顺铂前药纳米载药系统联合丁硫氨酸亚砜亚胺增强肿瘤化疗效果的研究

目的 合成4种顺铂前药并考察其自组装能力,制备聚乙二醇(PEG)化顺铂前药纳米粒,联合丁硫氨酸亚砜亚胺(BSO)用于肿瘤的共同治疗。方法 以顺铂为原料药,合成4种顺铂前药(C6-Pt、C10-Pt、C12-Pt、C18-Pt);采用一步纳米沉淀法筛选出自组装能力较强的顺铂前药,制备纳米粒;完成纳米粒的外观形态、稳定性、粒径、Zeta电位及体外药物释放考察;CCK-8法考察顺铂、C12-Pt NPs对MCF-7、B16F10、LLC、4T1的细胞毒性,以B16F10为细胞模型测定BSO的无毒浓度及C12-Pt NPs和BSO联用的最佳摩尔比,考察顺铂、顺铂/BSO、C12-Pt NPs、C12-Pt NPs/BSO对B16F10细胞的生长抑制作用;试剂盒法测定顺铂、顺铂/BSO、C12-Pt NPs、C12-Pt NPs/BSO处理B16F10细胞24 h后的胞内GSH水平。结果 成功合成4种顺铂前药(C6-Pt、C10-Pt、C12-Pt、C18-Pt);顺铂前药质量浓度为1 mg·mL^(-1)时,仅有C12-Pt能自组装成为纳米粒(C12-Pt NPs);C12-Pt NPs粒径分布均匀,具有较好的长期稳定性和血浆稳定性;在含0、1 mmol·L^(-1)DTT的PBS(pH 7.4)缓冲液中纳米粒释药缓慢,在含10 mmol·L^(-1)DTT的PBS(pH 7.4)缓冲液中,72 h内药物释放率可达76%;C12-Pt NPs对4种肿瘤细胞的抑制作用强于顺铂;对于B16F10细胞,BSO未表现出明显毒性;当顺铂前药、BSO摩尔比为1∶40时对肿瘤细胞抑制作用最强,表明BSO对顺铂前药具有较好的化疗增敏作用;与顺铂相比,顺铂/BSO、C12-Pt NPs、C12-Pt NPs/BSO处理后B16F10细胞中GSH水平均显著下降(P<0.001)。结论 C12-Pt NPs制剂学性质良好,C12-Pt NPs对多种肿瘤细胞均具有较强的生长抑制作用,BSO能够有效增强C12-Pt NPs对肿瘤的杀伤效果。

磷脂种类对吲哚菁绿脂质体制剂学性质的影响

目的探究磷脂种类对吲哚菁绿(ICG)脂质体制剂学性质的影响。方法采用薄膜水化挤出法分别制备以氢化大豆卵磷脂(HSPC)、蛋黄卵磷脂为脂质成分的脂质体(ICG-H-Lipo、ICG-E-Lipo)。采用Zetasizer3000HS粒径仪测定脂质体的粒径、聚合物分散性指数(PDI)和Zeta电位;透射电子显微镜观察脂质体形态;超滤离心法分别测定ICG-H-Lipo和ICG-E-Lipo的包封率。用紫外分光光度计分别测定ICG-E-Lipo、ICG-H-Lipo及游离ICG在400~1000 nm的紫外吸收光谱。以粒径变化为指标,考察脂质体用纯水稀释10倍、4℃条件下储存1个月的长期稳定性,考察脂质体在模拟血浆(pH 7.4大鼠血浆)中的稳定性,考察脂质体用纯水稀释10倍后给予808 nm激光辐照(1 w·cm^(−2)、5 min)7 d内稳定性;将ICG-HLipo、ICG-E-Lipo和游离ICG 4℃避光保存,分别于0、1、3、5、7 d检测ICG在780 nm处的吸光度(A)值。将ICG-ELipo、ICG-H-Lipo和游离ICG配制成ICG质量浓度为25μg·mL^(−1)的溶液,给予1 w·cm^(−2)、808 nm激光辐照5 min,用红外热像仪记录温度变化;给予5个808 nm激光开-关辐照(1 w·cm^(−2),开5 min,关15 min),用红外热成像仪记录温度变化;采用1 w·cm^(−2)、808 nm激光分别辐照0、1、2、3、4 min,用紫外分光光度计检测A值变化;以评价不同制剂的光热效率。结果成功制备了ICG-H-Lipo和ICG-E-Lipo,粒径分布均匀,ICG的包封率分别为77.97%和70.67%。ICG-E-Lipo、ICG-H-Lipo均在895 nm处出现了强吸收峰,相比于游离ICG,ICG-E-Lipo、ICG-H-Lipo均发生了明显红移。稳定性结果表明,ICG-H-Lipo和ICG-E-Lipo在去离子水、血浆溶液中及激光照射后粒径没有明显变化;储存7 d后的紫外吸收光谱图显示,ICG-E-Lipo和ICG-H-Lipo具有比游离ICG更好的稳定性(P<0.05、0.001),且ICG-H-Lipo中的ICG稳定性最好。经过808 nm激光辐照5 min后,ICG-E-Lipo、ICG-H-Lipo、游离ICG的温度均能达到肿瘤细胞的死亡温度;在5次激光开-关循环照射后,ICG-H-Lipo的产热效率相对稳定,而ICG-E-Lipo略有下降,游离ICG的产热效率下降了64%;激光照射4 min后的紫外吸收光谱图表明,游离ICG发生严重的光漂白现象,ICG脂质体吸收峰下降较缓慢。结论脂质体能显著改善ICG的稳定性;ICG脂质体的制剂学性质与磷脂种类密切相关;相同处方下,与蛋黄卵磷脂相比,HSPC制备的ICG脂质体具有更好的稳定性和光热性能。