SPARCL1在动脉粥样硬化斑块形成中的作用研究

目的探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1(SPARCL1)对动脉粥样硬化(AS)斑块形成的影响。方法采用病例对照研究,选取394例AS确诊患者作为病例组,年龄、性别相匹配的394例健康对照者作为对照组。利用酶联免疫吸附试验测定血清SPARCL1表达水平;免疫组织化学实验评估SPARCL1蛋白在AS斑块区的表达水平及定位,同时检测AS患者和正常对照人群外周血的中性粒细胞及单核细胞的SPARCL1蛋白表达情况;构建SPARCL1过表达及抑制表达的重组腺病毒载体,以小鼠巨噬细胞(J774A.1)为靶细胞,进行细胞划痕实验观察SPARCL1对细胞迁移的影响。结果AS患者组的血清SPARCL1水平低于健康组(P<0.05);在AS斑块中检测到SPARCL1高表达,且主要表达在泡沫细胞胞浆;AS患者的外周血中性粒细胞及单核细胞SPARCL1表达水平低于正常对照(P<0.05);SPARCL1过表达及抑制表达的重组腺病毒构建成功;抑制SPARCL1表达的J774A.1细胞中的细胞迁移率降低,过表达SPARCL1的J774A.1细胞中的细胞迁移率增加(P<0.05)。结论SPARCL1在AS病变部位泡沫细胞高表达,这可能来自于外周血单核细胞和中性粒细胞的代偿性募集,SPARCL1可能作为血管保护因子参与抑制AS斑块的发生发展。

SPARCL1基因多态性与动脉粥样硬化遗传易感相关性分析

目的探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1(SPARCL1)的单核苷酸多态性(SNP)位点rs7695558、rs1049539与动脉粥样硬化(AS)的遗传易感相关性。方法采用病例对照研究,选取209例AS患者作为病例组,年龄、性别相匹配的208例健康体检者作为对照组。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清SPARCL1表达水平,使用线性和Logistic回归分析评估SPARCL1水平和血管危险因素、生活方式、人口统计学变量之间的相关性。通过免疫组织化学实验评估发生粥样硬化病变的动脉组织和相对正常动脉组织中的SPARCL1蛋白的表达水平及定位,随后用高分辨率熔解曲线法对51例AS患者和50例健康对照者DNA的SPARCL1基因的两个SNP位点rs7695558(A/G)、rs1049539(T/C)进行基因分型,使用Pearsonχ2检验分别分析rs7695558、rs1049539多态性与AS患者易感性之间的关系。结果AS患者的SPARCL1血清表达水平低于对照组(Z=-2.916,P=0.004)。SPARCL1水平与患者年龄(P=0.027)、舒张压(P=0.008)有关,而与患者的性别及部分心血管危险因素无明显相关(P>0.05)。冠状动脉组织中粥样硬化病变部位的SPARCL1表达水平增高。rs7695558和rs1049539在病例组和对照组间的基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。rs7695558的隐性遗传模型中,含A和不含A的基因分布有差异,不含A等位基因(GG)的患者比含A等位基因(AA+AG)的患者的AS发病风险低,OR值为0.417,95%CI:0.184~0.945,在10%的置信水平上显著(P=0.034)。结论首次在中国安徽人群中鉴定了位于人类SPARCL1基因内含子内的与AS风险相关的新易感位点rs7695558,同时提示SPARCL1可能作为血管保护因子发挥抗AS作用。

白介素29体外抗乙肝病毒作用

目的研究白介素29(IL-29)体外抗乙肝病毒的效果。方法从RNA水平探讨了IL-29抗乙肝病毒的效果。RT-PCR分析IL-29诱导抗病毒蛋白MxA、2′,5-′OAS、PKR和RNase L mRNA水平表达;同时Western blot分析IL-29激活的信号通路以探讨其抗乙肝病毒的机理。结果IL-29能明显降低HepG2.2.15细胞中乙肝病毒mRNA的水平,且能够上调抗病毒蛋白MxA和2′,5-′OAS的mRNA表达并激活ERK1/2、AKT信号途径。结论在HepG2.2.15细胞中IL-29有显著的抗乙肝病毒作用。

