缺氧诱导因子2α在肝癌中的表达及其与血管生成、上皮间质转化的关系

目的研究缺氧诱导因子2α(HIF-2α)在肝细胞肝癌中的表达情况及其与血管生成和上皮间质转化(EMT)的关系。方法收集正常肝组织15例、肝癌组织和相应的癌旁组织各63例,采用免疫组化染色法检测HIF-2α的表达,分析其表达与肝癌临床病理特征及生存预后之间的关系;同时分析肝癌组织中HIF-2α、白细胞分化抗原34(CD34)、波形蛋白(Vimentin)的表达,探究HIF-2α的表达与血管生成、EMT的关系。结果免疫组化染色法显示HIF-2α在肝癌组织中主要在胞质表达,显著高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.001)。HIF-2α的表达与肿瘤最大径、肿瘤TNM分期、Edmondson分级及包膜和血管侵犯有关,与患者年龄、性别、乙肝表面抗原表达、甲胎蛋白(AFP)、Child-Pugh分级、肿瘤结节数目及肿瘤内坏死无关。相关性分析显示HIF-2α的表达与微血管密度(MVD)有关(t=5.919,P<0.001),与Vimentin的表达无关(r=1.013,P=0.209)。生存分析显示,高表达组术后总体生存率明显低于低表达组(P<0.001)。多因素分析显示瘤内坏死、肿瘤血管侵袭和HIF-2α表达是影响肝癌患者总生存率的独立危险因素。结论HIF-2α可促进肝癌血管生成,但可能不参与EMT,可作为判断肝癌患者预后的指标之一。

Peroxiredoxin 1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨过氧化物还原酶1(Prx1)与上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法分别检测Prx1、E-钙黏素(Ecadherin)、波形蛋白(Vimentin)在66例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织中的表达,并分析三者之间的关系及与临床病理因素间的关系。结果 Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在66例胰腺癌组织中的阳性表达率为69.70%(46/66)、40.91%(27/66)、56.06%(37/66);Prx1、E-cadherin和Vimentin分别在11例正常胰腺组织中的阳性表达率为18.18%(2/11)、90.90%(10/11)、18.18%(2/11)。Prx1、E-cadherin和Vimentin在胰腺癌组织中的表达均与TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度显著相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、病变部位均无关;Prx1与神经侵犯显著相关(P<0.05),而E-cadherin和Vimentin与神经侵犯无关。Prx1的表达与Vimentin表达呈正相关(P<0.05),Prx1和Vimentin的表达均与E-cadherin表达呈负相关(P<0.05)。结论Prx1与EMT相关蛋白在胰腺癌组织中的表达呈显著相关性,并与其侵袭转移能力相关,提示Prx1的高表达可能为预测胰腺癌患者预后不良的辅助指标之一。

DHA对肝癌细胞侵袭力的抑制作用及机制研究

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人肝癌细胞株Bel-7402侵袭力及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法①采用台盼蓝拒染实验检测不同浓度DHA(0、25、50、100、200μmol/L)作用48 h后对细胞存活率的影响;②用Transwell小室模型和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力的变化;③运用Western blot法和细胞免疫组化法检测MMP-9表达的差异。结果不同浓度的DHA均可抑制细胞活率(P<0.05),其程度呈时间-剂量依赖性;与对照组细胞比较,细胞经不同浓度DHA刺激后其侵袭及迁移能力均有所下降(P<0.05);不同浓度DHA作用肝癌细胞48 h后MMP-9的相对表达量均明显降低(P<0.05),其影响呈剂量相关性。结论 DHA能降低人肝癌细胞株Bel-7402的相对活率,并且在一定程度上降低细胞的侵袭及迁移能力,其作用机制可能与抑制MMP-9的表达相关。

源头控制用于中重度急性胆道感染治疗

目的探讨源头控制原则在中重度急性胆道感染治疗中的应用价值。方法回顾性分析2004年1月至2014年6月应用外科源头控制原则处理的48例因胆石病、胆道肿瘤所致中重度急性胆道感染病人的临床资料。结果急性胆囊炎20例行经皮经肝胆囊穿刺引流术，急性胆管炎28例中6例行内镜十二指肠乳头括约肌切开术＋内镜鼻胆管引流术（endoscopic naso-biliary drainage，ENBD），21例行ENBD，1例行胆管内支架置入术。引流术后病人寒战、发热、腹痛、腹膜炎等症状、体征迅速缓解，感染中毒症状得到有效控制，肝功能渐趋正常。全组未出现并发症，无死亡病例。结论应用源头控制原则处理中重度急性胆道感染安全、微创、有效、并发症少，为后续进一步治疗创造了有利条件，具有重要的临床应用价值。

