浅谈病理学实验教学中多种现代教学技术的应用

病理学是一门重要的医学形态学学科,在基础医学与临床医学专业之间起着承上启下的桥梁作用。而病理学实验教学是医学生学好病理学的重要环节。随着科学技术的发展,多种现代教学技术逐渐在病理学实验教学中普及。该文从工作角度探讨多媒体、虚拟切片系统和显微数码互动系统等新技术的应用对病理学实验教学带来的革新。

白藜芦醇通过miR-512-3P/DUSP1轴抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的自噬并促进细胞凋亡

目的探究白藜芦醇(resveratrol,RES)抑制葡萄膜黑色素瘤细胞(choroidal melanoma cells,MUM2B)自噬并促进其凋亡的调控作用及机制。方法将MUM2B分为对照组、实验组,分别用不同浓度的RES(0、10、20、40、60、80μmol·L-1)处理细胞。划痕实验检测细胞迁移率,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,通过qRT-PCR和Western blot检测miR-512-3P、DUSP1以及其他目的蛋白的表达,RIP实验验证miR-512-3P靶向沉默DUSP1,使用miR-512-3P的mimic,体外评估miR-512-3P的生物学意义。结果RES抑制了MUM2B细胞的增殖与侵袭,减弱细胞自噬,促进细胞凋亡;MUM2B细胞p-ERK、p-MTOR蛋白表达明显增加,miR-512-3P表达增加;过表达miR-512-3P靶向抑制了DUSP1的表达,并促进了MUM2B细胞的凋亡。结论RES通过促进miR-512-3P的表达靶向抑制DUSP1,从而抑制MUM2B的自噬并促进其凋亡。

青藤碱抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症状

目的探讨青藤碱对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的变化。方法Wistar大鼠随机分为对照组、AA模型组、(100、200、400)mg/kg青藤碱组和100 mg/kg雷公藤组,每组10只。除对照组外,其余均采用Freund完全佐剂建立AA模型。建模后12 d,对照组和模型组给予等量生理盐水,其余各组分别灌胃给予相应药物,每天1次,连续16 d。通过多发性关节炎和关节肿胀度评价AA大鼠关节情况,Western blot法检测滑膜组织NLRP3蛋白水平,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NLRP3表达和分布;ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与对照组比较,模型组多发性关节炎明显,关节肿胀度增加,青藤碱各治疗组和雷公藤组大鼠多发性关节炎和关节肿胀度明显降低;青藤碱各治疗组滑膜组织NLRP3蛋白表达减弱,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降。结论青藤碱通过抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善AA大鼠关节炎症。

骨折患者住院期间行全程量化护理对术后康复的作用

目的:探究骨折住院患者行全程量化护理对其术后康复的作用。方法:86例骨折手术住院患者随机分为对照组(41例)和研究组(45例)。对照组患者实施常规护理,研究组患者实施全程量化护理,两组住院至出院康复护理指导1~4周;应用焦虑与抑郁自评量表(SAS、SDS)评分及Barthel指数改变,探讨两组骨科住院手术患者的恢复情况,同时,开展两组患者出院前护理满意度调查。结果:86例患者均获得手术成功,研究组患者较对照组骨性愈合率显著上升(P<0.05);1~4周后,与护理前比较,护理后两组患者SAS、SDS评分均下降,Barthel指数升高,且研究组比对照组下降更为明显(P<0.05),研究组患者的护理满意度也优于对照组(P<0.01)。结论:骨科住院患者采取全程量化护理有利于骨折患者的术后康复,可有效降低患者的不良情绪,改进护理满意度。

白藜芦醇对AA大鼠关节成纤维样滑膜细胞凋亡诱导作用及可能机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对低浓度H2O2处理的大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)成纤维样滑膜细胞(FLS)影响,及与线粒体氧化应激蛋白去乙酰化酶3(sirtuins 3,SIRT3)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的关系。方法20只SD大鼠,随机分为正常组、模型组,模型组足趾皮下注射弗氏完全佐剂,造模后d 28处死大鼠,检测大鼠血清氧化应激指标;免疫组织化学染色检测SIRT3、MnSOD在膝关节滑膜组织中的表达;CCK-8法观察不同浓度的H2O2,以及Res处理对FLS的增殖影响;Hoechst 33258和Western blot检测Res对低浓度H2O2处理FLS的凋亡和SIRT3、MnSOD蛋白表达的影响。结果与正常组大鼠比较,AA大鼠血清呈氧化应激状态,滑膜组织中SIRT3、MnSOD表达增加;低浓度H2O2可促进FLS增殖,Res能剂量依赖性抑制低浓度H2O2处理的增殖,增加FLS凋亡;且随着Res的剂量增加,FLS中SIRT3、MnSOD蛋白表达降低。结论低浓度H2O2可促进AA大鼠FLS生长,Res处理可抑制FLS增殖,促进FLS的凋亡,机制可能与Res抗氧化应激作用有关。

