萆薢总皂苷抗炎镇痛作用的实验研究

目的:研究萆薢总皂苷(total saponin of dioscorea,TSD)的抗炎镇痛作用。方法:尿酸钠(monosodium urate,MSU)分别致大鼠急性痛风性关节炎模型和小鼠皮下气囊炎症模型,醋酸和热板法分别致小鼠疼痛模型;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定IL-1β、IL-18和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)水平。结果:TSD能明显降低大鼠关节肿胀度,降低关节浸出液中IL-1β和IL-18水平(P<0.01或P<0.05),减轻小鼠皮下气囊炎症,降低气囊炎性渗出液中PGE2和IL-1β水平(P<0.01或P<0.05),显著提高热板法小鼠痛阈值,减少醋酸诱导的小鼠扭体次数(P<0.01或P<0.05)。结论:TSD具有较强的抗炎镇痛作用,可能与抑制炎性因子IL-1β、IL-18和PGE2合成与释放有关。

桃红四物颗粒对原发性痛经模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴功能的影响

目的从下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)的角度探讨桃红四物颗粒对原发性痛经(PD)模型大鼠的影响。方法采用戊酸雌二醇联合缩宫素构建PD模型大鼠。将大鼠随机分为空白组,模型组,桃红四物颗粒高、中、低剂量组(18、9、4.5 g·kg^(-1)),阳性对照组(0.08 g·kg^(-1)妇科千金片)。使用酶联免疫吸附法检测血清中促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、孕酮(P)、β-内啡肽(β-EP)含量。通过免疫组化和Western blot法检测子宫组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和催产素受体(OTR)的表达。通过实时荧光定量PCR和Western blot检测下丘脑和卵巢中促性腺激素释放激素(GnRH)和促性腺激素释放激素受体(GnRH-R)的基因和蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠扭体反应次数明显增加,扭体潜伏期明显缩短,表明PD模型构建成功。与模型组相比,桃红四物颗粒可显著降低痛经大鼠血清中的FSH、LH、E_(2)表达水平,同时显著升高P、β-EP水平。免疫组化和Western blot结果表明,与模型组相比,桃红四物颗粒显著降低了痛经大鼠子宫组织中ER和OTR蛋白的表达,可显著提高PR蛋白表达水平。实时荧光定量PCR和Western blot实验结果显示,与模型组相比,桃红四物颗粒可显著降低痛经大鼠中下丘脑与卵巢中的GnRH和GnRH-R的mRNA及蛋白表达水平。结论桃红四物颗粒对PD模型大鼠有良好的治疗作用,这可能与调控HPOA轴功能有关。

丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/Smads信号通路的调控作用

目的探讨丹蛭降糖胶囊(DZJT)对大鼠糖尿病肾病的防治作用及可能机制。方法 100只♂SD大鼠随机选取12只作为正常组,其余大鼠给予高脂饲料+链脲佐菌素(34 mg·kg^(-1),ip)造模。成模大鼠65只,随机分为模型组、DZJT高、中、低剂量组、吡格列酮组,连续8周灌胃给药。取血清、尿液及肾组织,检测大鼠血糖、肾功能指标;观察肾脏组织的病理变化;检测肾组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、CTGF蛋白表达。结果相较于正常组,模型组大鼠血糖升高,肾功能损伤,病理染色出现明显损伤,纤维组织增生明显,肾脏病理评分明显升高;免疫组化及Western blot均显示,肾组织中TGF-β1、Smad3、CTGF表达增加,Smad2、Smad7表达下降。相较于模型组,各给药组大鼠血糖、肾功能指标不同程度降低,肾脏病理形态学明显改善,TGF-β1、Smad3、CTGF下降,Smad2、Smad7水平上升。结论丹蛭降糖胶囊能有效改善大鼠的糖尿病症状,减轻肾脏损害,其机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路及其下游CTGF表达有关。

