多种教学法在医学免疫学教学中的灵活应用

医学免疫学作为一门基础学科,理解难度大且知识更新快,教师肩负着传道授业的重任,在平常教学中要关注各种教学方法,学习各种先进技巧与经验,灵活运用于免疫学的课堂教学中去。文章介绍了互动多媒体教学法、PBL教学、翻转课堂教学模式、CBL教学、比喻教学法以及"项目-导师制"实验教学法在课堂中的运用技巧。教学方法千变万化,但核心仍以学生为本,教师引导为辅,以提高学生自主学习能力为目的。教师在教学中可以综合运用多种教学法,汲取多种方法的优点,使学生主动学习。

结核分枝杆菌Rv3621c原核表达及免疫功能研究

目的以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv基因组为模板,构建、纯化及鉴定原核表达质粒pPROEX-Rv3621c,通过人群、小鼠试验进行免疫原性评价。方法构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并以全血干扰素释放分析技术(Whole-blood IFN-γrelease assay,WBIA)检测其能否被安徽省淮南市M.tb感染者T细胞特异性识别。rRv3621c混合佐剂MTM[母牛分枝杆菌(M.vaccae),人工合成海藻糖-6′6,二分枝菌酸(TDB),单磷酰脂质A(MPLA)]免疫小鼠后,检测血清中特异性抗体分泌水平、脾细胞中抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平及肺脏细胞因子mRNA表达水平。结果成功构建重组质粒pPROEX-Rv3621c,并使之诱导表达、纯化和鉴定。在rRv3621c蛋白诱导下,活动性结核(Active tuberculosis,ATB)患者外周血淋巴细胞释放的IFN-γ水平明显较高(t=4.813,P<0.01),且ATB患者产生的IFN-γ水平高于潜伏性结核(Latent tuberculosis infection,LTBI)人群(t=4.442,P<0.01)。BCG+Rv3621c/MTM组小鼠产生的特异性抗体滴度水平明显高于Rv3621c/MTM组(P<0.01)和BCG组(P<0.01),Rv3621c/MTM组和BCG+Rv3621c/MTM组小鼠的IgG2a/IgG1比值大于1,明显高于MTM组和BCG组。BCG+Rv3621c/MTM组小鼠均分泌高水平IFN-γ、TNF-α和IL-2。Rv3621c/MTM组小鼠肺脏组织中IFN-γ、TNF-α及iNOS表达水平较高。结论M.tb感染者外周血T细胞可特异性识别rRv3621c蛋白,rRv3621c混合佐剂MTM可以诱导较强烈的抗原特异性Th1型免疫应答。

S100P对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探究S100P对人肺癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法qRT-PCR检测人正常肺上皮细胞和4种人肺癌细胞A549、95D、H1975和LTEP-a-2中S100P的表达。将处于对数生长期的A549细胞分为两组:对照组(感染含有无意义链Plvx-shRNA2-shNC的慢病毒载体)和敲低组(感染含有Plvx-shRNA2-S100P的慢病毒载体),然后利用qRT-PCR检测A549细胞中S100P基因的水平。MTT及克隆形成实验检测敲低S100P后A549细胞的增殖能力,流式细胞术检测敲低S100P后A549细胞的凋亡水平,Western blot检测增殖相关蛋白PCNA及凋亡相关蛋白cleaved Caspase-8、Caspase-8、cleaved PARP、PARP及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白的表达情况。结果人肺癌细胞系中S100P基因的相对表达量高于人正常肺上皮细胞(P<0.01)。成功感染慢病毒后,敲低组A549细胞S100P基因的相对表达量较对照组明显降低(P<0.01)。与对照组相比,敲低组A549细胞增殖能力显著下降(P<0.01),凋亡率显著上升(P<0.01)。与对照组相比,敲低组A549细胞中PCNA的蛋白含量显著降低(P<0.01),Caspase-8和PARP的蛋白含量无明显变化,cleaved Caspase-8、cleaved PARP及PPAR-γ的蛋白含量显著增高(P<0.01)。结论S100P在肺癌细胞中表达上调,沉默S100P后可通过抑制PPAR-γ信号通路,从而抑制肺癌细胞的增殖并促进肺癌细胞的凋亡。

IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞炎性退变的细胞模型研究

目的通过IL-1β体外诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞建立退变细胞模型,并研究其作用机制。方法 10 ng/ml IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞24 h后,用cck-8法检测不同时间点IL-1β对软骨终板细胞增殖作用的影响,透射电镜观察细胞退变情况,细胞免疫荧光和Western blot检测细胞退变相关蛋白表达。结果诱导组细胞较正常组细胞增殖减慢,细胞肥大化比例增加,出现线粒体肿胀、核扭曲、染色质边集,染色质及胞质松散等细胞坏死及凋亡表现,且colⅡ、Aggrecan表达下降,colⅩ、MMP-1、MMP-3、MMP-13、TIMP-1表达增加。结论 IL-1β可诱导软骨终板细胞发生退变。

淮南市2家医院门诊患者幽门螺杆菌感染状况及耐药性分析

目的分析淮南市2家医院门诊患者幽门螺杆菌(H.pylori)的感染率及耐药性,为临床合理用药提供有价值的参考依据。方法选取安徽理工大学第一附属医院和淮南东方医院集团总院2020年10月1日至2021年5月31日胃镜检查采集的胃黏膜组织进行分离培养和药敏试验。结果共采集门诊患者102例胃组织活检标本,分离培养出H.pylori 65例,检出率63.7%;药敏试验结果显示幽门螺杆菌对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸钾、头孢克肟、庆大霉素、四环素、盐酸多西环素、阿奇霉素、克拉霉素、左氧氟沙星、司帕沙星、甲硝唑、替硝唑、利福平和呋喃唑酮耐药率分别为27.69%、13.85%、49.23%、9.23%、16.92%、12.31%、40.00%、44.61%、23.08%、38.46%、47.69%、41.54%、38.46%和7.69%。结论淮南市2所医院行胃镜检查的患者H.pylori感染率高,且对头孢克肟、阿奇霉素、克拉霉素、甲硝唑和替硝唑等药物有较高耐药率。

青蒿琥酯上调肺癌患者CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群CD39、CD279和颗粒酶B表达

目的探讨青蒿琥酯(ART)对肺癌患者T淋巴细胞免疫功能的影响。方法随机选取健康体检者15例(NC组),肺癌患者21例(LC组),收集临床信息,采集并分离外周血单个核细胞(PBMC)。用ART处理PBMC 24h后,流式细胞术(FCM)检测ART的半数杀伤浓度(LC_(50))及诱导T细胞高表达CD39和CD279的最佳浓度;最佳浓度的ART诱导后,FCM检测NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279的表达水平,以及LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279、CD38、CD28、颗粒酶B(GrzB)、穿孔素(PerF)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)的水平。结果ART的LC_(50)为522μmol/L,最佳浓度为200μmol/L。LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD279的基线表达显著高于NC组;200μmol/L ART诱导后,在NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39的表达显著升高;在LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39、CD279和GrzB的表达显著升高,IL-2表达显著降低,而CD38、CD28、IFN-γ和PerF等表达未见显著差异。促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD39的临床因素有未放疗;促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD279的因素有年龄>60岁、淋巴细胞数>1.26×10^(9)/L、中性粒细胞/淋巴细胞比率(NLR)<5、放疗、0.29×10^(9)/L≤单核细胞数≤0.95×10^(9)/L。结论肺癌患者T淋巴细胞高表达CD279;ART诱导肺癌患者CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279和GrzB的表达上调,从而调节T细胞亚群的免疫功能。

幽门螺杆菌基因多态性及其致病机制研究进展

幽门螺杆菌是一种全球范围内的慢性感染性致病菌,除导致慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等胃肠疾病外,还与慢性心血管疾病,肝脏及胆道疾病密切相关。研究表明,其基因结构多态性差异是导致不同临床表现的主要原因,近年来对Hp毒力因子及其基因多态性研究取得长足进展,本文对其主要的毒力基因多态性及可能的致病机制进行综述。