E-钙黏附素、自分泌运动因子受体在乳腺癌中的表达

目的了解E钙黏附素(ECD)、自分泌运动因子受体(AMFR)在乳腺癌组织中的表达状况及临床病理意义。方法应用免疫组化SABC方法研究101例乳腺浸润性导管癌组织ECD、AMFR的表达。结果乳腺浸润性导管癌ECD表达明显下调,组织学Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级组相比,差异有显著性(P<0.05),ECD表达随级别增高而减弱。ECD表达水平与淋巴结是否转移相关(P<0.05)。与正常乳腺组织相比,浸润性导管癌AMFR明显高表达,表达水平与乳腺癌组织学分化差、TNM分期有关(P<0.05)。ECD与AMFR表达强度呈负相关(P<0.05)。结论乳腺浸润性导管癌同时存在ECD表达下调和AMFR表达上调,联合运用这两项标记对于估计乳腺癌的生物学特性具有重要价值。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^(-1))5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^(-1);5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。

N-乙酰半胱氨酸对佐剂性关节炎大鼠治疗作用及机制

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用,以及Toll样受体2(TLR2)炎症因子的改变。方法:SD大鼠50只,随机取10只为对照组,40只进行AA造模,造模10 d后,再均分为模型组及NAC低、中、高剂量组(灌胃给药量50、100、200 mg/kg),NAC组给药16 d,应用关节肿胀度和关节炎指数评价NAC对AA大鼠治疗作用;免疫组化染色和Western blot观察关节滑膜组织中TLR2蛋白表达;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)水平。结果:与对照组比较,模型组关节肿胀、关节炎指数明显升高,NAC低、中、高剂量组大鼠关节肿胀和关节炎指数降低明显,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);NAC低、中、高剂量组滑膜组织TLR2蛋白表达减弱,炎症因子TNF-α、IL-1β下降,IL-10上升,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:NAC可改善AA大鼠关节炎症状,其机制可能与抑制AA大鼠TLR2和调节下游炎症因子通路有关。

N-乙酰半胱氨酸通过阻断Nrf2/Keap1通路抑制(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制。方法SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d后处死大鼠。硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)含量、羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,免疫组织化学染色法检测踝关节滑膜组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)蛋白表达;体外培养和鉴定AA-FLS,CCK-8法检测(0、0.3、0.9、3、10、30、90、180)μmol/L NAC对5μmol/L H_(2)O_(2)处理的AA-FLS活力的影响,采用MitoSOX线粒体活性氧荧光探针检测AA-FLS中线粒体活性氧(ROS)含量,Western blot法检测(0、3、10、30)μmol/L NAC对低浓度H_(2)O_(2)处理AA-FLS的Nrf2、Keap1蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,AA模型大鼠血清MDA水平增加、SOD、GSH-Px水平降低,滑膜组织中Nrf2表达升高、Keap1表达降低;免疫细胞化学染色证实分离培养的细胞是AA-FLS,NAC可浓度依赖性抑制H_(2)O_(2)处理的AA-FLS增殖,且线粒体ROS含量下降,Nrf2、Keap1蛋白表达降低。结论NAC可抑制H_(2)O_(2)处理后的AA-FLS增殖,其机制可能与阻断Nrf2/Keap1通路有关。

Teach-back健康教育在膝关节置换患者围手术期护理中的应用

目的:对膝关节置换患者围手术期护理中进行Teach-back健康教育应用评价。方法:选择64例近期行膝关节置换术患者,随机分为对照组与干预组,每组32例,在围手术期,对照组患者接受常规健康指导,干预组患者接受Teach-back健康教育,成立护理健康教育小组,对患者进行行为干预、自我效能与自我管理,出院予健康手册指导。比较两组患者功能锻炼依从性、特种外科医院(HSS)膝关节评分。结果:在膝关节置换患者围手术期护理中,干预组患者采取Teach-back健康教育,患者功能锻炼依从性、HSS膝关节评分等均显著优于常规健康指导的对照组。结论:关节置换患者围手术期进行Teach-back健康教育有利于提高患者功能锻炼依从性,促进康复疗效。

