基于转化医学理念老年医学研究生的科研能力培养

随着经济的发展与社会的进步,人类的平均寿命不断延长,老年人在人口中所占的比例越来越大。在人口老龄化问题日趋严重的背景下,我国老年医学教育面临着前所未有的挑战。近年来,在医学卫生人才培养工作中,老年医学教育逐步引起我国重视,而老年医学研究生的高素质创造性培养是国家医学教育的重任。如何使培养的老年医学研究生经过研究生阶段的理论学习、临床专科实习、学位科研论文的完成,既能担负起临床医疗工作,又能开展临床研究工作,是一种挑战。随着转化医学的兴起和发展,为老年医学研究生的培养带来了机遇,在老年医学研究生的培养过程中引入转化医学理念必将为培养优秀的具有转化医学意识的老年病科医生产生重要的意义。

机械通气对小鼠肺损伤的初步研究

目的建立小鼠机械通气肺损伤(VILI)模型,研究大潮气量、高浓度氧疗以及不同机械通气时间对VILI的影响及其可能机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为9组,对小鼠进行机械通气,再对小鼠进行支气管肺泡灌洗,采用双抗体夹心法检测肺泡灌洗液中总蛋白含量和炎症因子水平;小鼠肺组织石蜡包埋切片后行HE染色,显微镜下观察肺组织形态变化及损伤程度。结果大潮气量组小鼠肺泡灌洗液中总蛋白、炎症因子含量明显高于低潮气量组(P<0.05);高浓度氧疗组小鼠肺泡灌洗液中总蛋白、炎症因子含量明显高于低浓度氧疗组(P<0.05),并且随着通气时间的延长而升高;与正常对照组相比,各实验组小鼠肺泡灌洗液中蛋白含量明显升高(P<0.01);HE染色显示大潮气量机械通气4 h后,小鼠肺组织肺间隔明显增厚、炎性细胞浸润以及肺泡中出现渗出物,部分肺泡中出现红细胞的渗出等。结论大潮气量、高浓度氧疗均产生了明显的VILI,主要表现为肺组织急性炎症反应、渗透性肺水肿、氧化应激反应。

甲状腺激素联合多奈哌齐治疗对成年甲减大鼠额叶SNAP-25的影响

目的研究甲状腺激素联合多奈哌齐治疗对成年甲减大鼠额叶突触相关蛋白25(SNAP-25)的表达的影响。方法将50只成年健康SD大鼠随机分为5组:对照组(CON)、甲减组(Hypo)、多奈哌齐组(DON)、左甲状腺激素钠组(L-T4)、左甲状腺激素钠联合多奈哌齐组(L-T4+DON);除对照组外,其余4组通过含0.05%丙基硫氧嘧啶(PTU)饮用水喂养6周诱导成年期甲减大鼠模型;DON组、L-T4组、L-T4+DON组分别予多奈哌齐、左甲状腺激素钠、左甲状腺激素钠联合多奈哌齐治疗2周后,放射免疫法测定血清甲状腺激素水平,免疫组化法、Western blot法观察大鼠额叶SNAP-25的表达。结果与CON组相比,Hypo组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)水平显著降低(P<0.01),促甲状腺激素(TSH)显著上升(P<0.01);额叶SNAP-25的表达水平显著高于CON组(P<0.05)。L-T4组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异无统计学意义;SNAP-25的表达升高(P<0.05)。DON组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异有统计学意义(P<0.01);SNAP-25的表达升高(P<0.05)。L-T4+DON组与CON组比较,血清T3、T4、TSH差异无统计学意义;SNAP-25的表达差异无统计学意义。结论甲状腺激素联合多奈哌齐治疗能有效地恢复成年甲减大鼠额叶SNAP-25的表达。

