CD105/CD133筛选鉴定SMMC-7721株干细胞表面标志物的实验研究

目的观察人肝癌细胞株SMMC-7721中膜抗原CD133、CD105的表达情况并对不同亚群的生物学性状进行体内外实验研究。方法以含10%胎牛血清的DMEM对SMMC-7721株细胞培养;采用流式细胞仪方法分选检测CD133、CD105在SMMC-7721中表达情况并分选出CD133+/CD105+、CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4个亚群;CCK-8和Transwell侵袭实验分别检测4个亚群和未分选细胞组的增殖及侵袭能力,软琼脂克隆实验检测5组细胞成球能力;裸鼠成瘤实验了解CD133+/CD105+、CD133-/CD105-亚群和未分选组的成瘤能力。结果流式细胞仪分选的CD133+/CD105+、CD133+/CD105-、CD133-/CD105+、CD133-/CD105-4种细胞亚群的比例分别为1.61%、0.01%、97.88%和0.50%。CD133+亚群的增殖和成球能力较CD133-亚群及未分选细胞组强,而CD105+亚群侵袭能力较CD105-亚群及未分选细胞组强。CD133+/CD105+组与CD133-/CD105-组及未分选细胞组相比成瘤所需的时间短、所需细胞数少、成瘤的体积大。结论CD133在人肝癌细胞株SMMC-7721中的表达与其增殖成球能力有关,CD105与其侵袭能力有关,CD133+/CD105+具有体内高度的成瘤能力。CD133+/CD105+亚群在人原发性肝癌细胞株SMMC-7721中具有肿瘤干细胞特性。

5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。

5-LOX siRNA人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤模型的建立及意义

目的建立5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)5-LOX siRNA转染人肝癌细胞HepG2裸鼠瘤动物模型,探讨iR-NA干扰技术在裸鼠瘤模型中应用的可行性,为肿瘤的实验研究提供平台。方法分别用pRNAT-U6.1-5-LOX siRNA转染的HepG2细胞、空白质粒pRNAT-U6.1转染的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分为转染组、转染空载体组和未转染组。建模前,用免疫荧光定量PCR检测转染HepG2细胞5-LOX mRNA表达,成瘤后测量种植瘤体积,并用Western-blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX的蛋白和mRNA表达。结果 5-LOX siRNA转染的细胞5-LOX mRNA表达量下降(P<0.01),转染组肿瘤平均体积与转染空载体组及未转染组比较明显减小(P<0.01),而且瘤体5-LOX蛋白及mRNA表达量亦明显下降(P<0.01)。结论 5-LOX siRNA转染肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤瘤实验模型建立成功。将干扰技术和裸鼠移植瘤相结合,为肿瘤的实验研究提供一种更可靠有效的研究方法。

肝细胞生长因子及其受体与肝细胞癌

肝细胞生长因子 (HGF)是正常肝细胞增生的强促有丝分裂原。近年研究发现 ,HGF同样影响肝细胞癌的生物学行为 ,其受体 (c Met原癌基因编码蛋白 )也与原发性肝癌关系密切 。

MDR3基因与家族性肝内胆汁淤积症

肝细胞是高度极化的细胞，其胞膜主要分为基底膜和毛细胆管膜2个部分。肝细胞基底膜与血液直接接触，通过基底膜转运蛋白的介导，从血液中摄取胆盐和各种有机离子进入肝细胞内。肝细胞毛细胆管膜相互连接形成毛细胆管腔，

肝血流阻断技术相关研究与应用近况(文献综述)

随着各种不同的血流阻断方式应用于肝切除和肝移植术中 ,术中出血量大大降低 ,但由此带来的缺血和再灌注损伤可能是术后肝功能不全乃至衰竭的重要原因。许多临床和实验研究都在探寻针对不同肝功能分级的病人所应选用的最佳阻断方式和阻断时限 ,从而在获得最小出血量和避免最低程度缺血再灌注损伤之间寻求平衡。

大鼠肝缺血再灌注后高胆红素血症与Mrp2、Mrp3表达及定位改变的关系

目的研究大鼠肝脏缺血再灌注后多耐药相关蛋白2(Mrp2)、多耐药相关蛋白3(Mrp3)表达及定位的改变,探讨肝缺血再灌注后发生高胆红素血症的分子机制。方法实验分为假手术组(Sham组)和肝缺血30 min再灌注组(IR组)。检测血浆和胆汁中DBIL含量。RT-PCR和免疫组织化学方法检测毛细胆管膜上Mrp2和基底膜上Mrp3的表达及定位。结果与Sham组比较,IR于再灌注后1 h～1 d,血浆中DBIL含量明显升高,胆汁中DBIL含量明显下降(P<0.05)。再灌注后1 h和6 h,IR组Mrp2 mRNA表达明显低于Sham组(P<0.05)。再灌注后1 d,IR组Mrp2蛋白在毛细胆管膜下呈"囊泡状"聚集,在毛细胆管膜上定位减少。再灌注后1 h～1 d,IR组Mrp3 mRNA表达明显高于Sham组(P<0.05),IR组Mrp3蛋白在基底膜上明显着色,表达增加。结论 Mrp2的表达减少和定位异常以及Mrp3的表达增加是大鼠肝缺血再灌注后发生高胆红素血症的分子机制。

百克钳辅助肝切除术的临床应用

近年来，随着对肝脏病理生理、组织解剖学认识的深入，以及出血控制和精确肝离断技术的不断提高，肝脏手术的适应证逐渐扩大，手术死亡率和并发症发生率逐年下降。在专业的肝外科治疗中心，手术死亡率已控制在5％以内，甚至有连续1000余例肝切除手术零死亡的报道。

肝细胞癌中CHFR、EDNRB和3-OST-2基因异常甲基化的研究

目的研究肝细胞癌中细胞有丝分裂前期检查点（checkpointwithforkhead-associatedandringtinge，CHFR）基因、内皮素B受体（endothelinreceptorB，EDNRB）基因和3-0-硫基转移酶-2（heparansulfateD．glucososaminyl3-0-sulfotransferase-2，3-OST-2）基因启动子区异常甲基化状态及其临床意义。方法收集癌组织及相应癌旁组织标本40例，以及14例肝血管瘤患者肝脏和2例肝移植供肝标本，并排除乙肝病毒感染和肝硬化。使用甲基化特异性PCR反应检测上述标本中CHFR、EDNRB和3-OST-2基因的甲基化状态。结果CHFR基因在癌组织和癌旁组织的甲基化率分别为52．5％和27．5％，癌组织中的甲基化率高于癌旁组织（P〈0．05）。EDNRB基因在癌组织和癌旁组织中的甲基化率都为27．5％。3-OST-2基因在癌组织中甲基化率为12．5％，癌旁组织没有发现甲基化。16例正常肝组织中没有发现上述3种基因的异常甲基化。癌组织中CHFR基因甲基化与非甲基化患者相比，男性多于女性。癌旁组织中EDNRB基因甲基化患者肿瘤的包膜出现率低于非甲基化患者。癌组织中3-OST-2基因甲基化患者的年龄和肿瘤直径大于非甲基化患者。结论肝细胞癌中CHFR基因、EDNRB基因启动子的高甲基化是普遍现象，而3-OST-2基因启动子甲基化率较低。

DNA甲基化与肝癌的关系

甲基化是真核细胞DNA正常的修饰方式,DNA异常甲基化与肝癌的发生发展有着密切关系。肝癌细胞总体甲基化比正常细胞低,但是伴有抑癌基因上游启动子区域的异常甲基化。转甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷可以使高甲基化的启动子序列去甲基化。