人巨噬细胞基质金属弹力酶对人胃癌细胞VEGF体外表达的影响

目的探讨体外人巨噬细胞基质金属弹力酶(HME)对人胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人胃癌细胞SGC7901,并通过不同剂量HME蛋白干预胃癌细胞VEGF表达,HME干预剂量为1～5μg/ml,分别于干预后0、12、24、36h采用ELISA方法检测细胞上清中VEGF浓度变化并统计分析,同时设定对照组。结果干预36h后,HME干预剂量在1～5μg/ml时VEGF浓度均低于对照组,差异有显著性(P<0.05);对照组12h后VEGF表达明显高于0h,差异有显著性(P<0.05),在1、2、4、5μg/ml剂量组中,干预后12h与0h比较,差异无显著性(P>0.05)。结论HME蛋白浓度在1～5μg/ml范围内时在作用36h后能显著地抑制胃癌细胞VEGF表达。

人工miRNA簇表达载体的构建及检测

目的构建人工miRNA表达簇,并研究miRNA的加工对蛋白质表达水平的影响。方法从miRNA表达库中扩增miR-34a及miR-424的前体序列,将上述两种miRNA串联,构建PGL-34a-424人工miRNA簇表达载体。通过RT-PCR的方法检测人工miRNA簇的表达情况。然后将miRNA前体突变,再用荧光素酶报告基因技术研究miRNA的加工对蛋白质表达的影响。结果成功构建人工miRNA簇表达载体,荧光素酶实验显示miRNA的加工能够抑制蛋白的表达。结论人工miRNA表达簇能够高效表达,miRNA的加工对蛋白质的表达有抑制作用。

曲妥珠单抗对不同pH培养HER2阳性乳腺癌细胞增殖的抑制及促凋亡作用

肿瘤细胞外酸性微环境是肿瘤形成和进展的关键环节，亦是导致肿瘤细胞对放疗和化疗药物不敏感的原因之一。乳腺癌除了手术和放疗外，化学药物治疗也是临床重要手段（根据细胞膜靶蛋白的表达特点制定相应的治疗措施）。但由于肿瘤细胞内外环境，尤其是酸性环境导致的分子功能的变异，使得药物治疗效果并不理想，复发率较高。因此，寻找药物治疗的适宜pH环境成为当务之急。

不同缺氧模型对HepG2细胞中miR-210表达的影响

目的探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果 3种缺氧模式均可以诱导HepG2细胞miR-210表达上调,其表达与CoCl2及Na2SO3的浓度有剂量依赖关系。结论 CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件均可以有效诱导HepG2细胞中miR-210的表达上调,3种模型均可用于缺氧诱导miRNA研究,同时进一步证明miR-210表达上调是由于细胞缺氧所致。

肝硬化患者血浆中AFP、PKM2和ALB mRNA的检测与分析

目的探讨乙肝肝硬化患者外周血血浆中甲胎蛋白(AFP)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和白蛋白(ALB)mRNA的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测了38例健康人血浆及38例乙肝肝硬化患者血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达水平,并分析其表达与临床检测指标间的相关性。结果 AFPmRNA、PKM2 mRNA及ALB mRNA的表达在肝硬化患者血浆和健康人血浆中存在明显差异,结果具有统计学意义(P<0.01)。AFP mRNA和PKM2 mRNA的表达与临床检测指标没有显著相关性,ALB mRNA与γ-谷氨酰基转移酶及血清白蛋白具有相关性。与甲胎蛋白相比,检测的3种血浆mRNA在乙肝肝硬化患者中的高表达更明显。结论检测外周血血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达对肝病的临床诊断及治疗具有指导意义。