吻合口加固缝合预防腹腔镜直肠癌根治术后发生吻合口漏的前瞻性随机对照试验

目的探讨吻合口加固缝合对腹腔镜直肠癌根治术后吻合口漏发生率的影响。方法将安徽省立医院胃肠外科2014年9月至2016年12月期间收治的、拟行腹腔镜直肠前切除术的300例直肠癌患者，按随机数字表法分成吻合口加固缝合组和常规缝合组，每组各150例。所有患者均遵循肿瘤根治原则行规范的腹腔镜下全直肠系膜切除术。对于两次吻合器切割线形成的交叉区（“狗耳朵区”），吻合口加固缝合组使用4—0可吸收缝线缝合2—4针进行加固。排除术前新辅助放化疗者；剔除因并发梗阻或出血行急诊手术、术后行预防性回肠造口、行Hartmann手术或Miles手术、中转开腹及无法行肿瘤根治性切除的患者，收集两组患者的临床资料进行单因素和多因素分析。根据多因素分析结果，进一步将所有患者分成高危组（同时具有2项或以上危险因素）与低危组（只具有1项或无危险因素）进行分层分析，探讨有无加固缝合与吻合口漏发生率的关系。本试验经安徽省立医院研究伦理委员会审查通过，临床研究注册号为NCT02830633。结果根据剔除标准，最终符合研究人组标准的患者共291例，其中吻合口加固缝合组145例，常规缝合组146例。两组患者一般资料和术中情况差异无统计学意义（均P〉0．05）。术后全组共22例（7．6％）患者发生吻合口漏，吻合口加固缝合组和常规缝合组分别为5例（3．4％）和17例（11．6％），差异具有统计学意义（χ^2=6．992，P=O．008）。多因素分析显示，未行加固缝合是发生吻合口漏的独立危险因素（OR=2．75，95％CI：1．72～5．48，P=0．014）。其他独立危险因素还包括肿瘤直径≥4cm、肿瘤距肛缘距离〈5cm以及NRS2002评分≥3分。根据上述3项危险因素，进一步将所有患者分成高危组（80例）与低危组（211例）进行分层分析。高危组中，加固缝合的吻合口漏发生率为6．2％（2／32），低于未行加固缝合组（27．1％，13／48），差异有统计学意义（χ^2=5．470，P=0．019）。而低危组中，加固缝合和未行加固缝合组的吻合口漏发生率接近[4．1％（4／98）比2．7％（3／113），χ^2=0．333，P=0．564]。结论吻合口加固缝合预防腹腔镜直肠癌根治术后吻合口漏方便、有效，对于同时具备多项危险因素的患者更有临床意义。

胆管癌组织中microRNA-21的表达与上皮间质转化的关系及对预后评估的价值

目的研究microRNA-21在胆管癌组织中的表达及其与上皮问质转化（EMT）和患者预后的关系。方法收集2005年1月至2010年1月安徽医科大学附属省立医院手术切除的4l例胆管癌标本及10例行胆管癌根治术患者的癌旁组织标本，分别采用原位杂交和免疫组织化学法检测microRNA-21以及EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达，并分析microRNA-21与EMT的关系以及microRNA．21的表达对临床预后评估的价值。计数资料采用X2检验，相关性分析用Spearman法，采用Kaplan．Meier法绘制生存曲线，生存分析采用Log-rank检验。结果胆管癌组织中microRNA-21的阳性表达率为63％，高于癌旁组织的30％，两者比较，差异有统计学意义（X2=0．324，P〈0．05）；microRNA．21的表达与肿瘤细胞分化程度、有无淋巴结转移、有无神经和（或）脉管浸润密切相关（X2=6．365，0．552，11．896，P〈0．05），但与患者性别、年龄、肿瘤位置、病理类型无明显相关（X2=0．322，0．588，0．510，0．256，P〉0．05）。E-cadherin与N-cadherin的表达分别与有无淋巴结转移、有无神经和（或）脉管浸润相关（X2=4．630，5．512；6．600，7．152，P〈0．05），但与患者的性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤细胞分化程度及病理类型无明显相关（X2=0．266，0．013，0．067，0．666，0．003；1．036，0．997，1．808，2．997，0．812，P〉0．05）。同一批胆管癌组织中microRNA-21表达与EMT相关标志蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达具有相关性（r=0．373，0．614，P〈0．05）。术后生存分析结果显示：microRNA-21低表达者总体生存率及无瘤生存率均高于microRNA-21高表达者，两者比较，差异有统计学意义（X2=3．999，4．376，P〈0．05）。结论microRNA-21在胆管癌组织及转移淋巴结中高表达，可能通过诱导EMT的发生来促进胆管癌的浸润和转移；microRNA-21可以反映患者的预后。

