同型半胱氨酸对核因子-κB活性及白三烯E_4和前列腺素E_2合成水平的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人结肠腺癌(Caco-2)细胞中白三烯E_4(LTE_4)、前列素E_2(PGE_2)合成水平和核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在Caco-2细胞中加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)Hcy作用不同时间(1、3、6 h),采用MTT法和检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,观察Hcy对Caco-2细胞生长活性的影响;通过检测Caco-2细胞跨膜电阻(TEER)和样品中荧光素-5-异硫氰酸酯(FITC)浓度,观察Hcy对Caco-2细胞通透性的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定Caco-2细胞上清液中LTE_4和PGE_2合成水平;采用凝胶迁移实验(EMSA)测定Caco-2细胞中NF-κB活性变化。结果随Hcy作用时间延长及作用浓度增加,Caco-2细胞活性明显受到抑制;随Hcy作用浓度增加,Caco-2细胞TEER明显降低,FITC跨膜转运量明显增加,细胞上清液中LTE_4和PGE_2水平明显升高(P<0.05);Hcy(50μmol/L)处理组细胞中NF-κB活性增强,且呈时间依赖性(1、3、6 h)。结论 Hcy通过激活NF-κB信号通路,促进Caco-2细胞肠黏膜LTE_4和PGE_2合成,引起肠黏膜炎症损伤。

溃疡性结肠炎血小板中钾通道和NLRP3表达的临床意义

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)血小板中钾通道和NLRP3的表达,以及与UC临床特征的关联分析。方法收集11例正常对照组和17例UC患者临床资料。提取血小板,采用RT-PCR、Western blot法检测Kca3.1、Kv1.3及NLRP3的表达水平。结果与正常对照组相比,UC患者血小板中Kca3.1、Kv1.3及NLRP3 m RNA表达量均明显增加(t=-6.067、-4.991、-18.981,P<0.05),与UC严重程度无明显相关。UC患者血小板中Kca3.1、Kv1.3及NLRP3蛋白表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(t=-9.627、-7.39、-7.821,P<0.05),与UC严重程度无明显相关。UC患者血小板中Kca3.1与NLRP3蛋白表达水平明显相关(r=0.877,P<0.05),Kv1.3与NLRP3蛋白表达水平有一定的相关性,但差异无统计学意义。UC患者血小板中Kca3.1、Kv1.3及NLRP3蛋白表达与患者临床指标红细胞沉降率、C反应蛋白及Mayo评分均不相关。结论 UC患者血小板中NLRP3与钾通道表达增高,两者具有一定相关。

炎症性肠病患者血小板线粒体DNA拷贝数改变的临床意义

IBD患者血小板线粒体DNA(mtDNA)拷贝数在炎症活动状态时可能发生改变,来源于血小板的mtDNA可能进入血液循环与靶细胞TLR9结合而发挥促炎作用.本研究通过检测67例IBD患者(33例UC,34例CD)和16名健康者血小板及血浆mtDNA拷贝数,探讨IBD患者血小板mtDNA拷贝数改变的临床意义.结果 显示IBD患者中血浆mtDNA拷贝数增加,血小板作为mtDNA主要来源之一与疾病活动度相关,由此推测IBD患者中血小板释放mtDNA进入血浆,加重肠道炎症损伤,可能是IBD病情评估的标志物.

炎症性肠病患者尿同型半胱氨酸、前列素E2及白三烯E4水平检测及相关分析

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD),其病因尚不明确,免疫功能紊乱在炎症性肠病发生发展中具有重要作用,免疫细胞合成的白三烯E4(leukotrienes E4,LTE4)和前列腺素 E2(prostaglandin E2,PGE2)可导致肠黏膜病理损伤[1-2].研究发现溃疡性结肠炎患者尿液中PGE2和LTE4水平较正常对照组升高,活动期水平高于缓解期[3-5].同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一种含硫氨基酸,可引起炎症介质释放,启动免疫介导的炎症过程[6].炎症性肠病患者血浆Hcy水平升高[7].Hcy是否通过促进LTE4和PGE2等炎症介质分泌,加重肠道炎症损伤尚不十分清楚,因此,本研究通过检测炎症性肠病患者尿液Hcy,PGE2及 LTE4水平进行相关分析.

