多花黄精水提物成分分析及抗肿瘤活性研究

目的分析多花黄精水提物成分,并对其体内外抗肿瘤活性进行评价,为进一步开发利用多花黄精提供理论基础。方法(1)通过水提法制备多花黄精水提物,利用UPLC-Q-TOF/MS、苯酚硫酸法等方法分析多花黄精水提物化学成分,并通过CCK-8法检测多花黄精水提物对多种肿瘤细胞增殖抑制活性,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况,利用多花黄精水提物含药血清检测入血成分对细胞增殖抑制活性。(2)构建荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(予以生理盐水)、阳性药环磷酰胺组(50 mg·kg^(-1))以及多花黄精水提物低、中、高剂量组(55.9、111.8、223.6 mg·kg^(-1)),灌胃治疗7 d。治疗期间,观察小鼠体质量及肿瘤体积变化情况。治疗结束后处死小鼠,采用苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肺、肾以及肿瘤组织病理学变化;免疫组化(IHC)检测肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果多花黄精水提物多糖含量达到(10.07±1.3)%,黄酮含量为(0.044±0.004)%,并且通过UPLC-Q-TOF/MS检测出39种成分,包含黄酮类的黄芩素、槲皮素、木犀草素、芦丁,有机酸类的阿魏酸及多酚类的没食子酸等抗肿瘤成分。多花黄精水提物对Hela、A549、4T1、B16、MFC和HepG2细胞均有抑制作用(P<0.001),其中对B16细胞抑制作用最为明显,且多花黄精水提物可诱导B16细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.001)。流式双染和Western Blot结果显示多花黄精水提物明显促进B16细胞凋亡,降低Bcl-2的表达,且促进Bax的表达(P<0.01,P<0.001)。多花黄精水提物入血成分对B16细胞也具有抑制作用(P<0.001)。此外,多花黄精水提物体内活性实验结果显示,与模型组比较,不同剂量的多花黄精水提物能够抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞坏死,降低Bcl-2表达,提高Bax的表达。结论多花黄精水提物成分丰富,含有多种抗肿瘤活性成分,能抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,显示较强的抗肿瘤作用,值得深入研究。

复方石斛黄精颗粒剂成型工艺研究

目的:优化复方石斛黄精颗粒剂提取及成型工艺。方法:以多糖提取率为指标,优化复方石斛黄精颗粒提取工艺,以颗粒成型率、休止角、吸湿性和溶化性为指标,研究最优成型工艺。结果:复方石斛黄精颗粒最佳提取工艺为料液比为1∶23(g/mL)、提取温度为76.8℃、提取时间为132.3 min。最佳成型工艺为乳糖与糊精的比例为2.38∶1;赋形剂与浸膏的比例为3.36∶1。结论:优选的提取及成型工艺稳定可靠,为复方石斛黄精颗粒剂实现工业生产提供理论依据。

老鸦瓣(光慈姑)的研究进展

老鸦瓣是我国传统中药材,有着悠久的用药历史,具有消肿散结、清热解毒之功效。一直以来,老鸦瓣因其含有良好的抗肿瘤活性而不断引起国内外学者的广泛关注。然而,目前关于老鸦瓣的综述还不够全面。因此,在前期综述的基础上进一步加以补充,综述了国内外学者在老鸦瓣本草背景、化学成分、药理作用、体外繁殖等方面的研究,以期为后续老鸦瓣的开发与应用等方面奠定基础。

不同方法黄精多糖脱蛋白工艺及其抗氧化性研究

探索黄精多糖最佳脱蛋白方法;以蛋白脱除率及多糖保留率为指标考察三氯醋酸(TCA)法、Sevage试剂法、盐析法、盐酸法对黄精多糖脱蛋白影响,通过不同方法脱蛋白黄精多糖对DPPH自由基、O_(2)^(-)自由基清除率评价其体外抗氧化能力。黄精多糖蛋白脱除率为Sevage试剂法>TCA法>盐酸法>盐析法;多糖保留率为TCA法>盐酸法>Sevage试剂法>盐析法,体外抗氧化活性为TCA法>盐酸法>Sevage试剂法>盐析法。不同脱蛋白方法对黄精多糖蛋白脱除率及多糖保留率及其体外抗氧化活性产生不同的影响,其TCA法是一种较好的黄精多糖脱蛋白的方法。

霍山石斛UDP-鼠李糖合成酶的克隆及功能分析

鼠李糖合成酶(rhamnose synthase,RHM)催化合成的UDP-鼠李糖,是植物体内合成鼠李糖糖苷类次生代谢产物的重要糖供体。该研究基于已报道的鼠李糖合成酶,通过序列比对从霍山石斛本地化基因数据库中筛选出1条RHM基因(DhuRHM)。克隆该基因并进行生物信息学分析及体外功能验证,结果显示DhuRHM的开放阅读框为2016 bp,编码蛋白的氨基酸数目为671,预测其大小为75.43 kDa,理论等电点为6.12。亚细胞定位分析表明DhuRHM定位于细胞膜,多序列比对及系统进化树显示,DhuRHM有植物RHM家族的特征结构域(GxxGxxG/A和YxxxK),且与其他物种的RHM具有同源性。体外酶活实验表明DhuRHM可体外催化UDP-葡萄糖生成UDP-鼠李糖。此外,RT-qPCR检测发现DhuRHM在茎的表达量高于叶和根,4种非生物胁迫(高温、低温、干旱、紫外)及MeJA处理下,紫外、低温及高温胁迫上调DhuRHM表达较为显著。该研究首次从霍山石斛中获得鼠李糖合成酶并完成其功能鉴定,进一步丰富了植物RHM家族的研究,为霍山石斛UDP-鼠李糖生物合成途径以及相关代谢产物应对环境胁迫等研究提供参考。