多重耐药鲍曼不动杆菌外排泵机制的初步研究

目的研究外排泵在多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,为进一步研究其耐药机制奠定基础。方法采用M-H琼脂稀释法,测定添加和不添加抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺(PAβN)前后鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、环丙沙星和头孢他啶5种药的最低抑菌浓度(MIC)。结果添加PAβN后,74株多重耐药鲍曼不动杆菌对5种药的MIC值下降4倍以上的菌株数分别为亚胺培南45(60.81%)株、美罗培南70(94.59%)株、庆大霉素0(0%)株、环丙沙星4(5.41%)株、头孢他啶45(60.81%)株。结论外排泵机制可能是引起鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶耐药的主要机制;外排泵机制对环丙沙星和庆大霉素耐药不起主要作用。

日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶和果糖二磷酸醛缩酶重组疫苗对小鼠的保护性免疫效果观察

目的利用重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)辅以佐剂免疫BALB/c小鼠,观察基于2-DE和血清蛋白质组筛选的上述二种重组抗原的免疫保护效果;通过福氏佐剂和纳米C60佐剂在增强免疫效果方面的比较,探讨纳米C60佐剂在血吸虫分子疫苗接种中的价值。方法从重组质粒转化的E.coli中诱导表达rSjLAP和rSjFBPA,纯化并检测含量。将6周龄BALB/c小鼠随机分为7组,生理盐水对照组(A组)、rSjLAP+福氏佐剂组(B组)、rSjFBPA+福氏佐剂组(C组)、rSjLAP+rSjFBPA+福氏佐剂组(D组)、rSjLAP+纳米C60佐剂组(E组)、rSjFBPA+纳米C60佐剂组(F组)、rSjLAP+rSjFBPA+纳米C60佐剂组(G组),每组6只。除A组外,B～G组小鼠皮下多点注射rSjLAP或rSjFBPA100μg,共免疫3次,每次间隔2周。用尾蚴感染小鼠6周后,处死小鼠,收集成虫,计算减虫率;收集肝组织虫卵,计算减卵率。结果 B～G组的减虫率分别为:35.59%、33.05%、37.98%、38.99%、43.21%和45.75%,与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);B～G组的减卵率分别为:40.25%、42.57%、48.88%、41.64%、45.44%和46.88%,与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BALB/c小鼠经rSjLAP和rSjFBPA辅以福氏佐剂或纳米C60佐剂免疫,获得了一定的免疫保护力;福氏佐剂和纳米C60佐剂均增强了重组疫苗的免疫效果,但两种佐剂的免疫增强效果差异无统计学意义。

大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子真核表达载体的构建及其体外表达的鉴定

背景:星形胶质细胞被激活后表现出神经干细胞的特性,细胞表面的神经营养因子(表皮生长因子、睫状神经营养因子)受体超表达,通过改善复杂的内环境,有利于定向诱导神经干细胞向神经元的分化。目的:构建大鼠pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF真核表达质粒,检测其在cos-7细胞中的共表达。方法:采用反转录-聚合酶链反应技术从大鼠颌下腺、坐骨神经组织总RNA中扩增出表皮生长因子、睫状神经营养因子基因功能区,将上述基因片段分别连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选、双酶切鉴定后送测序。将构建成功的两种重组载体单独及共转染cos-7细胞,Western blot法鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白的瞬时表达。结果与结论:反转录-聚合酶链反应结果证实成功获得大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子cDNA。DNA序列分析证实2种真核表达载体中的表皮生长因子、睫状神经营养因子序列与GenBank中目的序列一致。脂质体介导转染cos-7细胞48h后,Western blot鉴定重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白在cos-7细胞中的表达,分别在Mr6000,22000处出现阳性条带。提示大鼠表皮生长因子、睫状神经营养因子基因的真核表达载体pSecTag2/HygroB-EGF、pSecTag2/Hygro B-CNTF构建成功,共转染cos-7细胞后能够共表达重组表皮生长因子、睫状神经营养因子蛋白。