琼脂—磷灰石仿生纳米复合材料修复兔胫骨缺损的实验研究

目的研究我们合成的新型琼脂—磷灰石(AG-HA)仿生纳米复合材料修复骨缺损的效果。方法通过在兔胫骨做腔隙性骨缺损植入新型AG-HA仿生纳米复合材料与空白对照组做对比,并通过X射线放射学检查和组织学检查来评价这种新型硬组织修复材料促进骨缺损修复的效果。结果X线片显示,随着时间延长实验组骨缺损骨痂增多,12周基本愈合,塑形完成;对照组未见骨性修复,形成骨不连;组织学观察实验组术后4周材料开始吸收,8周后降解被新生骨取代,12周完全修复;对照组各时间点均由纤维组织充填。结论新型AG-HA仿生纳米复合材料能有效促进临界性骨缺损的修复,为临床治疗提供新的思路。

共表达OPG与bFGF的复制缺陷型腺病毒修复牙槽骨缺损的实验研究

目的探讨以骨保护素(OPG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)为外源基因,构建双表达重组腺病毒载体,结合胶原膜促进牙槽骨骨缺损修复,为牙周病治疗提供新方法和新思路。方法在6只犬下颌两侧的第3、4前磨牙根分叉造牙槽骨缺损,每只犬的一侧为实验组,另一侧为材料对照组或空白对照组。实验组:翻瓣造牙槽骨缺损,置胶原膜并滴加重组腺病毒,缝合龈瓣,局部注射腺病毒;材料对照组:翻瓣造牙槽骨缺损,置胶原膜,缝合龈瓣;空白对照组:翻瓣造牙槽骨缺损,直接缝合。手术后通过影像学和组织学方法观察骨缺损的再生情况。结果术后6周,实验组骨缺损区有新骨形成,新生骨充满缺损区;材料对照组骨缺损区有新骨形成,新生骨钙化程度较低;空白对照组骨缺损区基本没有新生骨形成,骨小梁稀疏,主要为疏松结缔组织。术后12周,实验组骨缺损区新生骨量明显增加,新生牙槽骨已充满根分叉区,骨小梁致密;材料对照组骨缺损区新生骨量明显增加,但未达到根分叉顶,骨缺损区有大量新生牙槽骨但未充满根分叉区;空白对照组结果与术后6周类似。结论以OPG和bFGF为外源基因的双表达重组腺病毒可促进犬牙槽骨缺损的修复。

富血小板纤维在口腔医学的研究进展

富血小板纤维(platelet-rich fibrin,PRF)是第二代血小板浓聚物,富含血小板、白细胞及各种细胞因子,能促进骨组织再生和软组织愈合。本文就PRF的制备、成分和结构、体外研究、动物研究、与PRP的比较以及在口腔医学的临床应用等方面的研究进展作一综述。

共表达骨保护素和碱性成纤维细胞生长因子的重组腺病毒对牙槽骨缺损修复的实验研究

目的以含有骨保护素(OPG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的共表达重组腺病毒感染牙龈及牙周膜成纤维细胞,观察OPG与bFGF表达的情况;以重组腺病毒结合胶原膜置入犬牙槽骨缺损处,观察其对牙槽骨缺损修复的影响。方法培养牙龈及牙周膜成纤维细胞,感染重组腺病毒,运用Western blot、RT-PCR分别检测2种细胞中OPG及bFGF的表达,并以正常培养的牙龈及牙周膜成纤维细胞作为对照组。制造犬下颌前磨牙根分叉处牙槽骨缺损模型,右侧作为空白对照组(n=2)和材料对照组(n=4),左侧作为实验组(n=6),光镜观察骨缺损处牙槽骨新生情况,免疫组织化学方法检测OPG和bFGF在犬牙周组织中的表达。结果细胞培养结果显示,感染重组腺病毒的牙龈和牙周膜成纤维细胞,OPG及bFGF的表达在蛋白和基因水平上均明显高于正常对照组;动物实验结果显示,实验组骨缺损处有多量新生牙槽骨生长,其OPG和bFGF较材料对照组和空白对照组均有较强的表达。结论 OPG和bFGF共表达的重组腺病毒可提高牙龈及牙周膜成纤维细胞OPG和bFGF的表达,对牙槽骨缺损修复起促进作用。

