沉默减数分裂内切酶1(EME1)抑制肝癌细胞增殖的机制

目的探讨减数分裂内切酶1(EME1)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法筛选TCGA数据库肝癌样本中的差异表达基因。采用免疫组化和Western Blot分析EME1在肝癌组织中的表达丰度。通过短发夹RNA(shRNA)构建慢病毒并感染BEL-7404细胞干扰EME1基因表达,分为沉默组(shEME1)和对照组(shCtrl)。通过实时荧光定量PCR法和Western Blot检测两组EME1 mRNA和蛋白表达水平,Celigo计数法及MTT活性检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期,Caspase3/7活性检测细胞凋亡。两组间比较采用成组t检验。结果TCGA结果显示EME1的mRNA表达水平在肝癌组织中是癌旁组织的18.9倍(114.5±153.0 vs 8.0±7.2,t=5.00,P<0.001);EME1的蛋白表达水平在肝癌组织中是癌旁组织的7.0倍(免疫组化检测,8.4±2.6 vs 1.2±0.4,t=7.55,P<0.001)和2.5倍(Western Blot检测,249.0%±35.5%vs 100.0%±77.8%,t=3.02,P<0.05)。慢病毒感染后,相对于对照组,沉默组EME1的mRNA表达水平下降了29.9%(29.9%±0.9%vs 100.0%±3.6%,t=32.82,P<0.001),蛋白表达水平显著下降了35.7%(35.7%±14.9%vs 100.0%±28.9%,t=3.42,P<0.05);细胞计数下降了45.1%(4053±167 vs 8988±477,t=16.91,P<0.001)、细胞活性下降至66.9%(0.518±0.046 vs 0.774±0.022,t=8.74,P<0.001)及细胞克隆形成能力下降至29.0%(75±6 vs 260±9,t=28.92,P<0.001)。与对照组比较,沉默组G1期细胞(49.9%vs 44.0%,t=8.96,P<0.001)比例增多,G2/M期(15.9%vs 17.9%,t=9.13,P<0.001)与S期(34.2%vs 38.1%,t=6.91,P<0.001)的细胞比例减少;Caspase3/7活性增强了1.5倍(145.8%±5.9%vs 100.0%±2.3%,t=12.50,P<0.001)。结论EME1在肝癌组织中高表达,沉默EME1基因可抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

不同入路经皮椎间孔镜腰椎间盘切除术治疗腰椎间盘突出的临床疗效分析

目的 分析经皮椎间孔镜腰椎间盘切除术（PELD）治疗腰椎间盘突出症的临床疗效,探讨不同入路手术的适应证.方法 按纳入标准严格筛选2011年7月至2013年10月于解放军第三○七医院骨科行PELD的患者共35例,平均年龄32.5岁.术前Pfimmann腰椎间盘退变分级为Ⅱ～Ⅲ级.均施行PELD治疗,手术的目标节段分别是L4-5节段17例,L5-S1节段18例.L4-5节段采用侧后方入路实施手术15例,椎板间隙入路手术2例.L5-S1节段采用椎板间隙入路进行手术10例,采用经侧后方入路组8例.分析比较术前及术后腿痛1h、1个月、6个月、12个月的VAS评分;分析术前及术后3、22个月Oswestry功能障碍指数评分（以下简称Oswestry评分）,按改良Macnab标准评价临床疗效计算满意度[（优良数/患者总数）＆#215;100％].结果 所有患者均顺利实施了手术.手术时间平均为32.5 min.住院时间平均为2.5d.患肢VAS疼痛评分,术前（8.2±1.2）分,术后1 h（2.8±1.1）分,术后1个月（2.2±1.3）分,术后6个月（1.7±1.0）分,术后12个月（1.2±0.8）分,术前与术后各时点比较,差异均具有统计学意义（t=12.6、14.6、16.2、18.5,P均小于0.05）.患肢Oswestry评分,术前（84.61 ±12.51）分,与术后3个月（21.51 ±10.11）分,术后22个月（15.10±3.28）分比较,差异均具有统计学意义（t=51.6、58.5,P均小于0.05）.术后3个月与术后22个月比较,差异有统计学意义（t=19.5,P＜0.05）.按改良Macnab标准评价临床疗效：优20例,良12,一般3例,满意度为91.4％.结论 术前严格的病例筛选及适应证的把握是取得满意的临床疗效的重要保障,另外根据椎间盘是否脱出或游离程度,位置的不同,结合患者临床表现,实际生活的需要,耐受程度等要素,选择合理入路非常重要.