褪黑素及其受体拮抗剂对哮喘小鼠模型气道炎症和气道重构的调节作用

目的观察褪黑素(MT)与褪黑素受体拮抗剂Luzindole(LUZ)对小鼠慢性哮喘模型中气道炎症和气道重构的影响。方法95只BALB/c小鼠随机分为对照组(NS组)、哮喘组(OVA组)、褪黑素治疗组(MT组)、激素治疗组(DXM组)及褪黑素受体拮抗剂Luzindole组(LUZ组)。OVA组、MT组和DXM组卵蛋白(OVA)致敏并反复雾化吸入OVA 2周、4周及8周,造成慢性哮喘模型,LUZ组OVA致敏后雾化吸入OVA 2周;MT组、DXM组和LUZ组分别腹腔注射MT、DXM和LUZ。测定单位气道面积炎症细胞数目、基底膜周径(Pbm)、上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAm)、气管内壁面积(WAi)、胶原面积(Wcol)、杯状细胞比例和气管基底膜(/1 mm)上BrdU阳性细胞数目。结果OVA组、MT组及DXM组炎症细胞计数高于NS组,OVA组高于MT组和DXM组,LUZ组高于OVA 2周组(P均<0.05);MT组和DXM组之间以及各组2、4和8周之间炎症细胞计数差异无显著性。OVA组WAmuc/Pbm、WAm/Pbm、WAi/Pbm及Wcol/Pbm较NS组、MT组和DXM组增加,MT组和DXM组高于NS组(P均<0.05),各组2、4和8周之间差异无显著性。OVA组杯状细胞积分高于MT组和DXM组,LUZ组明显高于OVA 2周组(P均<0.05),MT组和DXM组间无差异,随着雾化时间延长杯状细胞积分逐渐降低。OVA组、MT组和DXM组气管基底膜上(/1 mm)BrdU阳性细胞数目高于NS组,OVA组高于MT组和DXM组,LUZ组高于OVA 2周组(P均<0.05),MT组和DXM组间无差异。在OVA组、MT组和DXM组,雾化吸入4和8周后BrdU阳性细胞数目高于雾化吸入2周后(P均<0.05)。结论早期使用MT可抑制气道炎症、细胞增生,部分抑制气道重构,其作用与地塞米松相当。

阿尔茨海默病脑海马凋亡神经元发生率增高

通过对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)和老年对照患者死后脑海马凋亡神经元的检测 ,探讨AD脑神经元丢失的可能机制。使用TUNEL(terminaltransferase mediateddUTP biotinnickendlabeling)法对 7例确诊的AD和 9例老年对照患者死后海马组织中的凋亡神经元进行标记 ,用生物图像分析系统对结果进行定量分析。AD和对照组间TUNEL阳性细胞数无显著性差异 ;AD组海马CA1和CA4区正常神经元数减少 ,其中CA1区减少具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;AD组海马CA1和CA4区凋亡神经元发生率高于对照组 ,其中CA1区具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AD组海马组织中凋亡神经元发生率明显增高 ,说明细胞凋亡可能参与了AD海马神经元退行性变的过程。

帕金森病和原发性震颤患者运动和静息-活动节律的变化

目的 研究帕金森病 (PD)、原发性震颤 (ET)和正常老年人运动和静息 -活动昼夜节律的变化。方法 应用静息活动监测仪(Actigraphy)在自然生活环境下连续在体记录11例PD、9例ET和 10例正常对照组老年人的运动和静息-活动昼夜节律的变化。结果 PD组和ET组的静息 -活动节律日间稳定系数(IS)明显低于正常对照组 (P<0 05),昼夜节律变异性系数(Ⅳ)在 3组之间差异没有显著性 (P>0 05);PD组的日间活动水平 (M10 ) (P<0 05 )、夜间活动水平(L5) (P<0 01)和昼夜节律振幅 (AMP) (P<0 05 )均显著低于ET组和正常对照组,而上述参数在ET组与正常对照组之间相比未发现差异显著性 (P>0 05 )。结论 PD和ET静息-活动昼夜节律的稳定性较正常老人降低,但ET的活动水平和振幅与正常老年人相比没有显著变化。Actig raphy能够灵敏的评价患者的活动水平变化和运动功能紊乱的程度。