骨保护素基因修饰联合细胞移植技术促进牙周组织再生的实验研究

目的观察骨保护素(OPG)基因修饰的自体骨髓基质细胞(BMSCs)联合细胞移植技术促进Beagle犬牙周组织再生的情况,为探索基因治疗牙周病提供依据。方法将真核分泌表达穿梭载体pSecTag2/B-opg瞬时转染第3代自体犬BMSCs后,采用免疫化学和Westernblot的方法检测OPG蛋白的表达,倒置相差显微镜和扫描电镜观察转染后的BMSCsOPG在聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)支架上的黏附、聚集情况。选用4只成年Beagle犬,将其下颌双侧第2、3、4前磨牙作为实验牙,在每颗牙的颊侧构建牙槽骨缺损4mm×4mm×3mm,并随机分为4组,即BMSCsOPG-PLGA(转染后细胞复合支架组)、BMSCs-PLGA(未转染细胞复合支架组)、PLGA(支架对照组)、空白对照组。术后6周处死动物,组织学观察,测量新生牙槽骨(NB)、新生牙骨质高度(NC)、新生结缔组织的附着(CT)量。测量结果以SPSS15.0软件包进行q检验。结果免疫细胞化学和Westernblot鉴定结果证实,转染细胞内有OPG蛋白的高表达。扫描电镜显示BMSCs可以在材料表面、孔洞中良好地黏附、迁移,术后6周组织学观察可见转染后细胞复合支架组新生牙槽骨接近正常骨结构;未转染细胞复合支架组可见少量新生牙槽骨,胶原纤维丰富;支架对照组和空白对照组无明显硬组织形成。新生组织测量结果显示:转染后细胞复合支架组NB、NC、CT较对照组均显著增加(P<0.05)。结论 BMSCsOPG-PLGA细胞支架复合物联合细胞移植技术能显著促进犬牙周缺损的组织再生,为基因治疗联合组织工程治疗牙周缺损提供可能性。

饮酒与口腔癌发生相关的可能机制研究进展

口腔和口咽癌是人类第六大常见的癌症．全球每年约有300000新增病例．约90％的口腔癌属于鳞状细胞癌，男性发病率高于女性。在美国．口腔癌占所有癌症的2．3％左右．5年生存率相对较低。由于全球各地如吸烟、饮酒、咀嚼槟榔等致癌危险因素的不同．其发病率也不相同。

新型抗菌纳米复合HA-Gel骨修复材料的仿生合成及细胞相容性研究

目的:制备一种新型的抗菌纳米复合骨修复材料,并评价其细胞相容性。方法:将一定量的羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)、米诺环素(minocycline,M)的盐酸溶液加入明胶(gelatin,Gel)水溶液中,调整反应体系的pH值至7～8,获得含有抗菌药物米诺环素的明胶-羟基磷灰石纳米复合水胶体。复合材料与骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)共同培养,观察细胞的黏附、生长。结果:纳米级、低结晶度的HA均匀地分布于Gel中。复合材料具有类骨的微孔结构,可促进骨髓基质干细胞黏附、增殖、分化。结论:复合材料具有良好的细胞相容性,是一种颇有前途的骨组织修复材料。

新型HA-PEC纳米复合骨修复材料的研制及细胞相容性研究

目的:制备一种新型的HA-PEC纳米复合骨组织缺损修复材料,并评价其细胞相容性。方法:将含有Ca、P离子(Ca/P的摩尔比为1.67,Ca^(2+)的终浓度为6 mmol/L)的酸性壳聚糖(chitosan,CS)溶液滴加入磷酸化壳聚糖(phosphorylated chitosan,PCS)溶液中,控制反应条件,获得由羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)和壳聚糖-磷酸化壳聚糖聚电解质复合物(polyelectrolyte complex,PEC)共同组成的HA-PEC微粒。HA-PEC复合物与成骨细胞共同培养,观察细胞黏附、生长的情况。结果:纳米级的、低结晶度的HA均匀地分布在PEC纤维中,"HA-PEC微粒"具有类骨的微孔结构,可促进成骨细胞黏附、增殖、分化。结论:"HA-PEC"纳米复合材料具有良好的生物相容性和降解性,有望成为一种有前途的新型骨组织修复材料。

骨组织修复材料仿生合成的研究现状

骨组织修复材料的分子仿生设计合成目前还处于初期阶段,理想的有机基质模板的分子结构和组装方式及理想的矿化方式还有待研究。研究新型的骨修复材料一直是口腔医学、临床医学的迫切要求。本文综述了分子仿生的原理及骨组织修复材料仿生合成的几种方法,着重介绍了以生物大分子及其衍生物为模板进行复合材料的仿生合成,为新一代生物材料的研发提供参考。

