栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质

栓菌420（Trametes sp．420）漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）进行异源表达，产生两种重组漆酶：rLacDx（具有天然N-末端）和rLacDe（N-末端带有8个额外的氨基酸残基）。摇瓶发酵18d，rLacDx和rLacDe的产量分别为1．21×10^5u／L、7、38×10^4u／L[以2，2＇-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸（ABTS）为底物]。在高密度发酵条件下，rLacDx的产量增加到2．39×10^5u／L，同时其生产周期降至7．5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似，且在50℃和pH3～10的范围内均稳定。然而，rLacDx对底物ABTS的比活力（1761u／mg）高于rLacDe（1122u／mg），其表观Km值（427μmol／L）低于rLacDe（604μmol／L）。