轻度认知损害患者情节记忆的编码和提取

为了研究轻度认知损害患者情节记忆编码和提取的改变 ,采用神经心理学方法评定正常老年人和轻度认知损害患者 (MCI)情节记忆编码和提取。结果表明 :除存在记忆力损害以外 ,MCI组定向力、语言能力、执行等能力显著低于正常老年组 (P <0 .0 1) ;MCI组患者情节记忆编码正确率显著低于正常老年组 (P <0 .0 1) ,下降约2 2 .81% ;MCI组情节记忆提取正确率显著低于正常老年组 (P <0 .0 5 ) ,下降约 6 .84 %。提示轻度认知损害患者情节记忆编码和提取均存在不同程度的损害 ,而情节记忆编码的损害更明显。

昆明小鼠完成放射状水迷宫和嗅觉辨别任务时年龄和性别的差异

目的 探讨昆明鼠的空间和非空间学习记忆能力在年龄和性别上的差异。方法 应用放射状水迷宫试验和嗅觉辨别记忆试验 ,分别记录小鼠寻找逃生平台的错误数和发现被掩埋巧克力的时间。结果 在放射状水迷宫试验中 ,成年鼠的空间学习记忆能力较幼鼠好 ,进入衰老进程后 ,小鼠空间学习记忆能力逐渐衰退 ;在嗅觉辨别记忆试验中 ,幼鼠的嗅觉辨别功能较成年与老年鼠好 ,其中幼年雄鼠的嗅觉功能最好。成年鼠及老年鼠之间无年龄差异 ,而有明显的性别差异 ,表现为雌鼠的嗅觉功能优于雄鼠。结论 在发育和衰老过程中 ,昆明小鼠的空间性和非空间性学习记忆能力存在非同步性年龄。

大鼠支气管肺泡灌洗液内HSP70水平与肺损伤关系

目的探讨不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)内热休克蛋白(HSP70)和肺损伤的关系。方法健康SD大鼠36只,随机均分为3组:大潮气量机械通气组(HV)、小潮气量机械通气组(LV)、正常对照组(N)。采用ELISA法测定大鼠BALF中总蛋白质浓度、HSP70和白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)的含量。结果①与N组比较,LV、HV组大鼠BALF中HSP70、IL-6、MIP-2水平以及肺损伤病理评分均升高(P<0.05);②与LV组比较,HV组大鼠BALF中HSP70、IL-6、MIP-2的水平和肺损伤病理评分显著升高(P<0.05);③HV组大鼠BALF中IL-6、MIP-2以及肺损伤病理评分别与HSP70呈正相关(r=0.853 8,P<0.05;r=0.891 9,P<0.05;r=0.885 2,P<0.05)。结论大潮气量机械通气可致肺上皮细胞损伤或坏死增加,HSP70胞外释放增加,肺内炎症反应显著增加;而小潮气量机械通气致肺组织损伤程度轻,细胞坏死少,HSP70胞外释放少;因此肺内炎症反应较大潮气量通气小。

雌激素受体基因多态性与绝经年龄的关系

目的:了解绝经后妇女雌激素受体(ER) 基因多态性与自然绝经年龄的关系。方法: 通过PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 方法检测189例绝经后妇女ER基因多态性的分布情况, 分析ER基因多态性与绝经年龄的关系。结果: ER基因PvuⅡ酶切位点3种基因型间平均绝经年龄有显著差异(P=0 .046 ), pp型女性绝经年龄较PP型女性早(P=0 .013)。ERXbaⅠ酶切位点3种基因型间平均绝经年龄的差异无统计学意义(P=0 .405)。月经史、哺乳史、ER基因型均与绝经年龄显著相关(P分别等于0. 033, 0. 004, 0 .024)。结论: 绝经年龄受遗传因素的影响; 携带ERp等位基因者, 其绝经年龄可能较早; 而XbaⅠ酶切位点限制性片段长度多态性对绝经年龄无显著影响。

衰老过程中海马回路突触及其可塑性特异性改变

衰老表现为增龄性的记忆力减退和缺失。传统观点认为衰老时表现出的认知障碍是由于神经元丧失所致,目前的观点认为突触特定回路的结构和受体以及突触可塑性在衰老过程中发生的选择性改变可能与记忆和认知能力减退密切相关。