黄地安消胶囊对糖尿病认知功能障碍大鼠神经保护作用及机制研究

目的通过观察黄地安消胶囊对糖尿病认知功能障碍(diabetic cognitive dysfunction,DCD)动物模型神经保护及Bax/Bcl-2凋亡信号通路的影响,探讨黄地安消胶囊治疗DCD、改善学习记忆功能的作用机制。方法采用腹腔注射STZ联合Aβ25-35双侧海马注射复制DCD动物模型,期间予以高剂量(12 g/kg),中剂量(6 g/kg)及低剂量(3 g/kg)的黄地安消胶囊干预28 d,同时设立正常组、模型组以及二甲双胍和多奈哌齐组,每组10只。Morris水迷宫实验测试各组大鼠逃避潜伏期,大鼠尾静脉取血检测大鼠模型复制前及给药前后空腹血糖变化,苏木精-伊红染色观察各组大鼠海马神经细胞损伤情况,免疫荧光法观察各组大鼠海马Aβ清除情况,Western blot法检测大鼠海马神经细胞Bax、Bcl-2的蛋白表达量,qRT-PCR法检测Bax、Bcl-2的mRNA含量。结果与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖水平和逃避潜伏期明显升高(P<0.05),海马神经细胞损伤较重,Aβ沉积较多,Bax蛋白表达量及mRNA含量明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量及mRNA含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,黄地安消胶囊中剂量组具有最好的疗效,大鼠空腹血糖水平和逃避潜伏期明显降低,海马神经细胞损伤较轻,Aβ沉积较少,Bax蛋白表达量及mRNA含量明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量及mRNA含量明显升高(P<0.05)。结论黄地安消胶囊对DCD大鼠的学习记忆能力有明显改善作用,能够降低血糖,改善DCD大鼠海马神经细胞的损伤,清除Aβ沉积,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。

地奥心血康研究进展

地奥心血康是从薯蓣科植物黄山药、穿龙薯蓣根茎中提取的甾体总皂苷,主要成分是薯蓣皂苷,1988年在中国上市,2012年在荷兰上市,是我国第一个进入发达国家主流市场的治疗性药品,具有抗心肌缺血、调节血脂、抗动脉粥样硬化、抑制血小板聚集、抗炎、抗氧化应激等作用,临床治疗冠心病、心绞痛疗效显著,改善冠心病心绞痛患者的生活质量评分和血瘀证得分,不良反应少。开展随机对照临床研究,提供询证医学证据是今后的研究方向,本文对此进行综述。

二妙散水提液的急性毒性试验研究

目的:对二妙散水提液的急性毒性试验研究及安全性评价。方法:预试验:分别灌胃给予昆明小鼠二妙散水提液,剂量为209.04 g·kg^(-1)、156.78 g·kg^(-1)、130.65 g·kg^(-1)、104.52 g·kg^(-1),计算半数致死量(LD_(50))。最大耐受量试验:灌胃给予小鼠水提液剂量为130.65 g·kg^(-1),观察给药后小鼠的状态和死亡情况。给药14 d后检测小鼠的血常规、血液生化指标、主要脏器系数、体质量以及主要脏器病理学观察。结果:未能测出二妙散水提液的半数致死量。最大耐受量试验结果显示,实验小鼠给药14 d后状态良好,未见中毒死亡情况。第7、14天体质量增加与对照组比较无显著差异(P>0.05);实验小鼠血常规、血生化指标及主要脏器系数与正常对照组相比均差异无统计学意义(P>0.05);病理形态学检查未发现二妙散水提液对小鼠主要脏器产生病理改变。结论:二妙散水提液的最大耐受量为130.65 g·kg^(-1),超过该剂量会产生毒性作用。

桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用

目的观察桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用。方法采用氧-葡萄糖剥夺再恢复的方法诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)和PC12细胞共培养体系的缺糖缺氧再灌注损伤模型,并通过流式细胞仪检测PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,采用Western Blot法检测Bcl-2、Bax和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达水平。结果桃红四物汤促进PC12细胞的活力,抑制细胞凋亡和ROS的产生,抑制MDA的活性,增强SOD和GSH-Px的活性,上调HIF-1α和Bcl-2的表达并下调Bax的表达。结论桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抗氧化作用有关。

