猪ALAS1基因的克隆、序列分析及表达模式的研究

目的：首先克隆了猪ALAS1（5-aminolevulinate synthase 1）DNA序列，并对CDS序列进行了序列分析，分析了该基因的表达模式。方法：以4月龄长大母猪的卵巢为材料，运用同源序列克隆技术，对猪ALAS1 DNA序列进行克隆并对其进行生物信息学分析；利用性腺激素处理卵巢颗粒细胞并结合RT-PCR方法分析了猪ALAS1基因的表达模式。结果：克隆得到了猪ALAS1 DNA序列9137 bp，其中包括53 bp的5＇非编码区序列、1922 bp的CDS序列和2～9内含子序列，共编码640个氨基酸；猪ALAS1蛋白氨基酸序列与人和小鼠的相似性一致（100%）；ALAS1蛋白的分子量约为38.0 KDa，等电点为9.07，可能存在10个PKC磷酸化位点、1个CAMP磷酸化位点、4个N-糖基化位点、12个豆蔻酰化位点、3个CKII磷酸化位点和1个酰胺位点，还包含1个天冬酰胺转氨酶超家族（AAT-1）保守结构域；猪ALAS1在性腺激素处理2个卵巢颗粒细胞后，可检测到该基因在卵巢颗粒细胞中的显著性表达，之后其表达量迅速下降，12 h后表达量又提高，之后表达量再次迅速下降。结论：猪ALAS1基因的CDS区在物种间保守性强，推测猪ALAS1基因参与卵泡的发育和排卵及在黄体化过程中发挥一定作用。