肝胆管肿瘤手术的非接触分离技术

近十多年肝脏外科的飞速发展使得肝胆管肿瘤的外科处理逐步向肝内扩展，解剖性的肝段切除、肝叶切除、半肝切除乃至肝移植术。肝门部肿瘤的切除率由上一世纪70年代的0％，已经上升到75％以上。为了提高手术切除率，

维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖凋亡侵袭的影响

目的探讨维生素D类似物EB1089对肝癌细胞株增殖、凋亡和侵袭的影响。方法体外培养肝癌细胞株MH-CC97H,用不同浓度的EB1089分别培养不同的时间段。用四唑蓝比色实验(MTT)检测细胞的存活和生长,用流式细胞仪检测细胞的凋亡,用Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭迁移能力,用RT-PCR方法检测雌激素受体α(ERα)、核转录因子p65(NF-κB p65)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA的表达。结果 EB1089可以抑制肝癌细胞株的增殖,诱导肝癌细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞的侵袭迁移。同时,EB1089增加MHCC97H细胞中ERαmRNA表达,下调NF-κB p65和MMP-9 mRNA表达。结论 EB1089可能通过ERα途径抑制肝癌细胞株的增殖、侵袭迁移能力,诱导其凋亡。

MicroRNA-21对胆管癌细胞侵袭与转移的影响

目的探讨microRNA-21对胆管癌QBC939细胞株侵袭转移能力的作用。方法构建合成无关序列、microRNA-21 mimics和microRNA-21 inhibitor并转染至胆管癌QBC939细胞中。实验设自然生长组(Cell)、转染无关序列组(Cell-NC)、转染microRNA-21 mimics组(Cell-21M)及转染microRNA-21 inhibitor组(Cell-21I)。运用实时定量RTPCR检测各组细胞microRNA-21的表达;通过黏附实验检测各组细胞聚集能力的变化;划痕实验、Transwell迁移观察细胞迁移能力变化,Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力变化。结果与Cell组相比,microRNA-21在Cell-NC组表达无明显差异,在Cell-21M组表达增加,在Cell-21I组表达降低。黏附实验显示:与Cell组相比,Cel-NC组细胞聚集能力无明显变化,Cell-21M组细胞聚集能力增强,Cell-21I组细胞聚集能力减弱(P<0.05);划痕实验及Transwell迁移实验示Cell-NC组细胞迁移能力无明显变化,Cell-21M组细胞迁移能力增强,Cell-21I细胞聚集能力减弱(P<0.05);Transwell侵袭实验示Cell-NC组细胞侵袭能力无明显变化,Cell-21M组细胞侵袭能力增强,Cell-21I细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。结论 microRNA-21可增强胆管癌QBC939细胞的侵袭与转移能力,提示microRNA-21可能在胆管癌的侵袭转移过程中发挥重要作用。

M2型巨噬细胞在肝癌的表达意义及与p-STAT3、STAT3的关系

目的研究M2型巨噬细胞在肝癌中的表达及临床意义及与磷酸化信号转录活化因子3(p-STAT3)、信号转录活化因子3(STAT3)的关系。方法采用免疫组织化学双染方法检测79例肝癌组织标本中M2型巨噬细胞(CD68、CD163)及单染检测p-STAT3、STAT3的表达,分析其与临床病理参数之间的关系。从健康人外周血中分离单核细胞,用白介素4(IL-4)和IL-13极化刺激成M2型巨噬细胞。分别与人肝癌细胞株SMMC7721、HepG2在Transwell小室中进行共培养48 h,未与M2型巨噬细胞共培养的肝癌细胞设置为空白对照组。Western blot法检测肝癌细胞株中p-STAT3、STAT3蛋白与空白对照组的表达差异。结果肝癌组织中M2型巨噬细胞浸润与TNM分期相关(P<0.05)。在共培养实验中,与M2型巨噬细胞共培养的SMMC7721,HepG2与实验对照组比较,细胞中p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.01),而STAT3蛋白表达无明显改变。结论 M2型巨噬细胞与肝癌恶性行为相关,可能通过上调p-STAT3的表达进而推动肝癌的发生发展。