基于TGGA数据库构建肺腺癌自噬相关基因预后风险模型

目的基于TCGA数据库,结合人类自噬数据库构建预测肺腺癌患者预后的风险模型,探讨自噬相关基因预后风险模型对肺腺癌患者预后的预测性能及与免疫微环境的相关性。方法从癌症基因组图谱数据库下载肺腺癌患者临床信息和转录组数据,结合人类自噬数据库筛选出232个自噬相关基因。通过Cox回归分析筛选出4个独立与预后相关的自噬基因,并采用风险评分构建肺腺癌预后预测模型,用ROC曲线评价预测模型性能。使用ESTIMATE和CIBERSORT在线网站(https://cibersort.stanford.edu/)探索风险评分与肿瘤免疫微环境之间的关系。结果肺腺癌中有30个差异表达的自噬相关基因,其中4个自噬基因(BIRC5、ERO1A、ITGB4、NLRC4)具有预测患者预后的功能。依据风险评分进行分组,Kaplan-Meier分析表明高风险组生存率低于低风险组(P<0.0001)。ROC曲线表明风险评分模型判断肺腺癌预后的准确性(AUC=0.757)。ESTIMATE和CIBERSORT分析提示风险评分模型与肿瘤微环境中的多个免疫细胞亚群浸润相关。结论自噬相关基因预后风险模型较临床数据能更好地预测肺腺癌患者预后。在高风险组中,CD4+记忆静止细胞可改善肺腺癌患者预后。

论发展基础与临床医学桥梁之转化医学的重要性

近年来,基础医学作为现代医学的基础,是研究生命和疾病的本质及其规律的自然科学,其使临床科目变得更易理解并有助于医学生提高临床技能。因此,基础医学发展越来越受到重视,其在临床医学中的作用也被广泛探讨。该文针对基础医学在临床医学中的作用提出了自己的见解并阐述了两者之间的桥梁——转化医学的重要性。

结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究

目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组(PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组),皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者[如rRv1988刺激值为(1118±70.53)pg/ml和(207.1±31.58)pg/ml,t=10.21,P<0.01]。经BCG初免后以rRv1988蛋白联合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,诱导产生高水平的特异性IgG抗体及其亚类(F=755.1、326.5和193.1,均P<0.01),IgG2a/IgG1趋向Th1型应答;同时诱导小鼠脾淋巴细胞产生高水平的IFN-γ和TNF-α(F=58.71和131.2,均P<0.05),而IL-2在BCG+rRv1988/DMT组、rRv1988/DMT组和BCG组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论原核表达了rRv1988蛋白,该蛋白能被Mtb感染者的T细胞所识别,并可引发机体产生特异性Th1型细胞免疫应答,表明rRv1988蛋白具有免疫原性,为结核病疫苗的研制奠定了基础。

结核病免疫学检测方法的研究进展

本文以结核病的感染现状和免疫学检测方法为背景,具体分析了结核菌素皮肤试验、抗体检测法、抗原检测法、免疫细胞及细胞因子检测等免疫学方法的原理、背景和国内外部分研究的进展以及优缺点,期待为结核病检测提供更丰富准确的理论依据。

