白果内酯对Aβ25-35诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的研究白果内酯对Aβ25-35诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响。方法Aβ25-35(1μmol/L)诱导HT22建立细胞损伤模型,同时白果内酯(6、12、24μmol/L)和NADPH氧化酶抑制剂(DPI,15μmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测神经元细胞凋亡率,流式法(DCFH-DA荧光探针)测定细胞内ROS生成,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞活力下降(P<0.01),神经元细胞凋亡率提高(P<0.01),同时,ROS的生成、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达均增多(P<0.01);与模型组比较,白果内酯(12、24μmol/L)组能提高细胞活力,减少ROS生成,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平与神经元细胞凋亡率(P<0.05,P<0.01),白果内酯(24μmol/L)组能抑制细胞NLRP-1、ASC及caspase-1的蛋白表达(P<0.01)。结论白果内酯对Aβ25-35诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有较好的保护作用,其机制可能与抑制NADPH氧化酶-ROS介导的NLRP-1炎症小体激活有关。

黄芪总苷对地塞米松和Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤和APP表达的影响

目的:研究黄芪总苷(AST)对地塞米松(DEX)和Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其对β淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:将对数生长期的PC12细胞接种于培养板,DEX和Aβ25-35诱导建立PC12细胞的损伤模型;采用MTT法测定PC12细胞活力;采用RT-PCR法检测PC12细胞APP、α-分泌酶、β-分泌酶mRNA的表达水平;采用western bloting法检测PC12细胞的APP蛋白表达水平。结果:MTT结果表明,与对照组比较,模型组(DEX 5μmol/L+Aβ25-351μmol/L)在作用24 h后能显著降低PC12细胞的活力(P<0.01),与模型组比较,AST(10、20 mg/L)和人参皂苷Rg1(16μmol/L)对地塞米松和Aβ25-35诱导的PC12细胞活力有一定的提高作用。RTPCR分析表明,AST(5、10、20 mg/L)和人参皂苷Rg1对地塞米松和Aβ25-35诱导的PC12细胞的β-分泌酶及APP770mRNA水平有降低作用,对α-分泌酶的mRNA水平有升高作用。westen bloting结果表明,AST(10、20 mg/L)和人参皂苷Rg1可减少PC12细胞APP的表达量。结论:黄芪总苷对地塞米松和Aβ25-35协同诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与降低β-分泌酶mRNA水平和APP表达量,升高α-分泌酶mRNA水平等有关。