HIF-1α促进BMSCs成骨及成血管作用的体内外研究

目的:运用基因工程技术,检测HIF-1α基因诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体内、外向成血管和成骨方向分化的作用。方法:(1)HIF-1α基因突变后,应用Lentivirus构建Lenti-LacZ、Lenti-WT、Lenti-MT。(2)分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染BMSCs,检测①细胞转染效率;②目的基因在mRNA及蛋白水平的表达;③目的基因在BMSCs细胞内的定位。(3)BMSCs成功转染目的基因后,分别在特定时间点提取总RNA和蛋白,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因对BMSCs成血管和成骨因子表达的调控作用。(4)行碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)和钙结节的表达检测。(5)检测生物支架材料-明胶海绵(GS)的结构、形态及细胞附着情况。(6)建立F344大鼠颅骨双侧直径5 mm的标准骨缺损模型,分别将细胞复合支架材料植入骨缺损区。术后8周取材,行Microfil灌注,观察血管形成,通过大体标本观察、X线及Micro-CT检查、组织学和形态学检测等观察骨修复情况,采用SPSS10.0软件包对结果进行单因素方差分析,评价修复效果。结果:当感染复数(MOI)=15时,BMSCs的转染效率最高。免疫荧光检测表明,目的基因在BMSCs细胞核内。体外常氧条件下,HIF-1α能够显著上调BMSCs的成骨和成血管因子的表达,且ALP和钙结节结果表明目的基因可诱导BMSCs骨向分化。体内实验结果显示,8周时,Lenti-WT组和Lenti-MT组对骨缺损的修复作用明显强于Lenti-LacZ组,而Lenti-MT组又优于Lenti-WT组。结论:HIF-1α基因可以显著提高BMSCs成血管和成骨活性。

碱性成纤维细胞生长因子和骨保护素的生物学作用研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能够促进成骨细胞增殖,而骨保护素(OPG)是一种破骨细胞抑制因子,两者对于骨的再生与修复具有重要作用。近年来很多研究表明bFGF与OPG不仅在人体各组织器官中有大量表达,而且在口腔牙周组织也同样有所表达,并且有实验结果表明,OPG和bFGF的联合应用可促进犬牙槽骨缺损修复。现就bFGF和OPG的生物学特性及其作用予以综述。

调控蛋白CDK1对口腔鳞癌预后的评价

目的:研究细胞周期调控蛋白1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)的表达对口腔鳞癌患者预后预测的意义。方法:用SP免疫组织化学法测定77例口腔鳞癌患者CDK1蛋白的表达,并结合患者的术后复发、转移及5年生存率情况进行相关分析。结果:CDK1蛋白阳性表达与口腔鳞癌患者术后复发及淋巴转移关系密切,并有统计学意义(P<0.05);同时患者CDK1蛋白阳性组的5年生存率显著低于阴性组,两组之间有统计学意义(P<0.05),阳性组患者预后更差。结论:CDK1蛋白的表达有希望成为预测口腔鳞癌患者预后的指标之一。

干细胞因子在大鼠下颌骨缺损修复中的表达研究

目的:探讨在SD大鼠下颌骨临界性骨缺损(critical size bone defect,CSD)与自愈性骨缺损修复过程中,各时相点干细胞因子(stem cell factor,SCF)的表达情况。方法:①分别在36只SD大鼠双侧下颌骨的下颌角部制造临界性骨缺损(直径5 mm)和自愈性骨缺损(直径2 mm)模型,实验动物分为6组,在术后第1、3、5、7、14、21天分别处死;②利用免疫组织化学方法检测骨缺损区各时相点SCF的表达情况;③利用Western印迹法检测骨缺损区各时相点SCF存在与否,并进行半定量分析。结果:成功构建了大鼠双侧下颌骨的临界性骨缺损和自愈性骨缺损模型。免疫组织化学结果显示,骨缺损愈合的各时相点SCF均有较高的表达,但SCF在临界性骨缺损组各时相点的表达,均低于自愈性骨缺损组。结论:SCF在骨缺损修复中发挥重要的作用。