结核分枝杆菌Rv0033的原核表达及其免疫原性研究

目的表达重组结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0033,并观察其免疫原性,为结核病(Tuberculosis,TB)新型疫苗的研发筛选优势靶抗原。方法构建重组载体pET30b-Rv0033并表达重组Rv0033。以全血干扰素释放技术(Whole blood IFN-γrelease assay,WBIA)检测M.tb感染者的T细胞是否特异性识别重组载体pET30b-Rv0033。取纯化的rRv0033混合佐剂DMT后免疫小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体IgG、IgG1及IgG2a水平,并计算IgG2a/IgG1比值;同时检测小鼠脾细胞中特异性IFN-γ、TNF-α、IL-2水平。结果成功构建原核表达载体pET30b-Rv0033,重组Rv0033的诱导表达、纯化和鉴定结果均符合预期。人群外周血淋巴细胞经rRv0033蛋白刺激后,非典型结核(Atypical tuberculosis,ATB)及潜伏性结核感染(Latent tuberculosis infection,LTBI)受试者IFN-γ水平显著高于健康对照人群(P<0.01);ATB受试者IFN-γ水平显著高于LTBI受试者(P<0.05)。BCG+Rv0033/DMT免疫小鼠产生的特异性抗体(IgG、IgG1和IgG2a)滴度水平显著高于Rv0033/DMT组和BCG组(均P<0.01);Rv0033/DMT组和BCG+Rv0033/DMT组小鼠的IgG2a/IgG1比值显著高于DMT组和BCG组,且>1,提示rRv0033可诱导以Th1细胞免疫应答为主的免疫应答。接受PPD刺激或rRv0033蛋白刺激的BCG+Rv0033/DMT组小鼠IFN-γ、TNF-α及IL-2水平较高,其次分别是BCG组、Rv0033/DMT组、DMT组,PBS组水平较低,且rRv0033蛋白混合DMT佐剂组高于单纯DMT佐剂组(P<0.05)。结论制备的rRv0033蛋白可被M.tb感染者外周血T细胞特异性识别,联合佐剂DMT免疫小鼠能够诱导高水平的抗原特异性Th1型免疫应答,可能与rRv0033蛋白提供的免疫保护力密切相关。

2009—2021年中国九省份发热呼吸道症候群监测病例中常见病毒感染情况分析

目的了解我国九省份发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中常见病毒感染情况。方法研究资料来源于中国疾病预防控制中心"传染病监测技术平台信息管理系统"中九省份(安徽、北京、广东、河北、湖南、吉林、山东、陕西和新疆)2009年1月至2021年6月间的FRS病例监测数据,最终将具有8种病毒[人流感病毒(HIFV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)、人腺病毒(HAdV)、人副流感病毒(HPIV)、人鼻病毒(HRV)、人偏肺病毒(HMPV)、人冠状病毒(HCoV)以及人博卡病毒(HBoV)]核酸检测结果的8 243例FRS监测病例纳入研究。采用χ2检验/Fisher确切概率法分析不同年龄组、不同地区和不同季节病例的病毒检出率差异。结果 8 243例FRS病例年龄M(Q1,Q3)为4(1,18)岁,<5岁以下儿童占56.56%(4 662例);男性占58.1%(4 792例);病例主要来源于门、急诊病例和住院病例,其中门急诊病例数为2 043例,住院病例数为6 200例。FRS病例的病毒检出率从高到低依次为HRSV、HIFV、HPIV、HRV、HAdV、HMPV、HCoV和HBoV。有524例病例同时检出两种及两种以上病毒,占病毒检测阳性病例数的15.66%。不同年龄组中病毒检出率的差异具有统计学意义(均P<0.05),<5岁以下儿童的病毒检出率较高(49.96%)。南方任一病毒阳性检出率高于北方(P<0.001)。FRS病毒阳性病例全年均有检出,HRSV检出率在秋、冬季较高,HIFV检出率在冬季较高,HMPV检出率在冬、春季较高;而HPIV、HRV、HCoV和HBoV的检出率在夏、秋季节较高,而HAdV在不同季节检出率的差异无统计学意义。与2009—2019年相比,2020—2021年的任一病毒阳性检出率有所下降,由原来的41.37%下降至37.86%;HIFV检出率由原来的10.62%急剧下降至1.37%;HPIV检出率由原来的8.24%下降至5.88%。而HRV和HBoV的检出率则由原来的5.43%和1.79%,分别上升至9.67%和3.19%。结论 2009—2021年中国九省份FRS病例以HRSV和HIFV感染较为常见,8种常见呼吸道病毒的流行特征存在年龄、地区和季节差异。