胆管癌组织中信号转导及转录激活因子3信号通路相关基因的表达与意义

目的 探讨胆管癌组织中信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路相关基因Survivin及环氧化酶2（COX-2）的表达及其与胆管癌患者临床病理特征和预后的关系.方法 收集2007年9月至2012年7月安徽医科大学附属省立医院收治的43例胆管癌患者的癌组织标本,收集同期行胆肠内引流术和胆管修复的12例肝内外胆管结石和胆管损伤患者的正常胆管组织标本作为对照.应用免疫组织化学染色检测胆管癌及正常胆管组织中STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、Survivin及COX-2蛋白的表达,并分析其与胆管癌患者临床病理特征和预后的关系.采用门诊或电话方式对胆管癌患者进行随访,随访时间截至2014年3月.计数资料采用x2检验,相关性分析采用Spearman检验.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验.结果 STAT3、p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白在胆管癌组织中阳性表达率分别为69.8％ （30/43）、65.1％（28/43）、72.1％ （31/43）、79.1％（34/43）,在正常胆管组织中阳性表达率分别为41.7％（5/12）、8.3％（1/12）、16.7％（2/12）、41.7％（5/12）.p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白在胆管癌组织中的阳性表达率显著高于正常胆管组织,两组比较,差异有统计学意义（x2=12.136,9.811,4.679,P＜0.05）.p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白在胆管癌组织中的高表达与肿瘤局部浸润转移有关（x2=14.700,5.959,4.075,P＜0.05）;p-STAT3蛋白阳性表达与肿瘤神经侵犯有关（x2=10.384,P＜0.05）;Survivin、COX-2蛋白表达与胆管癌患者肿瘤神经侵犯无关（x2=2.718,3.024,P＞0.05）;p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达与胆管癌患者性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、肿瘤直径无关（x2=0.148,0.720,1.835,1.040,0.236;0.001,0.009,0.029,1.863,0.197;0.433,0.686,0.002,2.974,0.029,P＞0.05）.Survivin及COX-2蛋白的表达与p-STAT3呈正相关（r=0.524,0.583,P＜0.05）.43例胆管癌患者获得随访,随访时间为6个月至5年.在43例胆管癌组织中,肝门部胆管癌17例,p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阳性者的中位生存时间分别为7、9、9个月,p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阴性者的中位生存时间分别为18、11、11个月.p-STAT3蛋白表达阳性和阴性患者的生存率分别为33.3％和68.6％,两者比较,差异有统计学意义（x2=12.916,P＜0.05）.在26例胆总管中下段癌组织中,p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阳性者的中位生存时间分别为9、10、9个月,p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阴性者的中位生存时间分别为20、20、20个月.p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阳性患者的生存率分别为20.8％、9.4％和8.5％,显著低于p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白表达阴性患者的37.5％、37.5％和50.0％（x2=12.787,6.245,11.161,P＜0.05）.结论 p-STAT3、Survivin、COX-2蛋白在胆管癌中表达增高,且3者表达具有相关性.Survivin及COX-2可能是STAT3信号通路在胆管癌中影响肿瘤发生、发展及预后的效应基因.

