坐骨神经电刺激对不完全性脊髓损伤大鼠运动功能及BDNF-TrkB表达的影响

目的探讨坐骨神经电刺激对不完全性脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及其可能机制。方法使用改良Allen′s法构建不完全性胸部脊髓损伤大鼠模型,45只SD大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、坐骨神经电刺激组,每组15只。电刺激参数为脉宽1 ms,频率100 Hz,20 min/次,1次/d,持续21 d。采用BBB评分评估运动功能;电生理检测动作电位传导情况;HE染色观察脊髓及股二头肌病理改变并分析股二头肌肌纤维平均截面积百分比;通过免疫组化、RT-PCR和Western blot检测分析脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)阳性细胞数、相对mRNA表达量和蛋白表达情况。结果干预21 d时,①电刺激组BBB评分和动作电位平均振幅高于脊髓损伤组且差异有统计学意义(P<0.05);②电刺激组脊髓组织病理损伤比脊髓损伤组明显改善,股二头肌肌纤维平均截面积比脊髓损伤组增大且有统计学差异(P<0.05);③电刺激组BDNF和TrkB阳性细胞数多于脊髓损伤组且有统计学差异(P<0.05);④电刺激组BDNF和TrkB相对mRNA表达量和蛋白表达高于脊髓损伤组且有统计学差异(P<0.05)。结论坐骨神经电刺激可以减轻脊髓组织损伤,促进运动功能恢复,延缓损伤平面以下肌肉萎缩,其机制可能与BDNF-TrkB蛋白表达增加有关。

软骨终板形态与椎间盘退变的相关性

背景:以往研究证明多种内环境因素共同作用引发椎间盘退变,最重要的机制为椎间盘软骨终板的退变。目的:分析椎间盘退变与终板形态的关系。方法:回顾性分析62例因椎间盘源性慢性下腰痛和79例因髓核脱出致神经根性症状患者的腰椎MRI正中矢状位图像资料。根据腰椎MRI正中矢状位T1W1图像确定终板形态,T2W1图像确定椎间盘退变程度分级。结果与结论:平坦型和不规则型终板最常见于椎间盘退变人群下腰椎,L5/S1平坦型最多见。髓核脱出组与椎间盘源性慢性下腰痛组中凹陷型终板椎间盘退变程度均较平坦型、不规则型低,平坦型终板椎间盘退变程度较不规则型低(P<0.01)。两组间凹陷型与不规则型终板椎间盘退变程度差异无显著性意义,髓核脱出组平坦型椎间盘退变程度较椎间盘源性慢性下腰痛组高(P<0.05)。提示随着椎间盘退变程度的加重,软骨终板形态有由凹陷型向平坦型、不规则型依次转变的趋势。

前列腺素E2在闭合性单纯性长骨干骨折患者急性疼痛中的作用

背景:前列腺素E2含量增多可直接引起疼痛或增加神经根对缓激肽等致痛物质的敏感性,使神经根痛阈下降引起疼痛。目的:观察前列腺素E2在急性骨折导致的急性疼痛中所起的作用。方法:单纯急性闭合性长骨干骨折所致急性疼痛症状住院患者,采取静脉滴注非类固醇类抗炎药类镇痛药氟比洛芬酯注射液进行镇痛治疗。于治疗前后分别采用目测类比评分评价患者疼痛程度,测定血浆中前列腺素水平。结果与结论:患者用药前30min及用药后6h血浆前列腺素E2浓度和目测类比评分明显高于用药后2h(P<0.05)。证实,前列腺素E2与闭合性单纯性长骨干骨折患者急性疼痛密切相关,采用镇痛药物抑制前列腺素E2浓度可有效减轻患者疼痛。

骨科术后短期留置尿管夹闭与否对患者排尿效果的影响

目的探讨骨科患者术后短期留置尿管拔管前夹闭尿管与否的排尿效果,为开展循证实践提供证据。方法将314例普骨科术后短期(1～7 d)留置尿管患者随机分为观察组170例和对照组144例。观察组拔除尿管前定时夹闭尿管,对照组持续开放引流直接拔管。比较两组自然排尿、诱导排尿、恢复自行排尿时间和导尿管重置的发生情况。结果两组恢复自行排尿时间,自然排尿、诱导排尿和导尿管重置发生率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论骨科患者术后短期留置尿管患者拔管前夹闭尿管没有缩短正常膀胱功能恢复时间,存在膀胱过度扩张等风险,提示短期留置尿管患者拔管前可不必夹闭尿管。

