肺腺癌预后代谢相关基因的生物信息学分析

目的基于代谢基因的生物信息学构建肺腺癌预后模型及验证。方法获取癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达数据集(GEO)肺腺癌相关数据,套索(LASSO)回归构建多基因预后模型并计算风险值(RS)。单因素、多因素Cox独立预后分析,通过受试者工作特征(ROC)曲线评价模型的ROC曲线下面积(AUC)并进行生存分析。构建列线图评价模型的可行性,通过基因集富集分析(GSEA)进行代谢基因功能富集分析。肿瘤免疫评估资源(TIMER)数据库分析患者RS与免疫细胞浸润以及与免疫检查点分子表达的相关性。结果运用TCGA数据库基于18个代谢相关基因构建肺腺癌预后模型,RS可以作为独立的预后因子。ROC曲线下面积为0.713。生存分析显示,与高风险组相比,低风险组总体生存率更高,预后模型与免疫细胞的浸润以及与免疫检查点分子的表达有关。结论代谢相关基因肺腺癌预后模型的RS是独立预后因子,模型具有较高的预后判断价值。

白细胞介素4的研究进展

白细胞介素4(IL-4)主要是活化T细胞产生的,来源于多种细胞的细胞因子。IL-4对人体多种细胞具有生物学转化作用,IL-4与效应细胞表面IL-4Rα结合,促进靶基因转录,其生物学信号转导主要通过JAK-STAT通路、Ras-ERK通路、PI3K-PKB通路三种途径。IL-4对肿瘤、过敏性疾病、类风湿关节炎、造血干细胞移植、妊娠、再生障碍性贫血、缺血性心脏病、疫苗免疫等疾病具有多重生物学功能和治疗作用。

pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用

目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。

青蒿琥酯上调肺癌患者CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚群CD39、CD279和颗粒酶B表达

目的探讨青蒿琥酯(ART)对肺癌患者T淋巴细胞免疫功能的影响。方法随机选取健康体检者15例(NC组),肺癌患者21例(LC组),收集临床信息,采集并分离外周血单个核细胞(PBMC)。用ART处理PBMC 24h后,流式细胞术(FCM)检测ART的半数杀伤浓度(LC_(50))及诱导T细胞高表达CD39和CD279的最佳浓度;最佳浓度的ART诱导后,FCM检测NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279的表达水平,以及LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279、CD38、CD28、颗粒酶B(GrzB)、穿孔素(PerF)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)的水平。结果ART的LC_(50)为522μmol/L,最佳浓度为200μmol/L。LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD279的基线表达显著高于NC组;200μmol/L ART诱导后,在NC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39的表达显著升高;在LC组CD8^(+)和CD4^(+)T细胞中,CD39、CD279和GrzB的表达显著升高,IL-2表达显著降低,而CD38、CD28、IFN-γ和PerF等表达未见显著差异。促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD39的临床因素有未放疗;促进ART诱导CD8^(+)T细胞表达CD279的因素有年龄>60岁、淋巴细胞数>1.26×10^(9)/L、中性粒细胞/淋巴细胞比率(NLR)<5、放疗、0.29×10^(9)/L≤单核细胞数≤0.95×10^(9)/L。结论肺癌患者T淋巴细胞高表达CD279;ART诱导肺癌患者CD8^(+)和CD4^(+)T细胞CD39、CD279和GrzB的表达上调,从而调节T细胞亚群的免疫功能。

肝癌患者外周血CD25及其mRNA表达

目的探讨肝癌患者外周血CD25及其m RNA表达。方法采用生物素-链霉亲和素(BSA)法检测患者外周血CD25水平,Real-time检测患者外周血CD25 m RNA含量。以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为参照,以lgc DNA/lg GAPDH比值代表m RNA水平。结果肝癌患者外周血植物血凝素(PHA)诱导前后CD25表达水平分别为(2.54±1.15)%和(24.39±3.00)%,其m RNA表达水平分别为(1.56±0.24)lgc DNA/lg GAPDH和(2.93±0.43)lgc DNA/lg GAPDH,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);巨块型、结节型、弥漫型肝癌患者外周血CD25及其m RNA表达类似,差异无统计学意义(P>0.05)。18例患者以CIK(cytokine-induced killer)细胞治疗后,其静息期和诱导期CD25、CD25m RNA表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌患者细胞免疫功能明显低下,外周血CD25及其m RNA水平降低。CD25及其m RNA表达与病理分型无关,CD25似可作为观察患者细胞免疫功能和评估疗效的辅助指标。CIK细胞可明显上调肝癌患者外周血CD25表达。

外周血中3种标记的Tregs细胞表达频率比较

目的 :分析CD4+CD25High、CD4+CD25+CD127Low/–、CD4+CD25+Fox P3+3种标记的Tregs细胞比例的相关性,探讨不同荧光素组合标记Tregs细胞的鉴定效果。方法:随机抽取健康体检者60例,平均分成2组(Ⅰ组、Ⅱ组),Ⅰ组用CD25-APC/CD127-PE/CD4-FITC三色抗体标记,Ⅱ组用CD25-PE/CD127-Alexa Fluor禄R647/CD4-Per CP-Cy5.5标记;另选Ⅰ组10例,用CD25-FITC/Fox P3-PE/CD4-Per CP-Cy5.5/CD127-Alexa Fluor禄R647四色抗体标记;流式细胞仪检测,Cell Quest软件分析,比较Tregs细胞结果差异,分析Fox P3+与CD127Low/–的相关性。结果:CD25+CD127Low/–Tregs细胞Ⅱ组(7.89±1.37)%明显高于Ⅰ组(6.37±1.83)%(P=0.001),2组中CD4+CD25High和CD4+CD25+CD127Low/–的相关系数(r)分别是0.944、0.916;(94.08±1.93)%的CD25+Fox P3+细胞低表达CD127,CD25+Fox P3+和全血检测CD25+CD127Low/–的Tregs细胞有较高的相关性(r=0.846),结果差异不明显(P=0.774)。结论:CD25+CD127Low/–是Tregs细胞特异性标志,适合临床应用。全血检测Tregs细胞,用CD25-APC、CD127-PE、CD4-FITC荧光素组合检测结果与Fox P3相关度高。

自噬在结核病中的研究进展

1963年,著名的细胞生物学家和生物化学家Christian De Duve提出了自噬（autophagy）这一概念,用来描述细胞内容物由囊泡包裹被送入溶酶体的过程。挪威生物化学家Per Ottar Seglen在20世纪80年代时发现氨基酸及很多激酶抑制剂能够抑制自噬发生并且细胞营养状态可以影响自噬。

pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化

目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。