留学生机能实验教学与管理工作初探

随着近年来我校留学生招生规模的不断扩大,留学生课程设置得更加全面。留学生的机能实验课程作为基础医学中重要的实践课程也受到了广泛关注。总结带教留学生机能实验课程的一些经验,并提出了进一步深化教学质量的展望。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制

目的 探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3的表达和慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制。方法 将雄性C57小鼠随机分为正常组(control组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)和SAHA干预组(CIH+SAHA组),将CIH+SAHA组与CIH组小鼠放入低氧仓内进行间歇性低氧处理,每天8 h,持续4周,从第3周起,每日造模前给予实验小鼠腹腔注射SAHA 50 mg/(kg·d),给药持续2周。实验第4周后,测量小鼠体质量,然后处死小鼠,HE染色观察肝组织形态学变化,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,Western blot检测小鼠肝组织中裂解型胱天蛋白酶3(c-Caspase-3)和Caspase-9的蛋白水平,TUNEL试剂盒检测小鼠肝组织细胞凋亡情况。结果 与control组相比,间歇性低氧4周后,CIH组小鼠肝指数显著升高且肝组织损伤明显,肝组织细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和c-Caspase-3的表达水平显著增高,肝组织细胞凋亡比例增加(P<0.05);与CIH组相比,CIH+SAHA组肝指数、ALT、AST水平以及Caspase-9和c-Caspase-3蛋白表达水平、肝组织细胞凋亡指标降低(P<0.05)。结论 SAHA可能通过抑制凋亡相关蛋白Caspase-9/Caspase-3,进而改善慢性间歇性低氧引起的小鼠肝损伤。

毒胡萝卜素诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的实验研究

目的初步探讨内质网应激特异性诱导剂毒胡萝卜素(TG)对肺泡巨噬细胞(AM)增殖和凋亡的影响。方法分离纯化AM并体外培养,经不同浓度的TG(1μM,2μM,4μM,8μM)干预24h后,MTT检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况并在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。结果与对照组比较,经过TG干预24h后的细胞存活率下降,凋亡率增高且具有浓度依赖性,<0.05。结论毒胡萝卜素具有抑制AM增殖,诱导AM凋亡的作用。

IL-10调控HaCaT细胞增殖及分化的分子机制

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖影响和对氯化钙(CaCl 2)诱导的角质形成细胞分化标志物的表达影响及其可能的分子机制。方法以不同浓度IL-10(0、3、10、30 ng/ml)处理HaCaT细胞不同时间(0、24、48、72 h),MTS分析细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;IL-10(终浓度为10 ng/ml)预处理HaCaT 1 h,加入或不加CaCl 2(终浓度为1.2 mmol/L)培养24、48、72 h,Western blot检测IL-10对HaCaT分化标志物表达影响;丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)特异性抑制剂PD98059及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)特异性抑制剂LY294002预处理HaCaT细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测IL-10对HaCaT细胞分化标志物(Keratin1、Keratin5、Involucrin)表达影响。结果MTS结果显示,在72 h内,IL-10(30 ng/ml和较低浓度)对HaCaT细胞增殖无影响;流式细胞分析结果提示IL-10不影响HaCaT细胞周期进程。Western blot分析显示,IL-10上调HaCaT角质形成细胞角质细胞分化标志物Involucrin表达,而对Keratin1及Keratin5没有显著的影响。机制研究分析显示,IL-10能够活化ERK1/2和AKT,增加其磷酸化水平;RT-qPCR和Western blot结果显示PD98059及LY294002部分阻断IL-10诱导的Involucrin的表达。结论IL-10在一定浓度范围内不影响HaCaT的增殖;IL-10部分通过MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径上调HaCaT分化标志物Involucrin表达。

丰富环境干预对小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的影响

目的探讨丰富环境干预下的小鼠梨状皮层锥体神经元兴奋性的变化特点。方法选用15日龄的C57BL/6小鼠30只,随机分为丰富环境组(EE组)15只和常规环境组(SE组)15只,EE组采用丰富环境刺激饲养3周,SE组则在正常实验室环境下饲养3周。全细胞电流钳模式下记录小鼠梨状皮层锥体神经元的各电生理指标,锥体神经元的兴奋性指标包括动作电位间距(ISI)、能障(Vts-Vr)和绝对不应期(ARP)。结果与常规环境组比较,丰富环境干预下的小鼠梨状皮层神经元的ISI减小(P<0.05),Vts-Vr降低(P<0.05),ARP缩短(P<0.05)。结论丰富环境干预可提高梨状皮层锥体神经元的兴奋性,提示丰富环境可能有助于梨状皮层锥体神经元的发育成熟。

IL28RA真核表达载体的构建和对HaCaT细胞迁移能力的影响

目的构建白介素28受体ɑ(IL28RA)基因的真核表达载体,并转染HaCaT细胞,观察该基因对HaCaT细胞迁移能力的影响。方法从HepG2细胞中提取总RNA,逆转录后以其cDNA为模板PCR扩增IL28RA编码片段。将其插入质粒pCMV6构建pCMV6-IL28RA重组表达体;重组体经酶切分析及测序鉴定,将其转染至HaCaT细胞中,经G418筛选出稳定过表达IL28RA细胞株。为检测转染效率,反转录实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)分析转染细胞中IL28RA mRNA相对表达水平。伤口愈合实验检测过表达IL28RA对HaCaT细胞迁移能力的影响。结果IL28RA基因成功构建并在HaCaT中表达,RT-qPCR检测转染效率显示与对照细胞相比,过表达细胞中IL28RA mRNA相对表达水平显著升高。细胞伤口愈合实验检测显示与对照细胞相比,IL28RA过表达抑制HaCaT细胞迁移能力。结论IL28RA基因过表达降低HaCaT细胞迁移能力。

复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤模型的保护作用及机制研究

目的:研究复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤创面的保护作用及作用机制。方法:建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,创面外用不同剂量复方烫伤膏,每天1次,连续21 d。在伤后不同时间点取材,测定药物对烫伤创面的创面愈合率、组织含水量、血管内皮生长因子(VEGF)的影响;测定药物对烫伤大鼠血液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)水平的影响。结果:复方烫伤膏(每克浸膏含生药0.4,0.2,0.1 g)可不同程度地提高大鼠烫伤创面不同时相点的创面愈合率;降低烫伤创面不同时相点的组织含水量;升高烫伤创面不同时相点的VEGF含量;降低烫伤大鼠血清不同时相点升高的TNF-α和IL-1水平。结论:复方烫伤膏对大鼠深Ⅱ度烫伤具有良好的保护作用,能明显促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合,减少创面组织含水量,其机制与增加烧伤创面组织VEGF合成和释放,降低烫伤大鼠血清TNF-α,IL-1水平等有关。