微波消融治疗肝转移癌的临床疗效

目的探讨微波消融（MWA）治疗肝转移癌的临床疗效和影响生存率的相关因素。方法回顾性分析47例（73个结节）行MWA治疗的肝转移癌患者的临床资料。其中结肠癌肝转移16例、直肠癌肝转移9例、胃癌肝转移14例、其他部位肿瘤肝转移8例。肿瘤1.5-13.0（6.2±3.5）cm。观察完全消融（CA）率、局部复发率、再发率及生存率。采用电话或门诊随访。生存率的单因素分析采用Kaplan-Meier方法,显著性检验采用Log-rank test方法;多因素分析采用Cox比例风险回归模型方法;生存曲线采用Kaplan-Meier方法。结果判断局部疗效的CA率为89.0%,其中,结节≤3.0 cm、3.0 cm〈≤5.0 cm及〉5.0 cm组的CA率分别100.0%、92.0%和76.9%,〉5.0 cm组CA率明显低于其他两组（P〈0.05）。结节局部复发率为15.4%,其中结节≤3.0 cm、3 cm〈≤5 cm及〉5.0 cm组的结节复发率分别4.5%、13.0%和30.0%。肝内新发部位出现新转移灶的再发率为42.5%。随访时间为1-36（25.1±8.2）个月。1、2、3年的累积生存率分别为74.5%、48.9%及27.7%,中位生存期20.0个月。单因素分析结果表明,肿瘤的数目、肿瘤直径、肿瘤分化程度和肿瘤的原发部位对生存率的影响差异有统计学意义;而患者的年龄、性别和有无肝外转移对生存率的影响差异无统计学意义。Cox多因素分析结果表明,肿瘤的数目和原发肿瘤部位对生存率的影响差异有统计学意义。结论 MWA治疗对单个结节的结直肠肝转移癌的临床疗效满意,对复发或再发病例可以反复治疗,能够延长患者生存期,改善生存质量。

肝癌患者血清miR-106b的表达变化及其临床意义

目的观察肝癌患者血清miR-106b的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集47例肝癌患者、31例正常人、22例慢性肝病患者作为研究对象,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测其血清miR-106b表达水平,并比较肝癌患者血清miR-106b表达水平与临床病理特征之间的关系。应用接受者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106b用于肝癌诊断的价值。结果肝癌患者血清miR-106b表达水平较正常对照组及慢性肝病组均显著升高(P<0.01);血清miR-106b表达水平与肿瘤分化程度、脉管侵犯及TNM分期等临床病理特征显著相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示血清miR-106b区分肝癌与正常人的ROC曲线下面积(AUC)为0.868,诊断敏感度与特异度分别为87.2%、74.2%,区别肝癌与肝硬化患者时AUC为0.791,敏感度与特异度分别为72.3%、77.3%。结论 miR-106b在肝癌患者血清中表达显著上调,是潜在的肝癌诊断及预后指标。

UL16结合蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的检测UL16结合蛋白(ULBP)在胰腺癌患者中的表达及其临床意义。方法免疫组化分析ULBP在62例胰腺癌组织和62例癌旁组织的表达,ELISA法检测62例胰腺癌患者外周血中ULBP的表达和35例健康对照者中ULBP和CA19-9的表达。ROC曲线和Logistic回归分析比较ULBP和CA19-9对胰腺癌患者的诊断价值。结果ULBP1和ULBP2在胰腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(χ~2=7.352,P=0.007;χ~2=11.648,P=0.001)。s-ULBP2在胰腺癌患者外周血中的含量高于健康对照者;s-ULBP2与CA19-9联合后对胰腺癌的诊断价值高于单独CA19-9。结论ULBP1和ULBP2在胰腺癌组织中的表达升高且ULBP1的表达阳性率和胰腺癌组织的临床病理资料有关。ULBP2在胰腺癌患者外周血中的表达量高于健康对照者且ULBP2和CA19-9联合后能够提高CA19-9单独用于胰腺癌的诊断价值。