2009年至2021年我国9省份发热呼吸道症候群病例中人偏肺病毒感染情况及流行特征分析

目的阐明我国发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中人偏肺病毒(HMPV)感染情况及病毒流行特征,为我国HMPV引起呼吸道相关疾病的临床诊治和疾病防控提供重要基线数据。方法选取2009年1月至2021年6月在我国9省份(北京、河北、吉林、山东、陕西、新疆、安徽、广东、湖南)的FRS监测病例作为研究对象。收集病例临床、流行病学信息并采集呼吸道标本,应用实时荧光定量PCR对样本进行HMPV核酸检测。结果共11660例样本进行了HMPV检测,HMPV阳性病例数为296例,阳性检出率为2.54%。其中218例病例为单一HMPV感染,78例病例同时检出了含HMPV 2种或2种以上病毒,占HMPV阳性病例数的26.35%。<5岁儿童是HMPV主要发病人群,检出率为3.10%。在<5岁儿童中,含HMPV混合感染中肺炎病例的比例高于单一HMPV感染病例。HMPV全年均可检出,病毒流行主要以冬、春季为主,3月份是HMPV流行高峰。结论HMPV是引起儿童急性呼吸道感染的重要病原之一,病毒流行具有明显的季节性。HMPV可引起单独感染,也可与其他呼吸道病毒合并感染,合并HMPV感染可能增加儿童肺炎的风险。

我国人副流感病毒3型HN基因的遗传变异及进化特征分析

目的基于血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因分析我国流行人副流感病毒3型(human parainfluenza virus 3,HPIV3)的基因变异规律和进化特征。方法采用多重荧光PCR方法对2007—2020年5个省市(北京、浙江、安徽、河南、湖南)急性呼吸道感染病例的咽拭子标本进行常见病原体核酸筛查,对HPIV3阳性标本进行HN基因序列测定,与GenBank数据库的国外和我国10个省的HPIV3流行代表株HN基因序列进行比对,应用多种生物信息学方法开展分子进化分析。结果本研究期间从5个省市共获得49株HPIV3的HN基因序列,核苷酸同源性在96.6%~100%之间,其中48株为C3基因亚型,1株为C5基因亚型。系统进化分析显示,我国12个省市在2003—2020年间存在C1、C3和C5基因亚型的毒株共流行,毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.4%~99.8%和97.9%~100%,其中C3是我国的优势流行基因亚型,分属于C3a、C3b、C3c、C3e和C3f进化分支,以C3f的传播范围和流行时间最为广泛。对C3基因亚型的进化分析显示,其最近共同祖先形成时间(tMRCA)可追溯到1990年,有效群体规模在2002—2010年间逐渐扩张而后趋于平稳;C3各进化分支HPIV3的HN基因进化速率在3.69×10^(-4)~5.82×10^(-4)替换/位点/年之间;C3基因亚型毒株HN蛋白共享N308、N351、N485和N523潜在N-糖基化位点,选择压力以负向选择为主。结论C3基因亚型是我国的本土优势HPIV3流行型别,形成了广泛传播和持续流行态势,并在流行过程中形成多个进化分支共同循环。

溶瘤病毒的抗肿瘤机制及其在临床应用中的研究进展

溶瘤病毒疗法是指通过溶瘤病毒靶向肿瘤细胞,在细胞内大量复制病毒导致细胞裂解;裂解后释放的病毒分子及相关细胞因子刺激机体产生免疫反应进一步杀伤肿瘤细胞的一种肿瘤治疗手段。溶瘤病毒抗肿瘤的关键在于靶向肿瘤作用和杀伤肿瘤作用。近期,用分子生物技术对野生病毒株进行优化改造的研究旨在使其具有更强的溶瘤效应和更低的不良反应,作为抗肿瘤药物进入临床治疗。本文将就溶瘤病毒的研究发展、作用机制和临床应用等多个方面,对这一新的肿瘤治疗手段作一综述。

新型结核疫苗的研究进展

结核病(TB)仍然是世界上最致命的传染病之一,其发病率持续增高。如何对结核病进行有效的预防成了现在面临的主要问题。而目前广泛使用的卡介苗(BCG)疫苗仅对结核病提供有限的保护,特别是对成人型结核病起作用与否存有较大争议,因此新型的结核疫苗便成为抗结核的有利举措。本文把15个处于临床实验阶段的新型候选疫苗,按照免疫策略将其分为代替卡介苗的初选疫苗,BCG初免后的增强疫苗和预防感染者发病的治疗性疫苗加以综述,以期为防治结核病提供参考。