靶细胞捕集联用网络药理学、分子对接及实验验证分析桃红四物汤活性成分及调控缺血性脑卒中潜在作用机制研究

通过靶细胞捕集联用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)筛选鉴定桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)潜在的抗脑卒中活性成分,并采用网络药理学、分子对接及实验验证探究THSWD活性成分对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)治疗的潜在作用机制。利用UPLC-Q-TOF-MS技术联合UNIFI数据分析平台分析THSWD与靶细胞共孵育后的细胞破碎液成分,通过网络药理学对其潜在活性成分与IS疾病进行靶点搜集,将两者交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)、基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)信号通路富集分析,构建靶细胞捕集成分-核心靶点-信号通路可视化网络,将活性成分与PPI网络排名靠前的靶点进行分子对接,并通过体外药效学进行验证。靶细胞破碎液中共鉴定出15个潜在的活性成分,包括双环单萜类、氰苷类、黄酮醇类、醌式查耳酮类、苯丙素类、鞣质类等。通过网络药理学技术分析可得THSWD可能通过芍药苷、丁苯酞、脱水红花黄色素B、异绿原酸B、苦杏仁苷、芍药新苷、洋川芎内酯等活性成分,调控PI3K-AKT、FoxO、MAPK、Jak-STAT、VEGF、HIF-1等信号通路影响IS炎症级联反应、血管生成、氧化应激、细胞焦亡、凋亡等病理过程。分子对接及体外药效学验证发现靶细胞捕集活性成分具有促进氧糖剥夺/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/reoxyglucose,OGD/R)模型下的大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cells,rBMECs)血管新生作用。综上,应用靶细胞捕集联用UPLC-Q-TOF-MS技术可快速筛选出THSWD中潜在的活性成分,通过网络药理学可预测THSWD活性成分干预IS发病机制,分子对接结合实验验证可进一步明确药效,从而为中药复方的药效物质基础研究提供研究思路的理论基础。

联合机器学习和网络药理学探究小柴胡汤治疗类风湿关节炎的作用机制

目的:本研究旨在利用机器学习和网络药理学探讨小柴胡汤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的分子机制。方法:基于中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)获取小柴胡汤的化学成分,利用Swiss Target Prediction和HERB数据库预测活性成分靶点。利用R软件包GEOquery获取RA相关数据集GSE93272的表达谱和临床信息,并筛选差异靶点。通过机器学习算法支持向量机(support vector machine,SVM)进一步筛选疾病靶点基因。疾病靶点与活性成分靶点的交集靶点为小柴胡汤治疗RA的潜在作用靶点。利用clusterProfiler包对潜在靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析和WikiPathway通路富集分析。将活性成分和潜在作用靶点导入Cytoscape 3.8.2软件构建“药物-活性成分-潜在靶点-疾病”网络,拓扑分析获取小柴胡汤治疗RA的核心成分。利用LASSO回归筛选小柴胡汤治疗RA的核心靶点。利用ssGSEA算法对核心靶点进行免疫浸润分析。结果:共筛选出有效活性成分193个,相关靶点2719个。通过limma包差异分析共筛选出1361个差异基因。基于SVM进一步筛选得到357个差异基因,潜在靶点62个。GO富集分析得到489个GO条目,信号通路富集分析得到70条Wiki信号通路。“药物-活性成分-潜在靶点-疾病”网络分析发现香豆雌酚可能是小柴胡汤治疗RA的核心成分。LASSO回归筛选到趋化素样因子(chemokine like factor,CKLF)和胱抑素A(cystatin A,CSTA)可能是小柴胡汤治疗RA的核心作用靶点。数据分析显示,与正常样本比较,RA患者中CKLF和CSTA均呈现高表达趋势(P<0.0001),且具有良好的诊断效能。免疫浸润分析表明,RA的发生发展与多种免疫细胞失调相关,核心靶点CKLF和CSTA可通过调控多种免疫细胞浸润缓解RA的进程。结论:小柴胡汤可能通过抗炎、调节免疫细胞功能等多方面发挥对RA的治疗作用。

