响应面法优化纳豆菌液态发酵产抗菌物质条件的研究

本文利用豆粕水解液为基质对纳豆菌液态发酵产抗菌物质进行研究。采用Plackett-Burman的实验方法对影响纳豆菌发酵产抗菌物质的因素进行综合评价,筛选出具有显著效应的三个因素:麸皮含量、温度、初始pH;通过最陡爬坡实验接近最大响应区域;利用响应面实验进一步确定主要影响因子的最优条件:麸皮含量29.6g/L、温度33℃、初始pH7.4,在此条件下对纳豆菌发酵,△OD值为0.416,抗菌粗提液抑菌率达56.6%。

内源性营养盐调控湖泊藻类生长机制研究

在外源污染得到控制后,最能影响富营养化水体中藻类生长的是内源性营养盐。研究不同富营养化湖泊中内源性营养盐的不同比例对藻类生长机制的影响,能为解决湖泊内源性污染提供理论依据。通过室内模拟的方法,根据藻类的经验分子式,确定以磷为限制因子时的N∶P=7.2∶0.4和以氮为限制因子时的N∶P=4.6∶1来调控上覆水中的营养盐比例,进行试验。实验结果显示:温度对富营养化湖泊中藻类生长影响程度很大;内源性营养盐对富营养化湖泊的影响程度依次是:重度富营养化湖泊>中度富营养化湖泊>中营养化湖泊,磷作为限制因子比氮更能有效抑制湖泊藻类生长。

N-糖基化改造碱性果胶酶的热稳定性

在软件模拟分析的基础上,运用半理性设计转换传统去除N-糖基化的方式,同时在反向转角区引入具有增强芳香族序列(enhanced aromatic sequence,EAS)特征的新N-糖基化,提高了碱性果胶酶(alkaline polygalacturonate lyase,PGL)的热稳定性,获得了高品质的PGL工程菌。将355位点的苏氨酸突变成突变能低的色氨酸来去除353位点的N-糖基化,酶的半衰期提高了176%,但与目标值仍相距甚远;再将127和137位点同时引入新N-糖基化,使酶的半衰期达到1.35 h,与目标值接近。在酶的反向转角区引入具有EAS特征的新N-糖基化,对提高酶的热稳定性具有显著促进作用。

环六肽Thermoactinoamide A的固相合成及其抗菌活性

采用固相-液相两步法合成一种天然抗菌环肽Thermoactinoamide A。在9-芴甲氧羰基(Fmoc)固相合成的基础上,通过优化N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)的添加量,得到直链肽,收率为84%,在此基础上,采用液相环合的方法对直链肽进行环合,通过优化环合体系中混合液的配比、初始pH等条件,得到Thermoactinomide A,收率为51%,总收率43%。抑菌实验结果表明,Thermoactinoamide A对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为32μg/mL。固相合成与液相环合两步法合成步骤少、过程简单、产率较高,为进一步研究该天然产物的生物活性及构效关系奠定了基础。

靶向核磁造影剂Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2的制备及性能研究

目的制备Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2靶向造影剂,并对其弛豫性能、细胞毒性以及靶向性进行评价。方法采用F-moc固相法合成靶向双环肽E-[c(RGDfK)]_2,与螯合剂1,4,7,10-四氮环十二烷基-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)共价连接,利用配位键螯合Gd^(3+),制备核磁共振成像(MRI)造影剂Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2。并用质谱仪(ESI-MS)、核磁共振仪(NMR)对其结构进行表征,通过弛豫性能、四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、小鼠MRI造影实验对其性能进行评价。结果ESI-MS、NMR结果表明,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2合成成功,弛豫效率(k=9.551 mmol^(-1)·L·s^(-1))是商用造影剂钆特酸葡胺注射液(GdDOTA)的1.84倍;MTT实验结果显示,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2的细胞毒性低于Gd-DOTA;小鼠MRI造影实验结果显示,Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2具有靶向性并成像清晰。结论Gd-DOTA-E-[c(RGDfK)]_2是一种在生物体内稳定性好,细胞毒性低,并有靶向性能的MRI造影剂,具有研究和应用价值。