显著性（P〈0．05）。尿Cystatin C值在各组病例间的差异均有显著性（P〈O．01）。结论 Cystatin C是临床上诊断早期糖尿病肾病的敏感指标之一。

流式细胞术细菌计数诊断尿路感染的临床应用价值

目的探讨流式细胞术细菌计数诊断尿路感染的临床应用价值。方法对200例怀疑尿路感染患者利用UF-100进行尿细菌定量计数,同时做定量细菌培养并进行对比。结果UF-100测定细菌计数,阴性预测值为87.65%,阳性预测值为80.67%,其诊断尿路感染的敏感性为90.56%,特异性为75.53%。结论UF-100尿细菌计数可以作为临床诊断尿路感染的一种筛选试验,具有方便、经济、短时间内出结果的特点,值得在临床推广应用。

构建hnRNP B1相对定量的FQ RT-PCR检测方法

目的建立一种荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ RT-PCR)检测肺癌患者外周血hnRNP B1mRNA表达的相对定量方法。方法以hnRNP B1为待测基因,以β-actin为参照进行检测,建立标准曲线,确定实时RT-PCR的扩增效率;优化反应条件,使扩增效率接近100%,检测待检标本hnRNP B1和β-actin的循环阈值(Ct)。结果该法检测的最低拷贝数为103,线性范围为103～107拷贝,批内和批间变异系数(CV)分别为3.4%和11.3%。结论该方法具有灵敏、特异、数据处理简便可靠等特点,为其他肿瘤患者外周血中肿瘤细胞的检测提供了方法学启示。

慢性肾脏病3-5D期患者血镁浓度与腹主动脉钙化的关系

目的探讨慢性肾脏病(CKD)患者血镁浓度与腹主动脉钙化(AAC)之间的关系及干预钙化的措施。方法选取CKD3-5D期患者共67例,收集患者临床资料,根据是否检出AAC分为钙化组和无钙化组,比较两组间指标差异,分析AAC的高危因素。结果 15例有AAC(22.4%),52例无AAC(77.6%);钙化组年龄、血钙浓度、血磷浓度、钙磷乘积高于无钙化组(P<0.05),钙化组血镁水平低于无钙化组(2.2±0.2 vs 2.4±0.4)mg/dl(P<0.05);性别、体质量、血清白蛋白、碱性磷酸酶、全段甲状旁腺素(i PTH)、25羟维生素D、胆固醇和三酰甘油两组间均未见明显差异;二分类逻辑回归分析结果显示:年龄、血磷浓度、血镁浓度和钙磷乘积均为AAC独立的影响因素,血镁经过年龄、性别、磷、钙磷乘积和i PTH校正后差异有统计学意义(OR=0.072,95%CI:0.006~0.836 mg/dl,P=0.035)。结论高龄、高磷及高钙磷乘积患者易发生AAC,低镁是除年龄、血磷和钙磷乘积外AAC独立危险因素,提高体内血镁浓度可能有利于延缓AAC进展。

长链非编码RNA uc002ktr.3在肺鳞癌顺铂耐药中的作用研究

目的研究肺鳞癌顺铂敏感和耐受组织中长链非编码RNA的表达差异,探讨长链非编码RNA uc002ktr.3在肺鳞癌顺铂耐药中的作用。方法利用ArraystarlncRNA芯片技术检测顺铂敏感和耐药的肺鳞癌组织中lncRNAs;通过siRNA干扰技术降低肺鳞癌SK-MES-1细胞中uc002ktr.3表达,CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(IC 50 )的变化,Western blot法检测SK-MES-1细胞中Zeb1和E-cadherin蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化。结果聚类分析顺铂耐药和敏感的肺鳞癌组织中长链非编码RNA表达谱显示,共有 1 220 个lncRNAs存在差异性表达(差异倍数>2.0);CCK-8实验表明,干扰uc002ktr.3的SK-MES-1组相对于阴性对照(siRNA-NC)组的IC 50 显著降低;Western blot证实,干扰uc002ktr.3可显著降低SK-MES-1细胞中Zeb1蛋白表达而增加E-cadherin蛋白;凋亡检测结果显示,在相同剂量顺铂药物作用下,干扰uc002ktr.3后SK-MES-1细胞凋亡率显著高于siRNA-NC组。结论长链非编码RNA uc002ktr.3在肺鳞癌顺铂耐药组织中表达显著升高,干扰uc002ktr.3表达可明显增加肺鳞癌顺铂药物敏感性,uc002ktr.3可作为治疗肺鳞癌顺铂耐药的重要分子靶标。