细胞外信号调节激酶及蛋白激酶B信号通路在微RNA-21促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用

目的观察细胞外信号调节激酶1／2（ERKl／2）及蛋白激酶B（Akt）信号通路在微RNA．21（miR·21）促进胆管癌细胞侵袭转移中的作用。方法采用实验研究方法。体外培养胆管癌细胞QBc939细胞，通过构建合成无关序列、miR-21mimics和miR-21inhibitor并转染到细胞中，将细胞分为4组：cell组：自然生长细胞，21-NC组：转染无关序列，21-M组：转染miR-21mimics，21-I组：转染miR-21inhibitor。另取21-M组细胞进一步分为2组，分别加入20μmol／LLY294002和10μmol／LU0126处理48h，用于后续实验。检测指标：（1）RT-qPCR检测miR-21在各组胆管癌细胞中的表达。（2）Wersternblot检测各组胆管癌细胞第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶（PTEN）、ERK及Akt蛋白的相对表达量。（3）划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力。（4）Transwell实验检测各组胆管癌细胞迁移与侵袭能力的影响。正态分布的计量资料以面±s表示，两组均数比较采用t检验，多组均数比较采用方差分析，组问两两比较采用Bonferroni检验，重复测量数据采用重复测量方差分析。结果（1）miR-21在cell组、21-NC组、21-M组及21-I组中的相对表达量分别为1．010±0．010、0．980±0．050、4．900±0．350、0．260±0．010，4组比较，差异有统计学意义（F=78．23，P〈0．05）。21-NC组miR-21表达分别与cell组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。21-M组miR-21表达较cell组增加，21-I组较cell组减少，2I-M组和21-I组分别与cell组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）cell组、21-NC组、21-M组、21-I组细胞PTEN蛋白相对表达量分别为0．360±0．020、0．400±0．030、0．140±0．010、0．680±0．110，ERK蛋白相对表达量分别为0．045±0．126、0．470±0．140、0．460±0．060、0．440±0．110，P-ERK蛋白相对表达量分别为0．310±0．020、0．380±0．040、0．590±0．060、0．160±0．010，Akt蛋白相对表达量分别为0．400±0．010、0．390±0．080、0．410±0．090、0．380±0．070，P-Akt蛋白相对表达量分别为0．440±0．110、0．510±0．120、0．980±0．150、0．190±0．010，4组细胞PTEN、p-EltK、p-Akt蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义（F=10．23，12．78，18．11，P〈0．05），与cell组比较，21-NC组PTEN、ERK、P-ERK、Akt、p-Akt表达，差异均无统计学意义（P〉0．05）；而21-M组与cell组比较，PTEN表达减少，p-ERK和p-Akt表达增加，差异有均有统计学意义（P〈0．05）；21．I组与cell组比较，PTEN表达增加，而p-ERK和p-Akt表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）cell组、21-M组、mill-21＋LY294002组、mill-21＋U0126组细胞6-48h迁移率变化范围为12．0％±3．0％-23．0％±5．0％，21．0％±4．0％～43．0％±7，O％，6．0％±1．0％-18．0％±4．0％．9．0％±2．0％～26．0％4-6．0％。与cell组比较，21-M组细胞迁移能力各时间点迁移率更高，两组迁移率变化趋势比较，差异有统计学意义（F=16．23，P〈0．05）。miR-21＋LY294002组、miR-21＋U0126组迁移率较21-M组下降，3组迁移率趋势比较，差异有统计学意义（F=25．21，P〈0．05），3组迁移率变化趋势与时间交互效应，具有统计学意义（F=35．31，P〈0．05）。（4）cell组、21-M组、miR-21＋LY294002组、mill-21＋U0126组迁移细胞数分别为（198±32）个、（248±39）个、（187±23）个、（174±28）个，4组比较，差异有统计学意义（F=8．48，P〈0．05）；21-M组与cell组比较，差异有统计学意义（t=4．13，P〈0．05）；mill-21＋LY294002组、miR-21＋U0126组迁移细胞数较21-M组下降，3组比较，差异有统计学意义（F=21．98，P〈0．05）。cell组、21-M组、mill-21＋LY294002组、miR-21＋U0126组侵袭细胞数分别为（102±22）个、（211±36）个、（55±9）个、（67±13）个，4组比较，差异有统计学意义（F=11．32，P〈0．05）；21-M组与cell组比较，差异有统计学意义（t=6．67，P〈0．05）；miR-21＋LY294002组、miR-21＋U0126组侵袭细胞数较21-M组下降，3组比较，差异有统计学意义（F=36．23，P〈0．05）。结论ERK及Akt信号通路参与了miR-21促进胆管癌细胞侵袭辽移，PTEN可能介导了miR-21通过ERK及Akt通路促进胆管癌侵袭转移的过程。