小鼠感染日本血吸虫肝脏损害的动态观察

目的动态观察和探讨小鼠感染日本血吸虫肝脏虫卵肉芽肿病变及纤维化与血清学改变的相关性。方法小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,定期剖杀小鼠,观察肝脏大体变化并测定肝脏系数;HE染色及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度;ELISA检测血清谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT)含量。放免法检测血清透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量。结果肉眼观察感染后24d肝脏表面开始出现出血点,29d开始出现粟白色肉芽肿;HE染色发现感染后21d肝脏可见灶性炎症,28d始见虫卵,但无肉芽肿反应,29d可见肉芽肿反应并于42d达到高峰;血清ALT/AST在28d明显升高,39d达到高峰,42d开始下降,70d接近正常水平;统计学分析血清转氨酶水平与肉芽肿面积具有相关性。Masson染色表明肝脏纤维化42d开始出现,以后逐渐加重;血清HA、LN随着纤维化的出现而升高,Ⅳ-C水平无明显改变,但统计分析胶原染色面积与血清纤维化指标无相关性。结论肝脏虫卵肉芽肿和纤维化均是导致小鼠血吸虫病肝脏损害的主要原因,血清转氨酶变化与肝脏的肉芽肿病变动态相一致,并呈显著正相关;血清纤维化指标与肝脏早期纤维化病变无相关性。

胰岛素对糖尿病大鼠下颌下腺内NGF及VEGF表达的影响

目的观察神经生长因子(NGF)及血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病大鼠下颌下腺内表达变化,探讨胰岛素对其表达影响及可能机制。方法 SD大鼠30只,随机分为:对照组、糖尿病组、胰岛素治疗组。大鼠2个月成模后,取血检测血糖;取下颌下腺组织,分别进行HE染色、免疫组织化学染色和计算机图像分析。结果①对照组血糖与糖尿病组比较差异有统计学意义;胰岛素治疗组血糖与糖尿病组比较差异有统计学意义。②糖尿病组腺泡轻度萎缩,排列不规则,颗粒曲管数目减少,直径变小;胰岛素治疗组较对照组变化不明显。③与对照组相比较,糖尿病组NGF表达下调,VEGF表达上调。与糖尿病组相比较,胰岛素治疗组NGF表达上调,VEGF表达下调。结论糖尿病大鼠下颌下腺内NGF表达减少、VEGF表达增高,可能是糖尿病患者神经病变与血管病变的重要原因之一;胰岛素治疗可能与NGF和VEGF的表达改变有内在联系。

甲状腺功能减退症对成年期大鼠前额叶皮质Syntaxin-1蛋白表达的影响

目的研究成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠前额叶皮质内突触前膜蛋白syntaxin-1的表达,探讨甲减脑损伤可能的分子机制。方法用丙基硫氧嘧啶(6-n-propyl-2-thiouracil,PTU)诱导建立成年期大鼠甲减模型,采用放射免疫法测定甲减组和健康对照组大鼠的血清甲状腺激素水平,免疫组织化学方法分析两组大鼠前额叶皮质内Syntaxin-1的表达。结果甲减组大鼠血清T3、T4水平[(0.34±0.04)nmol/L、(43.01±2.95)nmol/L]显著低于健康对照组[(0.65±0.52)nmol/L、(55.20±3.56)nmol/L](P<0.05);前额叶皮质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层Syntaxin-1的表达水平显著低于健康对照组(P<0.01)。结论成年期甲减大鼠前额叶皮质内Syntaxin-1表达减少。