MY09Brs962917和rs1545620基因多态性与炎症性肠病的临床关系

目的探讨MY09Brs962917和rs1545620基因多态性与IBD患者临床病理特征和肠黏膜通透性的关系。方法收集2010年9月至2012年5月IBD患者196例，其中UC患者100例，CD患者96例。另收集同期99名性别、年龄匹配的健康体检者作为健康对照。采集入选者静脉血5mL，提取DNA，采用PCR＊连接酶检测反应（LDR）方法检测MY09B基因rs962917、rs1545620多态性。60例UC患者和58例CD患者口服肠黏膜通透性测试液（含乳果糖和甘露醇）后，采用高效液相色谱仪检测受试者尿液，根据乳果糖和甘露醇含量的比值判断肠黏膜通透性。计数资料行卡方检验。结果与健康对照组比较，IBD组、UC组、CD组的MY09Brs962917、rs1545620基因型和等位基因分布差异均无统计学意义（P均〉0．05）。UC患者MY09Brs962917、rs1545620基因型分布与疾病活动性和病变部位均无关（rs962917的X^2=0．481和3．812，rs1545620的X^2=0．398和4．543；P均〉0．05）。CD患者MY09Brs962917基因型分布与疾病活动性、病变类型、有否肛周病变均无关（X^2=0．384、0．476、3．486，P均〉0．05），与病变部位有关（X^2=15．926，P〈0．05）。CD患者MY09Brs1545620基因型分布与疾病活动性和病变类型无关（X^2=1．407和5．126，P均〉0．05），与病变部位和有否肛周病变有关（X^2=18．165和7．629，P均〈0．05）。58例CD患者肠黏膜皆高通透。UC患者MYO9Brs962917、rs1545620基因型分布与肠黏膜通透性无关（X^2=1.508和1．025，P均〉O．05）。结论MY09Brs962917和rs1545620基因多态性与CD发病部位有关，与UC患者肠黏膜通透性无关。

胃肠道恶性肿瘤切除术后补充叶酸、维生素B12对血同型半胱氨酸水平的影响

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是一种含巯氨基酸，由甲硫氨酸去甲基化形成，血Hcy水平主要受叶酸、维生素B12水平和相关代谢酶遗传多态性的影响。人体内缺乏叶酸和维生素B12可致Hcy水平升高。Hcy可对血管内皮造成氧化损伤，导致血栓形成。叶酸和维生素B12可降低Hcy水平，进而降低血栓形成风险。

消退素D1影响自噬在急性胰腺炎小鼠中的作用

目的探讨自噬在消退素D1防治急性胰腺炎（AP）小鼠中的作用。方法将30只C57BL/6小鼠分为对照组、AP组、消退素D1组。腹腔注射雨蛙肽50 μg·kg－1·h－1建立AP模型。于造模前1 h、造模后4 h小鼠腹腔内注射50 μg/kg消退素D1。对照组腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液。采用比色法测定小鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平，光学显微镜下观察胰腺和肺组织病理损伤表现，透射电子显微镜下观察小鼠胰腺腺泡细胞自噬相关结构，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测小鼠胰腺自噬相关标志物Beclin-1、p62、LC3-Ⅱ mRNA及蛋白质的表达。统计学方法采用单因素方差分析和SNK-q检验。结果对照组、AP组、消退素D1组血清淀粉酶和脂肪酶水平比较，差异均有统计学意义（F＝62.99、149.69，P均〈0.01）；消退素D1组小鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平低于AP组[分别为（525.08±41.12） U/L比（752.62±42.03） U/L，（758.24±134.77） U/L比（1 201.06±112.53） U/L）]，差异均有统计学意义（均SNK-q检验，P均〈0.01）。对照组、AP组、消退素D1组小鼠胰腺、肺组织湿质量与体质量的比值比较，差异均有统计学意义（F＝11.36、18.51，P均〈0.05）。消退素D1组胰腺和肺组织病理损伤评分均低于AP组[分别为（3.3±0.6）分比（5.6±0.6）分，（5.4±0.5）分比（8.8±0.4）分，差异均有统计学意义（均SNK-q检验，P均〈0.05）。透射电子显微镜显示，消退素D1组较AP组自噬体数量减少，体积变小。对照组、AP组、消退素D1组Beclin-1、p62、LC3-Ⅱ mRNA比较，差异均有统计学意义（F＝270.95、151.83、124.77，P均〈0.05）；消退素D1组Beclin-1、p62、LC3-Ⅱ mRNA相对表达量分别为1.59±0.12、2.75±0.27、1.34±0.14，低于AP组的2.68±0.13、3.32±0.30、3.37±0.26，差异均有统计学意义（均SNK-q检验，P均〈0.05）。对照组、AP组、消退素D1组Beclin-1、p62、LC3-Ⅱ蛋白质表达水平比较，差异均有统计学意义（F＝116.63、384.40、192.45，P均〈0.05）；消退素D1组Beclin-1、p62、LC3-Ⅱ蛋白质表达水平分别为0.98±0.03、0.57±0.04、0.31±0.03，低于AP组的1.34±0.07、1.02±0.03、0.48±0.04，差异均有统计学意义（均SNK-q检验，P均〈0.05）。结论消退素D1可能通过促进小鼠AP自噬通路的修复，减少自噬受损，减轻AP严重程度。