白藜芦醇通过下调MnSOD诱导类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡

目的探讨锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白表达改变在白藜芦醇(Res)介导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和凋亡中的作用。方法 Res处理RA-FLSs后,CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测MnSOD蛋白表达水平;慢病毒感染RA-FLSs后,8 mg·L^(-1)的嘌呤霉素筛选感染后细胞,以此建立3种稳定细胞系:MnSOD过表达、MnSOD干扰、MnSOD对照;激光共聚焦显微镜检测每种细胞系在5μmol·L^(-1)过氧化氢(H_2O_2)和200μmol·L^(-1) Res处理后线粒体活性氧(mtROS)水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 Res抑制RA-FLSs增殖,降低细胞内MnSOD表达;荧光倒置显微镜与Western blot检测证实慢病毒可高效感染RA-FLSs,使MnSOD表达上调和抑制。与对照组相比,在同种因素处理下,MnSOD过表达组mtROS水平降低,凋亡细胞减少。而MnSOD干扰组则呈现相反的结果。结论 Res可通过抑制MnSOD表达来上调mtROS水平,从而促进RA-FLSs凋亡。

结直肠癌组织和SW480细胞系中SKA3蛋白的表达及对PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨结直肠癌组织中SKA3的表达及临床意义,观察转染SKA3-siRNA对结直肠癌SW480细胞增殖、迁徙的影响及在PI3K/AKT信号通路中的作用。方法采用免疫组化法观察69例结直肠癌和癌旁组织中SKA3蛋白的表达水平。结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA干扰后,应用Western blot法观察细胞中SKA3蛋白的表达;MTT法和细胞克隆实验观察细胞增殖改变,细胞划痕法观察细胞迁徙改变,Western blot法检测PI3K/AKT信号通路蛋白在细胞中的表达。结果结直肠癌组织中的SKA3表达水平比癌旁组织显著增加(P<0.01),且SKA3蛋白表达水平与结直肠癌分化程度、淋巴结转移等有关(P<0.05);结直肠癌SW480细胞转染SKA3-siRNA后,SKA3表达水平明显降低(P<0.05);同时,结直肠癌SW480细胞增殖能力受抑,迁徙能力降低(P<0.05);p-AKT、p-PI3K蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论SKA3在结直肠癌中呈高表达,与患者预后相关;敲减SKA3表达可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖和迁徙,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

单胎稽留流产628例危险因素分析

稽留流产是胚胎在妊娠12~20周内停育并死亡,且停育胚胎滞留于孕妇宫腔,不能及时自然娩出[1]。统计显示[2],约有2%的单胎妊娠孕妇发生稽留流产。胚胎死亡后残留在母体,会引起机体凝血功能紊乱等危害[3]。

大鼠心脏骤停后行心肺复苏对海马脑组织的影响及机制

目的探讨大鼠心脏骤停后,实施心肺复苏术对大鼠海马脑组织的保护作用和机制。方法SD大鼠40只,随机均分为对照组、缺血组、心肺复苏组、依达拉奉治疗组,采取窒息法使大鼠心脏骤停造模,缺血组大鼠心脏停跳10 min;复苏组实施心脏骤停/心肺复苏(CA/CPR),即使大鼠心脏停跳3 min后,再行心肺复苏7 min。10 min后处死各组大鼠,留取静脉血检测氧化应激指标,HE染色和电镜观察海马脑组织结构改变,实时荧光定量PCR和Western blot检测大鼠海马中Nrf2、Keap1基因和蛋白表达。结果与对照组大鼠比较,缺血组大鼠血清氧化应激水平升高,海马内神经细胞尼氏体减少,线粒体嵴破坏,Nrf2、Keap1基因和蛋白表达增加;与缺血组比较,心肺复苏组大鼠血清氧化应激水平降低,海马内神经细胞尼氏体增多,线粒体嵴破坏减轻,Nrf2、Keap1基因和蛋白表达降低。结论心脏骤停后心肺复苏术对大鼠海马脑组织具有保护作用,其机制与改善氧化应激损伤Nrf2/Keap1通路有关。