组蛋白去乙酰化酶3和4在ApoE基因敲除小鼠海马CAl和CA3区神经元内的表达变化

目的：比较组蛋白去乙酰化酶（HDAC）3和4在野生型和ApoE基因敲除小鼠海马CAl和CA3区神经元内的表达。方法：雄性4周龄C57BL／6ApoE基因敲除子鼠为模型组，雄性4周龄C57BL／6野生型子鼠为对照组。饲养3月后测体质量、血脂，并取脑组织固定、石蜡包埋和切片，进行H-E染色、免疫组织化学显色和光密度分析。结果：HDAC3主要分布在海马锥体细胞的核中，而HDAC4主要表达在锥体细胞的胞质区。模型组海马CAl和CA3区HDAC4表达水平高于对照组。模型组HDAC3在海马CAl和CA3区的平均光密度值与对照组比较差异无统计学意义。结论：HDAC4在ApoE基因敲除导致记忆功能降低小鼠模型中可能具有重要调节作用。

成年期甲减对大鼠额叶SNAP-25蛋白表达的影响

目的研究成年期甲状腺功能减退症(甲减)大鼠额叶内突触相关蛋白SNAP-25的表达,探讨甲减脑损伤的分子机制。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)建立成年期大鼠甲减模型,采用放射免疫法测定甲减组和正常对照组大鼠的血清甲状腺素水平,免疫组化方法分析两组大鼠额叶内SNAP-25蛋白的表达情况。结果甲减组大鼠血清T3、T4水平显著低于正常对照组(P<0.01、P<0.05);额叶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层SNAP-25蛋白的表达水平显著高于正常对照组(P<0.05、P<0.01)。结论成年期甲减大鼠额叶SNAP-25蛋白表达增多。

ApoE基因敲除高脂血症小鼠下颌下腺超微结构及上游刺激因子1表达观察

目的观察载脂蛋白E(Apo E)基因敲除高脂血症(HLP)对小鼠下颌下腺超微结构以及上游刺激因子1(USF1)表达影响。方法 10只野生型小鼠予普通饲料喂养作为对照组,10只Apo E基因敲除子鼠予高脂饲料喂养作为高脂组。造模6个月后,取眼眶血检测血脂;取小鼠下颌下腺组织分别进行光镜、电镜和免疫组织化学观察。结果与对照组比较,高脂组胆固醇、三酰甘油和极低密度脂蛋白含量明显升高(P<0.05)。HE染色观察到,高脂组小鼠下颌下腺的腺泡明显萎缩,细胞排列紊乱。电镜下,可见高脂组小鼠导管上皮内线粒体嵴断裂,腺细胞内粗面内质网囊状扩张,结构松散零乱。免疫组化显示,高脂组USF1表达下降;平均光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HLP可导致小鼠下颌下腺超微结构出现病理改变,USF1表达减少。

心肌闰盘染色改良法

应用免疫组化与HE相结合的染色方法显示心肌闰盘,敏感性高、特异性强,同时能全面展示心肌的光镜结构特点,在实验教学中便于学生观察和识别。

Th17细胞因子及炎症趋化因子在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达

目的观察日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肝脏Th17细胞因子及其相关炎症趋化因子动态变化和肝脏虫卵肉芽肿病变,探讨其在日本血吸虫虫卵肉芽肿病变形成中的作用。方法建立日本血吸虫感染C57BL/6小鼠模型,感染后2、4、6、8、10和12周剖杀小鼠,用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏白介素17(IL-17)、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-23、炎症趋化因子(CX-CL1、CXCL2和CCL11)mRNA水平;ELISA法检测肝脏IL-17、CXCL1、CXCL2和CCL11蛋白水平;肝脏石蜡切片,HE染色后动态观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿大小。结果 IL-17、IL-6、TNF-α、IL-23、CXCL1、CXCL2、CCL11 mRNA水平于感染后6、8周明显高于正常对照;且细胞因子IL-17及趋化因子CXCL1、CXCL2和CCL11蛋白分泌水平显著升高(P<0.05);HE染色显示感染第4周小鼠肝脏出现虫卵肉芽肿,第6周肉芽肿反应达高峰,第8、10周虫卵肉芽肿缩小,周围出现成纤维细胞,第12周时肉芽肿明显缩小,部分肝细胞变性、坏死、有炎症细胞浸润,虫卵周围可见到少量梭形的成纤维细胞及类上皮细胞。结论 IL-17在日本血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿病变过程中可能是一种具有重要作用的调节因子,参与肝脏肉芽肿形成。

