匹多莫德抑制地塞米松诱导的小鼠隐性弓形虫感染的活化

目的观察匹多莫德(PT)对经地塞米松(Dem)诱导小鼠隐性弓形虫感染活化的抑制作用。方法96只BALB/c小鼠每鼠灌胃感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,感染后4周随机均分为3组:Dem组(A组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃生理盐水200μl;Dem+PT组(B组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃匹多莫德100 mg/(kg·d);对照组(C组)腹腔注射生理盐水200μl,同时灌胃生理盐水200μl。上述药物使用时均溶于200μl生理盐水中。3组小鼠均连续注射和灌胃5周。自治疗开始后每周各组随机处死3只小鼠,取小鼠眼窦血、脑组织和脾组织备用。荧光定量PCR检测小鼠虫血症出现时间,以及脑组织虫荷和弓形虫DNA拷贝数。流式细胞术(FCM)对小鼠脾单个核细胞Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)进行检测。使用微量样本多指标流式蛋白定量术试剂盒(CBA)检测小鼠血清中Th1和Th2类细胞因子的表达情况。结果 A组小鼠在受治第2周时,虫血症再次出现,5周内有50%小鼠出现虫血症,死亡17只。而B组小鼠在受治第3周时,虫血症再次出现,5周内有25%小鼠出现虫血症,死亡7只。C组小鼠未见虫血症出现,生存状态良好。A组小鼠连续给予Dem 21 d后,脑组织中弓形虫DNA拷贝数为(209±12)×109,而B组接受PT治疗后弓形虫DNA拷贝数为(62±10)×109,前者显著高于后者(P<0.01);FCM检测显示,小鼠给予Dem 21 d后,小鼠脾脏Th1、Th2和Treg细胞占CD4+细胞百分比,A组的分别为(4.0±1.5)%、(0.6±0.1)%和(5.0±0.9)%,B组分别为(6.1±1.0)%、(0.5±0.2)%和(7.0±1.2)%,A组和B组小鼠Th1和Treg细胞百分比差异有统计学意义(P<0.01)。血清细胞因子检测结果显示,小鼠血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),A组的[(2.2±0.7)pg/ml、(20.1±5.0)pg/ml]均低于B组的[(3.6±0.6)pg/ml、(32.0±8.0)pg/ml](P<0.01)。Th2型相关细胞因子白细胞介素-4(IL-4)和IL-10,A组的[(2.6±0.4)pg/ml、(39.0±6.0)pg/ml]与B组的[(2.7±0.7)pg/ml、(40.0±8.0)pg/ml]相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论匹多莫德能够显著激活地塞米松诱导的免疫抑制,抑制地塞米松诱导的小鼠弓形虫隐性感染活化,其免疫调节机制有Th1和Treg细胞的参与。