吞噬及饥饿诱导巨噬细胞自噬对其吞噬功能的影响

目的研究饥饿诱导的自噬对巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响,初步探讨自噬在巨噬细胞吞噬功能中的作用。方法实时动态观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程,单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色标记巨噬细胞的自噬体,激光扫描共聚焦显微镜下进行观察和定量分析。Western blot方法检测巨噬细胞的微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,HE染色观察自噬对其吞噬功能的影响。结果巨噬细胞活跃地吞噬鸡红细胞,吞噬后6 h MDC荧光染色阳性率明显高于对照组。饥饿诱导巨噬细胞LC3Ⅱ表达增高,并可以被3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制,饥饿3 h后的巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率与对照组相比无明显变化。自噬被3-MA抑制后,巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率明显低于对照组。结论巨噬细胞活跃地吞噬鸡红细胞,吞噬后自噬明显增强;自噬对巨噬细胞吞噬功能有重要作用。

17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察

目的 探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用。方法 大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为 10mg/L 17β 雌二醇和 10mmol/LBrdU ,分别在培养 4、12h取出细胞 ,进行免疫细胞化学标记。结果 培养 4h ,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性 (P=0 2 5 9,P =0 0 6 7) ,培养 12h ,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅 ,胞浆有着色 ,有 4 0 %的细胞可见明显突起 ,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变 (P =0 0 6 ) ,BrdU标记细胞数目减少 (P =0 0 0 3) ,提示分裂细胞减少。另一方面 ,培养 12h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度 (OD)显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 17β 雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂 ,促进神经干细胞分化。

孕前甲状腺自身免疫对仔鼠认知功能的影响

目的:通过建立实验性甲状腺自身免疫(TAI)雌性大鼠模型,初步探讨孕前TAI对后代认知功能的影响。方法:选取雌性SD大鼠随机分为对照组(CON组)和甲状腺自身免疫组(TAI组),采用猪甲状腺球蛋白(pTg)建立TAI雌鼠模型,测定抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平。雌雄大鼠合笼交配。通过Morris水迷宫(MWM)实验测试仔鼠学习记忆能力。通过苏木精伊红染色(HE)、尼氏染色及免疫组化观察仔鼠海马形态、成熟神经元核蛋白(NeuN)和突触相关蛋白(SYN)的表达情况。结果:TAI组雌鼠TgAb、TPOAb水平与CON组相比显著升高(P<0.05)。在MWM实验中,第5天TAI组仔鼠逃避潜伏期明显长于CON组(P<0.05),空间探索阶段TAI组在平台象限的滞留时间与穿越平台次数显著低于CON组(P<0.05)。仔鼠海马组织HE染色及尼氏染色两组相比无显著差异。然而,与CON组相比,TAI组仔鼠海马组织NeuN、SYN蛋白的表达均降低(均P<0.05)。结论:孕前患TAI的雌鼠对后代认知功能及海马神经元发育会产生不良影响,因此,应重视孕前自身免疫性甲状腺抗体水平的筛查,为提高出生人口素质提供重要保障。

Alzheimer病患者海马钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ-α表达与过度磷酸化tau蛋白的关系

目的 观察钙 /钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ α(calcium/calmodulin dependentproteinkinaseⅡ α ,CaMKⅡ α)在Alzheimer(AD)患者海马的表达及其与过度磷酸化tau蛋白的关系。 方法 利用免疫组织化学和体视学方法定量分析 10例女性AD患者及年龄、性别等与之匹配的 10例老年非痴呆患者 (对照组 )海马不同区域CaMKⅡ α神经元数目和染色强度的差异 ;同时利用免疫荧光双标方法分析AD患者海马CA1区CaMKⅡ α与过度磷酸化tau蛋白共存神经元的比例。 结果 AD患者海马CA1区CaMKⅡ α阳性神经元数目显著减少 ,残存神经元免疫反应性显著增强 ;此区CaMKⅡ α和过度磷酸化tau蛋白共存比例低 ,仅 32 %过度磷酸化tau蛋白神经元同时表达CaMKⅡ α。 结论 CaMKⅡ α的表达选择性在AD患者海马CA1区受损。CaMKⅡ α与过度磷酸化tau蛋白共存比例提示CaMKⅡ α可能部分参与tau蛋白过度磷酸化。