Gel-HA-M纳米复合骨修复材料的抗菌性研究

目的:观察新型纳米复合骨修复材料明胶-羟基磷灰石-米诺环素复合物(Gel-HA-M)的抗菌性。方法:以生理盐水作为释药介质,称取0.2 g Gel-HA-M纳米复合骨修复材料做体外缓释实验,并以不含米诺环素的Gel-HA作为对照组。取第1、3、5、7、14、21、26、30天的缓释液,分别对牙龈卟啉单孢菌(Pg)和金黄色葡萄球菌进行体外抑菌实验,以此观察Gel-HA-M纳米复合骨修复材料的抗菌性。结果:Gel-HA-M纳米复合物具有抗菌性,并在第30天时仍具有抗菌性,能够抑制细菌生长。结论:Gel-HA-M纳米复合物能够较长时间地持续缓释米诺环素,对于Pg和金黄色葡萄球菌均具有良好的抑制作用。

错致咀嚼系统功能异常的表现及其研究进展

现代社会错已成为咀嚼系统疾病的重要致病因素。干扰、早接触、形态异常等是临床上常见的错牙合形式,其临床表现常作为帮助诊断和评价口腔颌面部疾病的手段。错可引起异常的下颌运动型,亦常致颞下颌关节和咀嚼肌活动异常,从而导致咀嚼系统无法行使正常的功能活动。现就错对咀嚼系统各组成部分的影响予以综述。

肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤干细胞(CSC)理论认为肿瘤组织内有一小群细胞具有与干细胞类似的生物学特性,这一小部分细胞被认为是肿瘤发生、扩散、复发过程中的根源。CSC细胞膜上表达的ABC转运蛋白以及CSC生长的微环境都使其对化疗和放疗相对不敏感,并且CSC具有多条自我更新的信号通路。因而,ABCG2的耐药性、CSC生长的微环境和肿瘤细胞的信号通路等都是肿瘤治疗的新靶点。现就CSC的来源、生物学特性以及它们与肿瘤的耐药性转移和治疗间的关系进行综述。

成年腭裂患者颅面形态的X线头影测量研究

采用X线头影测量的方法对60例成年腭裂患者进行颅颌面部软硬组织测量,并与60例正常成人进行对照。结果发现,与对照组比较,硬组织方面腭裂患者SNA(上牙槽座角)、N-A-Po(颌凸角)和ANS-Ptm(上颌长)等结果偏小,差异有统计学意义(P<0.01);而软组织方面腭裂患者G-Sn-Po'(面型角)、ULP(上唇突度)减少,差异有统计学意义(P<0.01)。表明硬组织方面腭裂患者的上颌骨存在明显的发育不足、硬腭长度过短、下颌颏部前伸现象明显,下颌骨向下旋转及后退。而软组织方面腭裂患者面中1/3凹陷明显,上唇突度不足。

单侧后牙反对口颌系统的影响及其研究进展

单侧后牙反是一种临床常见的错畸形,单侧后牙反患者在下颌的闭口运动中,常由于存在干扰及没有适当的牙尖引导,使下颌发生侧向移动,可能引起颞下颌关节、颌骨肌肉等方面的功能紊乱,从而影响口颌系统的健康。现就单侧后牙反这一错畸形对下颌骨、颞下颌关节和咀嚼肌的影响及其研究进展进行综述。

点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究

目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用。方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-1α)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组Lenti-LacZ。分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21 d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控。将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14 d和21 d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达。采用SPSS10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90%以上。目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P<0.05)。ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化。结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性。

P2X2/3受体在大鼠眶下神经慢性压迫性损伤中表达水平的动态变化

目的探讨P2X2/3受体在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)神经元内表达的动态变化及其作用。方法采用行为学观察、HE染色评价慢性压迫性损伤大鼠眶下神经模型造模结果,免疫组化方法测定每组TG神经元不同时期P2X2/3的表达情况。结果正常对照组P2X2/3在中、小直径神经元中有阳性表达;P2X2/3的表达量在手术侧组各时间段均明显高于正常对照组(P<0.05);假手术组术后早期,P2X2/3表达量明显高于对照组(P<0.05),晚期两者无明显差异;手术对侧组与假手术组相比,P2X2/3表达量在术后早期无明显差异,术后晚期明显增多(P<0.05)。结论TG神经元中P2X2/3参与了TN的诱发、痛觉传递过程,其中P2X2主要参与急性痛或炎性痛,而P2X3对急性痛及痛疼的维持都起重要作用;手术侧的痛觉神经传导对对侧TG产生了影响。