成年期甲减大鼠海马Munc18表达及甲状腺素的治疗效应

目的观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马神经突触前膜胞内蛋白Munc18表达及常规剂量和大剂量替代治疗后的变化。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)建立成年期大鼠甲减及治疗模型,放射免疫法测定血清甲状腺素水平,免疫组织化学法观察Munc18在大鼠海马结构的表达与分布。结果与正常对照组比较,甲减大鼠血清T3、T4水平减低,差异有统计学意义,常规剂量替代治疗后恢复正常,大剂量替代治疗后升高,差异有统计学意义。免疫组织化学法显示甲减组海马CA3区、齿状回(DG)和CA1区多形层的Munc18平均光密度值减低,常规剂量替代治疗后,仅DG区分子层平均光密度值减低,大剂量替代治疗后,其差异无统计学意义。结论成年期甲减可致海马内Munc18蛋白表达减少,常规剂量甲状腺素替代治疗能使其大部分恢复,大剂量替代治疗能全部恢复。

ApoE基因敲除小鼠海马CA3区神经元形态学和微管相关蛋白2表达变化

目的观察载脂蛋白E基因敲除(Apo E KO)对小鼠海马CA3区神经元形态结构改变以及微管相关蛋白2(MAP-2)表达的影响。方法 10只野生型C57BL/6J小鼠为对照组,10只Apo E基因敲除小鼠为KO组,普通饲料喂养3个月。采用分光光度计检测血脂变化;取两组小鼠脑组织,HE染色和电镜技术观察海马CA3区结构改变,免疫组织化学技术观察两组小鼠海马CA3区MAP-2表达变化,采用计算机图像分析系统检测其平均光密度(MOD)值。结果与对照组比较,KO组小鼠血浆总胆固醇、血浆三酰甘油、低密度脂蛋白含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。光镜下,KO组小鼠海马CA3区锥体细胞较小,排列稀疏松散。电镜下,KO组海马神经元内线粒体肿胀变性,嵴消失;神经纤维髓鞘松懈;突触小泡数量减少,突触间隙模糊等。免疫组织化学结果显示,对照组小鼠海马神经元内MAP-2高表达,KO组含量明显减少;图像分析显示KO组CA3区MAP-2MOD值明显降低(P<0.05)。结论 Apo E KO小鼠海马神经元结构出现病理改变,MAP-2表达下降,提示Apo E KO与神经退行性病变有一定联系。

突触相关蛋白25在成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶内表达变化及甲状腺素治疗效应

目的研究成年期甲状腺功能减退症(甲减)大鼠额叶内突触相关蛋白25(SNAP-25)的表达及甲状腺素替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复的分子基础。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)建立成年期大鼠甲减模型,采用放射免疫法测定甲减组、常规剂量甲状腺素替代治疗组、大剂量甲状腺素替代治疗组、健康对照组大鼠的血清甲状腺素水平,免疫组织化学方法分析四组大鼠额叶内SNAP-25蛋白的表达情况。结果与健康对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平显著减低(P<0.02);常规剂量(5μg.kg-1.d-1)替代治疗后,血清T3、T4恢复至正常水平。甲减组额叶I、II、III、IV、V层SNAP-25蛋白的表达水平显著高于健康对照组(P<0.01);常规剂量替代治疗组SNAP-25表达水平与健康对照组比较未见明显差异;与甲减组相比,大剂量(20μg.kg-1.d-1)替代治疗组SNAP-25表达水平在额叶各层显著减低(P<0.05)。结论成年期甲减大鼠额叶SNAP-25蛋白表达增多,常规及大剂量甲状腺素替代治疗后均可降低该蛋白表达,大剂量替代治疗后SNAP-25表达水平更接近正常。