miR-223-3P对肺鳞癌细胞顺铂敏感性的影响

目的研究miR-223-3p对肺鳞癌细胞顺铂(CDDP)敏感性的影响。方法通过分别升高或降低(miR-223-3p mimics、NC-mimics、miR-223-3p inhibitor、NC-inhibitor)肺鳞癌NCI-H520和SK-MES-1细胞内miR-223-3p的含量后,qRTPCR检测细胞内miR-223-3p基因表达水平;CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测细胞加入CDDP药物刺激后凋亡率的改变(分别设计四组不同的处理:miR-223-3p mimics+CDDP、NC-mimics、miR-223-3p inhibitor+CDDP、NC-inhibitor);Transwell实验检测SK-MES-1细胞迁移能力的变化;Western blot法检测SK-MES-1细胞中Bax、ZEB1和E-cadherin的变化。结果CCK-8实验结果表明,miR-223-3p mimics组的IC50低于对照组的IC50,miR-223-3p inhibitor组的IC50高于对照组的IC50;流式细胞术凋亡检测结果显示,miR-223-3p mimics+CDDP(80μmol/L)组细胞凋亡率增加,而miR-223-3p inhibitor+CDDP(80μmol/L)组细胞凋亡率减少;Western blot证实,同时分别升高或降低肺鳞癌细胞内的miR-223-3p含量后,ZEB1蛋白相应的降低和升高,且Bax、E-cadherin蛋白相应的升高和降低。结论miR-223-3p作为抑癌基因影响肺鳞癌细胞对CDDP的敏感性,可作为治疗肺鳞癌CDDP耐药的重要分子靶标。

DHRS2蛋白对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的研究DHRS2蛋白对肠癌耐药细胞敏感性影响及其机制。方法利用串联质谱标签法(TMT)对结直肠癌耐药细胞系HCT116/OXA与其亲本进行差异蛋白筛选;CCK-C法检测结直肠癌耐药细胞株HCT116/OXA对奥沙利钳敏感性及沉默DHRS2蛋白对其耐药性影响;蛋白质印迹法验证差异表达蛋白以及检测沉默DHRS2蛋白后对相关信号通路蛋白调节作用。结果耐药细胞株HCT116/OXA中DHRS2蛋白水平明显高于亲本细胞株(P<0.001);沉默DHRS2蛋白可增加HCT116/OXA对奥沙利钳的敏感性;同时下调P53蛋白和切除修复交叉互补基1(ERCC1)蛋白的表达。此外,干扰P53蛋白后,ERCC1蛋白表达也明显减少。结论沉默DHRS2蛋白可部分恢复结直肠癌耐药细胞株HCT116/OXA对化疗药物敏感性,其机制可能为通过下调P53蛋白进而抑制ERCC1蛋白表达引起。

tumstatin基因修饰巨核细胞联合化疗抑制肺腺癌小鼠皮下移植瘤生长

目的探讨肿瘤抑素(tumstatin)转基因巨核细胞联合化疗对肺腺癌小鼠生存率的影响和皮下移植瘤生长的抑制作用。方法制备tumstatin转基因巨核细胞,通过小鼠背部接种肺腺癌A549细胞,建立小鼠肺腺癌移植瘤模型。小鼠皮下瘤长径达到5 mm后随机分为4组:生理盐水对照组(A组,对照组),吉西他滨(GEM)化疗组(B组,单纯化疗组)、GEM联合巨核细胞组(C组)、GEM联合tumstatin转基因巨核细胞组(D组);其中B、C、D三组为治疗组。对各组小鼠分别进行给药24 d,每3 d测1次肿瘤体积。在治疗第15天眼球取血,通过血液分析仪检测血细胞值;第24天剥离瘤体,测量大小及质量,免疫组织化学法检测肿瘤内微血管密度(MVD),HE染色检测肿瘤组织坏死情况,治疗期间记录小鼠生存情况。结果各治疗组肿瘤体积生长曲线显著慢于生理盐水组,其中D组瘤体生长最慢且该组生存率较单纯化疗组(B组)得到明显提高;与其他三组相比,D组小鼠皮下瘤MVD受到显著抑制并引起肿瘤组织重度坏死,且相应小鼠体内保持较正常的血细胞水平。结论 tumstatin转基因巨核细胞联合化疗较单独化疗显著抑制肿瘤新生血管生长并可提升肺腺癌小鼠的生存率。