活动期溃疡性结肠炎患者血清瘦素与ghrelin水平的临床分析

目的研究活动期溃疡性结肠炎（UC）患者血清瘦素及ghrelin水平变化情况及其临床意义。方法纳入54例活动期uc患者和25例正常对照，采用ELISA法检测所有入选者的血清瘦素及ghre-lin水平，并与UC患者的主要临床病理特征进行相关性分析。采用营养风险筛查2002（NRS2002）筛查活动期UC患者的营养风险。结果活动期UC患者的血清瘦素[（245．51±129．72）比（183．80-4-59．67）pg／ml，P：0．029]及ghrelin水平[（1477．964-501．86）比（1188．00±474．51）pg／ml，P=0．041]均显著高于正常对照组。UC患者血清瘦素（r=0．715，P=0．019）、ghrelin水平（r=0．667，P：0．027）与疾病严重程度相关，但与疾病临床类型、病变范围、内镜分级不相关（P均〉0．05）。有营养风险UC患者的血清瘦素[（332．82±172．92）比（194．15±49．71）pg／ml，P：0．026]及ghrelin水平[（1848．60±326．48）比（1259．93±459．24）pg／ml，P=0．021]均显著高于无营养风险uc患者。结论活动期uc患者血清瘦素及ghrelin水平增高，且与uc患者病情严重程度、营养风险相关。

巴柳氮对葡聚糖硫酸钠结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响

目的探讨巴柳氮对结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及其作用机制。方法将45只C57BL／6J小鼠分成正常对照组、葡聚糖硫酸钠（DSS）模型组、巴柳氮不同剂量组（42、141、423mg／kg），正常对照组自由饮水，其余各组自由饮用5％DSS溶液，巴柳氮灌胃给药。每日予以疾病活动指数（DAI）评分，实验结束后取结肠组织进行苏木精-伊红染色评分，匀浆检测髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽活性（GSH-Px）、丙二醛（MDA）含量。小肠黏膜透射电镜检查。Evans蓝检测小肠黏膜通透性。结果与正常对照组小鼠相比，DSS组小鼠均出现明显的体质量减轻、便血和腹泻，DAI评分和病理（HI）评分增高（P〈0．01）。同时，结肠黏膜MPO活性和MDA含量明显增高（P〈0．05），SOD和GSH-Px活性明显降低。透射电镜检查小鼠回肠黏膜绒毛变短、萎缩、稀疏和排列极不规则，细胞间连接复合体缩短、变宽及细胞间隙扩大；小肠组织中Evans蓝含量增高。巴柳氮给药组小鼠一般情况明显改善，DAI评分与HI评分降低（P〈0．05），MPO活性减低，MDA含量降低，SOD和GSH-Px活性增高。随着巴柳氮剂量的增高，回肠黏膜微绒毛形态接近正常，小肠组织中Evans蓝含量明显减少。结论DSS模型小鼠肠黏膜通透陛增高，巴柳氮可改善结肠炎模型小鼠肠黏膜通透性。