正常兔与骨性关节炎兔关节液的分析

背景:研究表明,在骨关节炎关节液中,关节液的成分发生了改变,与软骨损伤密切相关。目的:测定骨性关节炎兔和正常兔关节液离子、细胞数及透明质酸水平,观察早期骨性关节炎关节液理化环境的变化并与关节软骨病理改变之间的关系;观察骨性关节炎中白细胞介素1、肿瘤坏死因子α在早期骨性关节炎中的变化及其意义。方法:新西兰大白兔采用Hulth方法制备右膝关节骨性关节炎模型,左膝关节正常对照。分别在第4,6,8周双膝取材。进行病理切片观察和关节液常规生化定量,并采用ELISA方法对关节液中的透明质酸、白细胞介素1、肿瘤坏死因子α进行定量检测。结果与结论:在早期骨性关节炎兔关节液中,离子浓度变化不大;透明质酸、白细胞介素1、肿瘤坏死因子α水平在第4周即发生变化:透明质酸水平在造模后4周明显升高,随软骨病变程度增加而下降趋势明显,至造模后8周时浓度已下降至正常水平;白细胞介素1水平在造模后4周明显升高,4,6,8周水平有波动,总体水平高表达;肿瘤坏死因子α水平在造模后4周明显升高,4,6,8周水平逐渐上升。

同种异体脱钙骨与骨髓间充质干细胞关节腔内共培养:与同腔软骨性状的对比

背景:临床发现膝关节内游离体能长期存在于关节腔内并能保持一定的软骨组织学特性和生理学特性,因此大胆提出假设:关节腔环境可能是软骨细胞生长、发育的较佳环境并提出"腔内培养,腔内移植"的理念。目的:观察兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质体外培养或关节腔内培养组织工程软骨与同腔软骨的性状差异。方法:实验分3组进行,体外培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质体外复合培养;腔内培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质以筋膜包裹,复合培养于成年新西兰兔膝关节腔内,以同腔内正常软骨为对照。结果与结论:培养12周后:①体外培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞少量增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞排列无序,少量周围基质包绕;Masson染色阳性区域小,细胞排列无序;Ⅱ型胶原免疫组织化学见软骨细胞胞浆及胞外基质少量黄色颗粒。②腔内培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,软骨陷窝形成,周围基质包绕;Masson染色阳性,软骨细胞多,基质蓝染,按一定应力方向排列;Ⅱ型胶原免疫组织化学见细胞外基质中出现较多棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色阳性。说明骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质复合物可在体外及膝关节腔内培养出组织工程软骨,关节腔内培养的软骨比体外培养的软骨更接近正常软骨。

MMP-13在早期股骨头坏死滑膜中的表达

目的分析早期股骨头坏死(ONFH)患者滑膜中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达,探讨其在ONFH病情进展中的作用。方法选取30例早期ONFH患者(坏死组)、30例髋关节骨性关节炎(OA)患者(OA组)、30例股骨颈骨折患者(骨折组),术中取滑膜组织,采用免疫组织化学技术检测滑膜中MMP-13蛋白的表达及滑膜形态学改变,并采用RT-PCR技术检测滑膜中MMP-13 mRNA的表达水平。结果免疫组化结果显示,MMP-13蛋白于坏死组及OA组中表达与骨折组中表达差异有统计学意义(P<0.05),而坏死组与OA组间差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR结果显示坏死组与OA组的MMP-13 mRNA表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-13蛋白与mRNA在坏死组与OA组中呈高表达,表明两者可能有着相同的滑膜病变机制,但坏死组mRNA表达较OA组更高,表明滑膜病变的程度可能存在差异。

ADAMTS-4与TAK1在骨关节炎软骨组织中表达的相关性研究

目的探讨带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)与转化生长因子β激活激酶1(TAK1)在骨关节炎(OA)软骨组织中的相关性表达。方法采用病例对照研究,分别利用免疫组织化学法和Western blot法检测ADAMTS-4、TAK1在OA组及正常对照组软骨组织中的表达情况,同时研究二者在OA中表达的相关性。结果 ADAMTS-4和TAK1在OA组表达均明显高于正常对照组(P<0.01);二者在OA软骨组织中的表达呈正相关(r=0.469,P<0.05)。结论 ADAMTS-4与OA软骨病变的发生发展密切相关,活化的TAK1可能致OA软骨组织中ADAMTS-4的高表达。TAK1可以作为OA治疗的新靶点。

