WWOX基因转染对胆管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:探讨WWOX基因转染胆管癌细胞株QBC939后对其增殖、凋亡与侵袭性的影响.方法:用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞,建立稳定表达WWOX基因的细胞株.将其分为以下3组:QBC939组,QBC939/con组和QBC939/WWOX组.荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测各组WWOXmRNA和蛋白水平的表达;MTT实验检测转染前后各组细胞增殖活性的变化;FCM法检测各组细胞的凋亡;Transwell小室侵袭实验检测各组肿瘤细胞侵袭力的变化.结果:建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,WWOXmRNA和蛋白的表达增加[3.71(3.64-3.78)vs1.00(0.98-1.02),1.07(1.02-1.13);0.86±0.03vs0.25±0.01,0.27±0.02,均P<0.05],转染后的QBC939细胞MTT吸光度明显下降(0.63±0.04vs0.90±0.05,0.87±0.04,均P<0.01),FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高(21.4%±2.35%vs1.24%±0.35%,1.73%±0.48%,均P<0.01),侵袭实验显示转移至下室滤膜的细胞数明显减少(70.00±4.58vs102.33±8.33,107.00±9.00,均P<0.01).结论:WWOX基因能抑制胆管癌细胞株QBC939的增殖,加速肿瘤细胞凋亡并降低其侵袭力,可能作为胆管癌基因治疗的一个新靶点.

大鼠诱发性肝癌模型中血管生成拟态现象观察

目的观察在大鼠诱发性肝癌中有无血管生成拟态(VM)现象,并研究其与肝癌分化程度、侵袭转移的相关性。方法建立二乙基亚硝胺(DEN)和N-亚硝基吗啉(NMOR)联合诱导的具有转移潜能的♂SD大鼠肝癌模型,应用HE染色、免疫组化、透射电子显微镜等手段描述VM现象。结果成功构建了具有肝内转移播散的♂SD大鼠诱发性肝癌动物模型,在肝癌模型标本中观察到VM现象。分化级别低的肝癌组织比分化级别高的肝癌组织中VM现象多见,两组阳性率分别为61.3%、8.3%,差异有统计学意义(χ2=9.752,P<0.05);在有肝内播散转移的肝癌组织标本中VM现象较无转移的肝癌组织标本多见,VM阳性率分别为60.7%、2.0%,差异有统计学意义(χ2=6.508,P<0.05)。结论在DEN联合NMOR诱导的♂SD大鼠肝癌模型中存在VM现象,该现象与诱发性肝癌分化程度、肝内侵袭转移相关。

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因（WWOX）表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制。方法用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞；采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达；流式细胞仪（FCM）法检测转染前后各细胞凋亡率的变化；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψm）变化；荧光定量RT—PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化；将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤，TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡。结果建立了稳定表达WWOX基因的QBC939／WWOX细胞株，mRNA及蛋白表达明显增加。FCM显示QBC939／WWOX组的细胞凋亡率明显增高[（1．24±0．35）％比（1．73±0．48）％比（21．40±2．35）％，P〈0．01]，JC-1显示转染组的线粒体膜电位下降[（4．27±0．64）％比（4．96±0．52）％比（28．60±3．94）％，P〈0．01]，bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低（P〈0．05）。转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢（P〈0．05），TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为（13．6±1．5）％，较对照组明显增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡，其机制可能与下调bcl-2的表达，激活线粒体凋亡通路有关。