Kindlin-1在肝细胞性肝癌中的表达作用及其临床意义

目的检测黏着斑蛋白(Kindlin-1)在肝细胞性肝癌(简称肝癌)中的表达,探讨其在肝癌转移中的临床意义。方法收集58例肝癌组织和癌旁组织及7例正常肝组织,采用免疫组化染色、Western blot法和实时定量PCR(qRTPCR)法检测Kindlin-1的表达,分析Kindlin-1表达与肝癌临床病理特征之间的关系。结果免疫组化染色显示Kindlin-1主要表达在细胞质中。肝癌组织中Kindlin-1阳性表达率为55%,显著高于癌旁组织的10%和正常肝组织的0%(χ2=26.456、5.560,P<0.05)。Kindlin-1表达水平与肝癌大小和有无转移相关(χ2=7.857、4.076,P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤有无包膜、Edmondson分级、血清甲胎蛋白(AFP)水平及乙肝表面抗原(HBs Ag)等临床病理特征无明显关系。Western blot法和qRT-PCR检测结果显示肝癌组织中Kindlin-1相对含量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01)。结论 Kindlin-1在肝癌组织中的表达高于癌旁组织及正常肝组织,且与肝癌大小和有无转移相关,提示Kindlin-1可能参与了肝癌的转移,可能作为肝癌转移的预测指标之一。

FoxO3a对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究叉头框转录因子O3a(FoxO3a)对胆管癌细胞增殖及凋亡的影响。方法胆管癌细胞RBE中转染FoxO3a过表达载体,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中FoxO3a mRNA和蛋白水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果转染FoxO3a过表达载体后,RBE细胞中FoxO3a表达水平明显高于未转染的RBE细胞(P<0.05),而转染对照载体的RBE细胞中FoxO3a表达水平与未转染的细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。转染FoxO3a过表达载体后RBE细胞A值从0.73±0.12降低至0.52±0.04,细胞凋亡率从(8.36±0.68)%升高至(25.62±2.52)%,细胞中Cleaved Caspase-3水平也升高,β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白水平降低,与未转染的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FoxO3a表达上调后可以抑制胆管癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,增加Cleaved Caspase-3的活化水平,抑制Wnt信号通路激活。

CD155蛋白在胰腺癌组织和细胞系中的表达及其临床意义

目的研究CD155蛋白在胰腺导管腺癌组织和癌旁正常组织以及在胰腺癌细胞系中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测92例胰腺导管腺癌配对的石蜡包埋组织和癌旁正常组织中CD155蛋白的表达情况,并研究CD155与胰腺导管腺癌患者临床病理参数之间的关系,同时利用Western blot和qRT-PCR法检测正常胰腺细胞(HPDE6-C7)和3株胰腺癌细胞(Panc-1、BxPC-3、AsPC-1)中CD155的表达情况。结果免疫组化结果显示,CD155主要表达于胰腺导管腺癌组织的细胞膜上,CD155在胰腺导管腺癌组织中阳性表达率为65.22%(60/92),而在癌旁正常组织中阳性表达率为38.04%(35/92),两组阳性表达的差异有统计学意义(χ~2=13.60,P<0.01);CD155表达与分化程度(P<0.001)、神经浸润(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.001)均有相关性;Western blot及qRT-PCR结果显示,3株胰腺癌细胞中CD155蛋白及mRNA的表达量均高于正常胰腺细胞,其差异均有统计学意义(P<0.01)。结论CD155的表达与胰腺导管腺癌的分化程度、神经浸润及淋巴结转移均相关,CD155的检测有助于胰腺导管腺癌患者病情的严重程度的评估,同时鉴于CD155在胰腺癌细胞中的高表达,利用CD155与免疫细胞活化性受体DNAM-1结合,启动免疫细胞对胰腺癌的活化杀伤作用,为胰腺癌的免疫治疗提供新思路。