自体外周血干细胞与脱钙骨复合移植修复骨缺损的临床应用

目的 :观察自体外周血干细胞 (APBSC)与脱钙骨 (DBM )复合移植治疗良性骨肿瘤术后骨缺损的疗效。方法 :对 12例骨肿瘤患者 ,手术切除骨肿瘤脱钙骨填充骨缺损 ,术后第 7天行骨髓动员 ,每天皮下注射特尔立 3 0 μg/kg ,连续 3d ,第 4天静脉滴注 10mg地塞米松后采集APBSC。在X线电视透视下将一枚骨穿针准确穿入骨缺损部位 ,然后抽取自体外周血干细胞即可注入骨缺损部位。通过术后连续X线片 ,了解其骨缺损修复能力。结果 :12例病人术后得到随访 ,时间为 4～ 16个月 ,在 2～ 4个月以内均开始有不同程度的骨化 ,成骨效应满意。结论 :自体外周血干细胞 (APBSC) /脱钙骨 (DBM )复合移植是一种治疗骨缺损有效的新方法。

抑癌基因PTEN对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响

目的探讨外源性PTEN基因稳定转染对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响。方法应用质粒pCMV-Tag3B-PTEN和pCMV-Tag3B空载体质粒,以脂质体转染法转染体外培养的人骨肉瘤细胞株MG-63,以未转染组为对照。应用RT-PCR分析目的基因表达,MTT法分析细胞生长增殖,An-nexinV—FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,荧光染色法观察细胞形态。结果pCMV-Tag3B-PTEN转染组有外源目的基因的整合和相应mRNA表达。MTT检测表明,pC-MV-Tag3B-PTEN转染组转染组活细胞数低于未转染组和pCMV-Tag3B细胞转染组。流式细胞术显示pCMV-Tag3B-PTEN转染组凋亡率高于未转染组和pCMV-Tag3B细胞转染组。荧光染色观察到pCMV-Tag3B转染组部分细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论外源性PTEN基因稳定转染可诱导人骨肉瘤细胞凋亡。

关节镜下钢丝和空心钉固定治疗胫骨髁间前棘骨折的疗效比较

目的探讨关节镜下钢丝捆扎固定与空心钉固定治疗胫骨髁间前棘骨折的疗效。方法关节镜下采用2种固定方法治疗胫骨髁间前棘骨折患者40例:钢丝捆扎固定20例(A组),空心钉固定20例(B组)。在关节镜监视下,对移位或粉碎骨折块进行复位,用钢丝或空心钉对骨折块行内固定,同时处理合并伤。膝关节功能采用Lysholm评分标准评定:术前为42.5分(35～46)分。术后使用支具于伸膝位制动4～6周,术后给予相应阶段的康复指导。结果 40例患者术后均获得随访,平均18个月(6～36个月),X线片示骨折复位满意,愈合良好。术后末次随访膝关节Lysholm评分为95.5(89～100)分,手术前、后比较差异有显著性(P<0.05),其中优32例,良5例,差3例,优良率92.5%。术后出现2例膝关节不稳,1例屈曲受限。结论关节镜下钢丝捆扎固定与空心钉固定治疗胫骨髁间前棘骨折均具有创伤小、内固定可靠等优势,疗效满意。

骶骨肿瘤的手术治疗

目的:探讨骶骨肿瘤的手术治疗方法及其疗效。方法:15例骶骨肿瘤患者,男12例,女3例;年龄17～68岁,平均54.6岁。原发性肿瘤10例,转移性肿瘤5例。采用前方入路病灶清除5例,后方入路单纯病灶清除3例,病灶清除联合植骨加钉棒系统内固定重建7例。术后根据肿瘤性质辅助放疗或化疗。结果:13例获随访,时间4个月～5年,所有患者近期疗效满意,局部疼痛及神经症状均有不同程度的改善。1例术后出现二便功能障碍加重,经保守对症治疗4个月后好转。1例脊索瘤和2例转移瘤于术后1～2年死于复发和远处转移。1例骨巨细胞瘤于术后6个月局部复发,未再手术。结论:根据骶骨肿瘤患者特点制定个体化的以手术治疗为主的综合治疗方案,能得到较满意疗效。