甲酰肽受体激活剂丹皮酚抑制类风湿关节炎的作用

目的探讨丹皮酚作为甲酰肽受体激活剂抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的药理作用。方法由高通量基因表达数据库取得目标数据集,利用R语言进行多个数据集合的联合分析,探究未经处理、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理和丹皮酚与LPS共处理三组巨噬细胞差异表达基因,并分析其富集途径。在STRING数据库中构建了蛋白质-蛋白质相互作用网络,并在Cytoscape软件中将其可视化。利用TNF-α刺激成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)为模型,验证Hub基因甲酰肽受体2(formyl peptide receptor 2,FPR2)对RA炎症的抑制作用。结果通过生物信息学分析,得到169个与炎症发生相关的差异基因,275个与丹皮酚作用机制相关的差异基因,对两组差异基因进行联合分析,发现FPR在丹皮酚抗炎机制中起到关键作用;对丹皮酚的作用机制进行进一步的研究发现,丹皮酚能够激活FPR,丹皮酚对FLS炎症的抑制作用被Trp-Arg-Trp-Trp-Trp-Trp-NH2(WRW4)所挽救。结论丹皮酚可以通过FPR抑制RA的炎症发展。

环巴胺对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺对体外培养的佐剂性关节炎(AA)大鼠关节软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂制备AA模型(模型组),对照组足趾皮内注射等量生理盐水;观察继发侧足肿胀,28 d后,HE染色评价踝关节形态学变化;胰酶-胶原酶消化培养AA大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,CCK-8法检测环巴胺处理对AA大鼠软骨细胞增殖的影响,Hoechst 33258检测环巴胺对AA大鼠软骨细胞凋亡影响,Western blot法检测AA大鼠软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)的表达情况。结果第12天,AA大鼠继发侧关节肿胀明显,HE染色表明AA大鼠踝关节破坏明显;Ⅱ型胶原和甲苯胺蓝染色证实成功培养AA大鼠软骨细胞;不同剂量的环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞增殖,抑制其凋亡,降低Shh、Ptch1、Gli1蛋白表达。结论环巴胺可促进AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其机制与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号通路有关。

Twist1和基质金属蛋白酶2在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义

【摘要】目的探讨Twistl和基质金属蛋白酶2（MMP－2）蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其相互关系。方法建立组织微阵列平台，应用免疫组织化学方法检测70例子宫内膜样腺癌组织中Twistl和MMP-2蛋白的表达情况。结果Twistl蛋白主要定位于肿瘤细胞核，而MMP-2蛋白主要定位于肿瘤细胞质。70例子宫内膜样腺癌组织中，Twistl的高表达率为65．7％，MMP-2的阳性率为67．1％。Twistl表达与临床分期、肿瘤子宫肌层浸润和卵巢转移有关（均P〈0．05），MMP．2表达与临床分期、肿瘤分级和肿瘤子宫肌层浸润有关（均P〈0．05）。相关性分析显示，Twistl表达与MMP-2表达呈显著正相关（r=0．328，P〈0．01）。Twistl高表达患者的总生存率（80．4％）和无复发生存率（78．3％）均低于Twistl低表达患者（均100．0％，均P〈0．05）。多因素分析显示，临床分期和淋巴结转移是影响子宫内膜样腺癌患者预后的独立危险因素（均P〈0．05），而Twistl和MMP-2表达与子宫内膜样腺癌患者的预后无关（均P〉0．05）。结论子宫内膜样腺癌中Twistl和MMP-2的表达与肿瘤侵袭和转移有密切关系；MMP-2表达可能在一定水平上受到Twistl的调控。

非小细胞肺癌中Keap1-Nrf2信号通路蛋白的表达及与临床病理相关性分析

目的观察胞质蛋白伴侣分子(kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)和核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factors,Nrf2)蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨两种蛋白与NSCLC的临床联系。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(streptavidin-perosidase,SP)法和蛋白免疫印迹法检测92例NSCLC组织及其癌旁(≥10 cm)中Keapl、Nrf2的蛋白表达,探讨两种蛋白表达与NSCLC肿瘤的组织类型、肿瘤-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期、分化程度、淋巴结转移的相关性。结果免疫组化染色结果表明,相对于癌旁组织,在NSCLC中Keapl蛋白、Nrf2蛋白表达增加,癌旁组织Keap1、Nrf2蛋白光密度值(optical density,OD)值分别为(0.327±0.053)、(0.313±0.062),而NSCLC组织中两种蛋白OD值明显升高,且NSCLC的分化程度越低,两种蛋白OD值升高越明显;且肿瘤TNM分期越高,Keap1、Nrf2蛋白阳性表达增加;蛋白免疫印迹结果显示,NSCLC组织中Nrf2蛋白、Keapl蛋白表达升高,且与肿瘤组织的分化程度相关。结论在NSCLC组织中,升高的Nrf2蛋白、Keapl蛋白表达对判断NSCLC的恶性程度有一定的意义。