sFasL及其受体在双阴性T细胞杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义

目的探讨s Fas L(CD178)及其受体Fas(CD95,APO-1)在双阴性T细胞(DNT cell)杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义。方法采用OKT3抗体吸附法培养DNT细胞。ELISA法检测DNT细胞上清液中的s Fas L的含量。Western blot和qRT-PCR法检测3株胰腺癌细胞中Fas的表达量。免疫组化法检测60例胰腺癌组织中Fas的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果 ELISA法显示DNT细胞上清液中s Fas L含量比对照组高(t=3.00,P<0.01)。Western blot法检测Fas在3株胰腺癌细胞中均有较高表达,从低到高依次为Capan-1、BXPC-3、Panc-1。qRT-PCR法检测Fas mRNA在3株胰腺癌细胞中均有表达,从低到高依次为Capan-1、BXPC-3、Panc-1,且两两之间的差异均有统计学意义(F=211.56,P<0.05)。免疫组化法检测Fas在癌旁组织的阳性表达率高于癌组织(χ~2=8.62,P<0.05)。结论s Fas L/Fas途径可能是DNT细胞杀伤胰腺癌细胞的机制之一。

IL-6及其受体在胆管癌患者组织中的表达及临床意义

研究胆管癌患者胆管癌组织以及癌旁组织中白细胞介素(IL)-6及其受体IL-6R的表达水平及其之间的相关性,探讨二者与胆管癌临床生物学指征的关系。采用Western blot法检测40例胆管癌患者癌及其癌旁组织中IL-6及其受体的水平,分析IL-6及IL-6R与胆管癌临床生物学指征的相关性。胆管癌患者癌组织中IL-6、IL-6R表达水平较癌旁组织显著增高(P<0.05);IL-6、IL-6R胆管癌患者癌组织中的表达水平与患者肿瘤的分化程度、TNM分期、有无淋巴结转移以及临床分期和预后情况等临床生物学特征显著相关。IL-6及IL-6R很可能参与了胆管癌的发生发展,对其表达水平进行检测,有利于判断胆管癌的发生、发展和预后情况。

胰腺导管腺癌中DR5蛋白及mRNA的表达及临床意义

目的检测死亡受体5(death receptor 5,DR5)蛋白及mRNA在胰腺导管腺癌癌组织及癌旁正常组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测DR5在117例胰腺导管腺癌石蜡包埋组织和癌旁正常组织中的表达,并对DR5蛋白表达与胰腺导管腺癌临床病理特征的关系进行系统性分析。同时利用qRT-PCR及Western blot法各检测20例配对的新鲜冻存的胰腺导管腺癌癌组织和癌旁正常组织中DR5蛋白及mRNA的表达。结果免疫组化结果显示,DR5主要表达于癌旁组织细胞的细胞膜中,DR5在胰腺导管腺癌组织中的阳性率为41.02%(48/117),癌旁正常组织中的阳性率为74.36%(87/117),两组表达差异有统计学意义(P<0.001);DR5表达与分化程度(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)、神经浸润(P<0.001)以及淋巴结转移情况(P<0.05)均有明显相关性。qRT-PCR及Western blot结果显示,癌旁正常组织中DR5蛋白及mRNA的表达量均远高于胰腺导管腺癌组织,两组相比差异有统计学意义(P<0.001)。结论DR5蛋白表达与胰腺导管腺癌分化程度、TNM分期、神经浸润及淋巴结转移均相关,对其进行检测可用于评估胰腺导管腺癌患者的病情严重程度及预后。