颈前路减压植骨融合内固定术对颈椎曲度和椎间高度的影响

目的评价颈前路椎体次全切除髂骨植骨钢板内固定手术对颈椎生理曲度和椎间高度的影响。方法选择因脊髓型颈椎病而行椎体次全切除髂骨植骨钢板内固定手术的患者32例,通过术前和术后及随访期间的颈椎标准侧位片测量颈椎生理曲度"D"值和椎间高度,并对各组测量值进行统计学分析比较。结果术后即刻颈椎生理曲度"D"值平均增加6.17±2.53mm,椎间高度平均增加3.21±1.27mm,两者与术前比较差异均有显著性。32例均获得随访,随访时间2-3.2年。随访中颈椎生理曲度和椎间高度都有丢失,但丢失结果比较无统计学意义。结论颈前路椎体次全切除髂骨植骨钢板内固定能明显改善颈椎生理曲度和椎间高度,且术后随访期间能长期维持。

膝关节腔内培养骨髓间充质干细胞复合脱钙骨的组织工程软骨

背景:如何更好地以组织工程学方法修复关节软骨缺损并达到良好的远期疗效目前尚无公识。目的:创新性地在膝关节腔内培养兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的组织工程软骨。方法:采用全骨髓贴壁筛选法分离培养兔骨髓间充质干细胞,DMEM/F12完全培养基培养,成软骨诱导条件培养基诱导分化。取同种异体兔的髂骨和椎体骨制作成脱钙骨支架,诱导后的骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨支架上,培养1d后将细胞-支架复合物用筋膜包裹置于兔左膝关节腔内培养,单纯脱钙骨支架筋膜包裹置入右膝关节腔。于培养第4,8,12周分别取材,行大体观察并制成石蜡切片,采用苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化染色方法进行组织学观察。结果与结论:培养4,8周,细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化的平均吸光度值(A)分别为0.263±0.031,0.340±0.052,单纯支架组标本分别为0.147±0.027,0.165±0.030,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);培养12周细胞-支架组标本Ⅱ型胶原免疫组化A值平均为0.362±0.037,标本类似正常软骨外观,Ⅱ型胶原免疫组化反应呈阳性;而单纯支架组脱钙骨支架降解。培养12周细胞-支架组苏木精-伊红染色结果显示细胞数量多,脱钙骨支架基本被吸收;而甲苯胺蓝染色结果显示有被染成紫红色的异染性基质形成。结果提示兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨可在兔膝关节腔内培养出组织工程软骨。

微创LISS钢板治疗胫骨中上端粉碎性骨折

目的探讨经皮微创治疗胫骨中上端粉碎性骨折的临床疗效。方法采用闭合复位LISS钢板治疗胫骨中上端骨折13例。结果患者均获随访,时间12～20个月,平均12个月。切口均一期愈合,术后X线片复查显示骨折对位对线良好,无固定丢失和骨折不愈合,无钢板和螺钉变形,无软组织感染。膝关节功能按Merchan等评分标准评定,优9例,良2例,可2例。结论 AO微创内固定系统(LISS钢板)具有创伤小、并发症少、骨折愈合率高等优点,是治疗复杂性胫骨近端及胫骨中段粉碎性骨折的一种有效治疗方法。

后路经椎弓根椎体截骨术治疗胸腰椎后凸畸形

回顾性分析后路单节段经椎弓根椎体截骨术(PSO)治疗20例陈旧性胸腰椎骨折后凸畸形患者的临床疗效。比较术前、术后及末次随访时后凸Cobb角、疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分。通过Frankel分级评分评价患者神经功能恢复情况。术后Cobb角、VAS评分和ODI评分分别与术前相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。末次随访时临床症状和神经功能获得较大改善。后路单节段PSO治疗陈旧性胸腰椎骨折后凸畸形是一种安全、有效术式。

骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质组合生长因子诱导向软骨细胞分化

背景:用组织工程学方法高质量修复关节软骨缺损并达到很好的远期疗效目前尚无定论。鉴于此,课题组提出"同种异体骨髓间充质干细胞关节腔内定向培养组织工程软骨"的实验设技。目的:同种异体脱钙骨基质组合转化生长因子β1和胰岛素样生长因子Ⅰ诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的能力,同时探索其在关节腔内培养促进向关节软骨定向分化的方法。方法:分离兔骨髓间充质干细胞并行体外培养,分为两组:实验组DMEM培养液中加入转化生长因子β1和胰岛素样生长因子Ⅰ,对照组中未加入诱导因子。比较两组细胞的增殖情况和成软骨分化情况。制备同种异体脱钙骨基质支架材料,实验组骨髓间充质干细胞负载到同种异体脱钙骨基质中,构建组织工程软骨复合体,取另2只兔的腰背筋膜包裹后缝合固定到30只兔膝关节腔内行腔内培养。分别于植入后4,8,12周各取10只标本进行组织学切片观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学观测,并对结果进行分析。结果与结论:实验组中骨髓间充质干细胞集落形成效率明显高于对照组(u=3.326,P<0.01)。实验组细胞爬片做Ⅱ型胶原免疫组化检测呈阳性,对照组未见阳性细胞。组织工程复合体在腔内培养12周后,苏木精-伊红染色见大量软骨细胞增生,胞核染色呈蓝色;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,大量软骨陷窝形成,周围大量基质包绕;Ⅱ型胶原免疫组织化学反应见细胞外基质中出现大量棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色强阳性。提示转化生长因子β1和胰岛素样生长因子Ⅰ可显著促进骨髓间充质干细胞增殖和成软骨分化,骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质结合后可在关节腔内成功培养出组织工程软骨。同种异体脱钙骨基质符合组织工程软骨支架材料的基本要求。

脂联素与大鼠激素性股骨头坏死的修复

背景:动物实验表明脂联素影响成骨细胞和破骨细胞的增殖和分化,临床研究发现脂联素和骨密度存在着一定的相关性,但具体作用机制尚不清楚。目的:评价髋关节内直接注射重组大鼠脂联素对激素性股骨头缺血性坏死修复的影响。方法:将SD大鼠随机分成4组。空白对照组腹腔注射生理盐水,其余大鼠腹腔注射醋酸泼尼松龙诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型。随后将低剂量组、高剂量组大鼠右侧髋关节内分别注入1μg、10μg的重组脂联素;生理盐水组注入等量的生理盐水;空白对照组不作任何处理。4周后行X射线平片观察,光镜下观察股骨头坏死和修复的程度。分析骨小梁面积、空骨陷窝数、软骨下骨血管数量,免疫组织化学检测股骨头肿瘤坏死因子α表达情况。结果与结论:空白对照组X射线片无异常发现,生理盐水组、低剂量组显示股骨头密度不均骨小梁模糊;高剂量组股骨头形态和骨密度均正常。大体所见空白对照组骨质硬,生理盐水组骨质明显疏松,低剂量组、高剂量组骨质硬度介于空白对照组、生理盐水组之间。光镜显示空白对照组股骨头软骨、骨小梁、骨细胞、空骨陷窝、毛细血管数及骨髓造血组织均正常,而生理盐水组明显异常,与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);高剂量组结果显著优于生理盐水组(P<0.01),低剂量组结果与生理盐水组差异无显著性意义(P>0.05),生理盐水组肿瘤坏死因子α的表达高于其余3组(P<0.01)。结果表明,髋关节内直接注射重组脂联素可促进激素性股骨头缺血性坏死的修复,且具有剂量依赖性。

直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞

取90gSPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量,CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义（P〈0.01）。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。

环磷酰胺对骨折愈合的影响

背景:目前国内关于环磷酰胺对骨质的研究主要集中在对骨质疏松的研究。目的:验证环磷酰胺对骨折愈合的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/03在安徽医科大学动物实验中心完成。材料:健康成年雄性新西兰大白兔48只,体质量3.0～3.2kg。环磷酰胺为江苏恒瑞医药公司产品,国药准字H32020857。方法:48只新西兰大白兔于右侧胫骨中段造成3mm缺损,随机分成环磷酰胺、生理盐水2组,每组24只。术后第2天对环磷酰胺组动物进行环磷酰胺腹腔注射,每次20mg/kg,生理盐水组给予腹腔注射生理盐水10mL/只。注射1次/d,连续2周。主要观察指标:术后2,4,8周,行X射线摄片骨密度测试,分别抽取兔耳缘静脉血,测血钙、血磷、碱性磷酸酶,两组各随机取8只兔处死,取双侧胫骨断段行组织学检查、机械力学测试。结果:环磷酰胺组2,4,8周后从X射线以及骨密度和骨密度比率可以看出环磷酰胺抑制骨痂的形成,组织形态学也能证实骨痂形成的缺乏,血钙血磷以及碱性磷酸酶也明显降低。8周后环磷酰胺组力学测试的4项参数平均化为对侧完整胫骨参数值的百分比后比生理盐水组低,差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:环磷酰胺可延迟骨折的愈合,引起软组织水肿,导致骨缺失,减少骨折愈合后的机械强度。