血栓性疾病患者抗凝蛋白检测的临床意义

目的探讨血栓性疾病患者蛋白C（PC）、蛋白S（PS）和抗凝血酶（AT）活性水平检测在排除常见获得性血栓危险因素中的临床意义。方法检测85例血栓性疾病患者与50名正常健康对照者血浆PC、PS、AT活性水平，并作比较分析。结果85例血栓性疾病患者中位年龄42（17～69）岁，其中≤45岁者60例（70．6％）。动脉血栓组和静脉血栓组患者PC、PS、AT活性均明显低于正常对照组（P〈0．01）；复发组PC、PS、AT平均活性低于初发组（P〈0．01）；年龄≤45岁患者组PC、PS、AT平均活性低于45岁以上组（P〈0．01）。共有26例（30．6％）患者存在抗凝蛋白活性降低；PS活性降低的发生率最高（10．6％），其次为PC活性降低（8．2％），AT活性降低和联合活性降低（各占5．9％）。结论无明确常见获得性血栓危险因素的血栓患者发病年龄较轻，且普遍存在抗凝蛋白水平低下；抗凝蛋白活性降低不仅与血栓性疾病的发生有关，而且与血栓复发密切相关。

异质性万古霉素耐药金黄葡萄球菌分子流行病学特征

金黄葡萄球菌对万古霉素耐药已成为全世界共同关注的问题。为了解本地区异质性万古霉素耐药金黄葡萄球菌（h-VRSA）的分子遗传学起源，以及与耐甲氧西林金黄葡萄球菌（MRSA）国际流行株之间的关系，我们采用多位点测序分型（multilocus sequence typing，MIST）联合葡萄球菌盒式染色体（staphylococcal cassette chromosome mec，SCCmec）分型对临床标本中筛选出的13株h—VRSA进行分析，报道如下。

抗环瓜氨酸肽抗体 抗角蛋白抗体 抗核周因子自制质量控制品的制备及评价

目的探讨实验室抗CCP、AKA、APF这3种自身抗体自制质控品的制备及评价,为其他自身抗体自制质控品的制备提供参考。方法将阳性血清和体检健康人群的阴性血清按比例进行混合,调制成所需浓度的混合血清,再进行56℃加热30 min灭活,离心过滤后分装,置-20℃以下冰箱保存。检测20瓶质控品以及连续检测20次同瓶质控品计算变异系数(CV)值来测定混合血清的瓶间差。37℃水浴储存条件下每天检测10次求出偏差,来判断37℃条件下的稳定性。-20℃冷冻储存,每周检测1次,求出每月CV值,来判断长期稳定性。结果37℃条件下,在长达8 d的时间中,抗CCP抗体的偏倚都小于±20%的偏倚要求,AKA、APF的结果都在上下一个滴度的可接受范围内。在瓶间差测试中,抗CCP抗体的CV瓶间为3.2%,远<20%的瓶间差要求,而AKA、APF的瓶间差可视为0。在-20℃长期稳定性实验中,累计9个月的检测结果,抗CCP抗体总CV为10.6%,<20%的要求,AKA、APF结果都在上下一个滴度的可接受范围内。所有阴性质控品的检测结果均为阴性。结论抗CCP、AKA、APF这3种抗体自制混合血清质控品的性能良好,且该方法简单,可操作性强,适用于各级医院和实验室,也为其他自身抗体室内质控品的制备提供参考。