纤维胆道镜治疗肝胆管结石的临床疗效评价

目的探讨纤维胆道镜治疗肝胆管结石效果及其合理选择。方法回顾性分析安徽医科大学附属六安医院2008-2012年300例肝胆管结石患者的资料,分析胆道镜治疗胆管结石的取石成功率、花费时间和并发症发生率。结果单纯手术组100例,结石取净率为65.00%;胆道镜组200例,术中胆道镜取净率为91.96%,术后取净率为96.60%,行胆道镜手术组取净率高于单纯手术组,差异有统计学意义(2=23.35,P<0.001),术中术后胆道镜比较差异无统计学意义(2=1.87,P=0.171);术中术后胆道镜取石时间比较差异无统计学意义(t=0.67,P=0.263);术中术后胆道镜并发症发生率比较差异无统计学意义(2=0.61,P=0.434)。结论胆道镜的应用提高了取石成功率,术中与术后胆道镜都是理想的处理结石方式,需要依据患者病情做出合理的选择,不能强调术中胆道镜的作用而轻视了术后胆道镜的作用。

微小RNA-21通过调控上皮-间充质转化对胆管癌细胞侵袭与转移的影响

目的 观察微小RNA-21（miR-21）通过调控上皮-间充质（EMT）转化进程对胆管癌细胞的侵袭转移的影响.方法 构建合成无关序列、miR-21 mimics和miR-21 inhibitor并转染到胆管癌QBC939及RBE细胞中,实验设自然生长组（Cell组）、转染无关序列组（Cell-NC组）、转染miR-21mimics组（Cell-21M组）及转染miR-21 inhibitor组（Cell-21I组）.通过实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-21在各组细胞中的表达;采用划痕实验、Transwell侵袭及迁移实验检测各组细胞侵袭力;RT-qPCR、Western blot检测EMT相关分子E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）的mRNA及蛋白表达.结果 在胆管癌QBC939和RBE细胞中,Cell组与Cell-NC组miR-21表达差异无统计学意义（P＞0.05）,Cell-21M组较Cell组表达增高,而Cell-21I组表达降低（P＜0.05）.Cell-21M组细胞侵袭迁移能力增加,Cell-21I组细胞侵袭迁移能力减弱（P＜0.05）.同时,Cell组与Cell-NC组E-cadherin、N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）,Cell-21M组较Cell组E-cadherin mRNA及蛋白表达降低,N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达增高,Cell-21I组E-cadherin mRNA及蛋白表达增高,N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白表达均降低（P＜0.05）.结论 miR-21能够诱导胆管癌细胞发生EMT转化,促进胆管癌细胞的侵袭与转移.

大鼠高转移肝癌模型的研究进展

肝细胞癌(简称肝癌)是亚、非最常见的恶性肿瘤之一。手术治疗仍然是肝癌的最有效治疗方法,但肝癌切除或肝癌肝移植术后肿瘤的复发和转移是肝癌病人预后差的主要原因,为此,建立大鼠高转移性肝癌模型对于进一步研究肝癌的复发、转移和治疗是非常重要的。

树突状细胞与免疫耐受

树突状细胞是启动免疫反应的最重要的专职抗原递呈细胞,具有刺激初始型T细胞增殖、启动机体免疫反应并决定免疫应答方向的功能。不同分化状态、不同亚型的树突状细胞诱导不同方向的免疫应答。树突状细胞表面还存在与免疫耐受有关的抗原受体如:C型外源凝集素、整合素及Fc受体。

胆道术后纤维胆道镜临床应用897例体会

传统的胆道探查术有较大的局限性，尤其是肝胆管结石术后残余结石率可高达30％，纤维胆道镜术中及术后的广泛使用，明显地降低了手术残石率和提高了术后残余结石的取尽率［1］。为探讨该手术的临床应用价值，现将我院2010年1月至2012年3月897例胆道术后1513例次胆道镜诊治的临床资料分析、报道如下。