萆薢总皂苷调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂高胆固醇饲料+20%果糖水喂养16周,将造模组小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))、TSD高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃给药,连续8周。测定小鼠活动度、肝脏系数、肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及血清TC、TG、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色、油红O染色和透射电子显微镜观察肝组织和肝细胞病理变化、脂质蓄积情况和肝脏超微结构形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织AMP活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及其磷酸化形式的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠活动度明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显升高,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显降低,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组小鼠活动度明显增加(P<0.05),TSD各剂量组小鼠活动度无明显改变;TSD及阿托伐他汀组小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显降低,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显升高,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSD可能通过调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路减少脂质合成,从而改善小鼠NASH。

基于WGCNA联合网络药理学探究防己地黄汤治疗类风湿关节炎的作用机制

目的 利用网络药理学和加权基因共表达网络分析(WGCNA)方法探讨防己地黄汤治疗类风湿关节炎的分子机制。方法 利用TCMSP、SwissTargetPrediction、HERB数据平台及相关文献检索防己地黄汤的主要活性成分及其相关靶点,通过R软件limma包对GEO平台类风湿关节炎数据集GSE110169进行差异分析。基于WGCNA筛选与疾病相关的基因模块。利用R软件VennDiagram包进行交集靶点分析。通过Cytoscape的cytoHubba插件筛选核心靶点基因。采用Cytoscape软件进行“药物–活性成分–靶点–疾病”网络构建与分析。clusterProfiler包对交集靶点基因进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。通过PyMOL软件对核心活性成分与核心靶点基因进行分子对接验证;并运用CIBERSOTR进行核心靶点基因的免疫浸润分析。结果 共筛选出有效活性成分129个,相关靶点1 280个,基因芯片差异基因2 091个;筛选出3个与疾病相关的基因模块;获得药物与疾病共同靶点139个;KEGG通路分析显示,主要富集在T细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、Toll样受体信号通路等;筛选出汉黄芩素和槲皮素2个核心成分及肿瘤蛋白53(TP53)和胱氨酸蛋白酶3(CASP3)2个核心靶点基因。分子对接显示,核心成分与核心靶点之间均具有稳定的结合能力;免疫浸润分析表明,核心靶点基因与多数免疫细胞关系密切。结论 防己地黄汤可能从抗炎、调节免疫细胞功能等多方面发挥对类风湿关节炎的治疗作用。

地奥心血康对动脉粥样硬化大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节作用

观察地奥心血康对动脉粥样硬化大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。将60只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,阿托伐他汀组(4.0 mg·kg^-1),地奥心血康组(100,30,10 mg·kg^-1),每组10只。采用高脂饲料加维生素D2复制动脉粥样硬化模型,第9周灌胃给药,连续8周。生化分析仪检测血脂TG,TC,LDL-C,HDL-C水平;ELISA法检测血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平;主动脉苏丹Ⅳ和HE染色进行病理形态学观察;RT-PCR和Western blot法检测主动脉组织TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。结果显示,与模型组比较,阿托伐他汀组和地奥心血康高、中剂量组血清TC,TG,LDL-C含量显著降低,HDL-C含量显著升高,血清TNF-α,IL-6,IL-1β水平显著下降。阿托伐他汀组和地奥心血康组主动脉病变明显改善,主动脉TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均下降。地奥心血康对大鼠动脉粥样硬化具有防治作用,其作用机制可能是通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号转导,减轻炎症反应,从而抑制动脉粥样硬化进程。

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP^-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP^-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L^-1)和秋水仙碱组(0.2 mg·L^-1),除正常组外,其余各组均用400 mg·L^-1MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素^-1β(IL^-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL^-1β前体(Pro-IL^-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0~32 mg·L^-1TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL^-1β的分泌水平显著升高(P<0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1β)的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,1~30 mg·L^-1TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL^-1β的分泌(P<0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1β)的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL^-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL^-1β分泌而发挥抗炎作用。