被动吸烟对胎鼠海马神经元一氧化氮合酶表达的影响

目的观察孕鼠被动吸烟对胎鼠海马神经元一氧化氮合酶表达的影响,以期为探讨被动吸烟对子代危害的机制提供更多实验依据。方法将雌性大鼠随机分为对照组和实验组两组。实验组采用人工熏烟的方法建立被动吸烟模型,对照组不作处理。妊娠21日人工结束分娩,取胎鼠脑组织,进行一氧化氮合酶(NOS)免疫组化染色。高倍镜下对海马区观察并摄片,用图像分析软件Image-Pro Plus对两组切片进行光密度分析,观察其差别。结果 NOS在胎鼠海马区有表达,分布于海马神经元胞质内。计算机图像分析结果表明,与对照组比较,实验组海马NOS表达下降,统计结果有显著差异性(P<0.05)。结论孕鼠被动吸烟使胎鼠海马NOS的表达下降,其可能为孕期被动吸烟导致子代学习记忆记忆功能下降的机制之一。

被动吸烟对胎鼠海马神经元超微结构及神经生长因子表达水平的影响

目的探讨被动吸烟对胎鼠海马超微结构的影响以及神经生长因子(NGF)表达的变化。方法24只成年雌性大鼠随即分为实验组与对照组,每组12只,对实验组大鼠进行被动吸烟造模。应用电镜观察胎鼠海马神经元的病理改变,采用免疫组化SP法检测海马神经元内神经生长因子表达变化。结果电镜下,被动吸烟组胎鼠神经元内线粒体空泡样变性,出现水泡样结构,核染色质边集;实验组胎鼠神经元神经生长因子平均光密度低于实验组,两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论被动吸烟使胎鼠神经元结构破坏和神经生长因子表达下降,对胎鼠学习记忆能力可能有一定影响。

白藜芦醇促进肥胖小鼠骨骼肌中FNDC5降解的机制

目的研究白藜芦醇通过诱导自噬促进肥胖小鼠骨骼肌组织中纤连蛋白Ⅲ型结构域包含5(FNDC5)降解的机制。方法将6周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为标准饮食(SCD)组、高脂(HFD)组及高脂+白藜芦醇(HFD+RES)组,HFD+RES组在HFD的同时胃饲白藜芦醇(400 mg/kg·d),共持续20周。测定体质量、血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白,HE染色检测骨骼肌的病理学变化。免疫组化、RT-PCR和Western blot分析和纤连蛋白Ⅲ型结构域包含5(FNDC5)、沉默信息调节因子(SIRT)-1、SIRT2、微管相关蛋白1轻链3α(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)、Bcl-2同源结构域蛋白抗体(Beclin-1)、噬相关5同源物(ATG5)、噬相关7同源物(ATG7)的表达。结果HFD组小鼠体质量增高,血清TG、TC和LDL-C水平显著升高,HDL-C水平下降;骨骼肌纤维间出现脂肪沉积;SIRT1、SIRT2和LC3的蛋白表达水平降低,而FNDC5和p62的蛋白表达升高。FNDC5的表达水平升高,SIRT1、SIRT2、LC3、Atg7和Beclin-1的基因表达水平降低。RES组可逆转HFD的效应,增加SIRT1、SIRT2和自噬相关基因的表达。结论白藜芦醇可减少骨骼肌FNDC5表达的效应,其机制可能与其增加SIRT1和SIRT2的表达,进而促进自噬和FNDC5的降解有关。

日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化染色方法的比较

目的比较Van Gieson氏染色和Masson氏三色染色法用于日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化染色的效果。方法建立日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化模型,取肝脏标本,常规切片,进行Van Gieson氏染色和Masson氏三色染色,应用图像分析软件统计虫卵肉芽肿纤维化面积。结果染色时间为3～7 min时,2种方法显示肉芽肿纤维化面积差异无统计学意义(P>0.05);染色时间为10 min时,由于非特异性因素使得Masson氏染色法着色面积明显大于Van Gieson氏染色法,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论Van Gieson氏染色法比Masson氏三色操作过程相对简单,易于掌握,染色结果稳定、可靠,可以作为评价日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化程度的较好染色方法。