NK-92细胞联合靶向Her2基因的siRNA治疗卵巢癌的体外及动物实验

目的：探讨NK-92细胞对抑制Her2基因表达的卵巢癌细胞株SKOV-3细胞在体外及体内的杀伤活性。方法：靶向Her2的siRNA转染SKOV-3,筛选得到能稳定抑制Her2基因表达的细胞株SKOV-3/siRNA,并通过RT-PCR和免疫组织化学方法检测Her2基因抑制效果。应用LDH法检测NK-92细胞对SKOV-3、SKOV-3/siRNA的杀伤活性。将SKOV-3、SKOV-3/siRNA细胞接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况,并比较NK-92细胞在各组治疗效果。结果：建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株SKOV-3/siRNA,Her2基因表达受到较强抑制。NK-92在效靶比1∶20时对SKOV-3、SKOV-3/siRNA细胞杀伤率分别为（21.1±6.8）%和（45.5±8.9）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。接种SKOV-3/siRNA细胞实验组各时间点瘤体积均明显小于SKOV-3对照组（P〈0.05~P〈0.01）。SKOV3/siRNA＋NK-92治疗组肿瘤质量均小于其他各组（P〈0.05~P〈0.01）。结论：NK-92细胞联合靶向Her2基因的siRNA可以抑制卵巢癌细胞株SKOV-3在体外和体内增殖,有望成为卵巢肿瘤治疗的新途径。

基于浸润深度的术后放化疗在口腔鳞状细胞癌预后中的价值

目的 探究基于浸润深度的术后放化疗在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者预后中的价值。方法 收集2008至2016年于某医院接受手术治疗的OSCC患者的临床病理信息,使用卡方检验比较浸润深度对患者术后局部复发、颈淋巴结转移的影响;并分析不同浸润深度时,术后放化疗对患者术后局部复发、颈淋巴结转移及生存率的影响。结果 纳入研究的OSCC患者共111例,其中5 mm<浸润深度≤10 mm及浸润深度>10 mm的患者术后局部复发率(P<0.05)及颈淋巴结转移率(P<0.05)显著高于浸润深度≤5 mm的患者。患者复发时间集中在术后2年,浸润深度越大的患者,术后复发时间越短(P<0.05)。而术后放化疗的加入,对不同浸润深度患者的术后局部复发率、颈淋巴结转移率及生存率均没有明显改善(P>0.05)。结论 浸润深度对OSCC患者术后复发、颈淋巴结转移及生存率具有重要的预测价值,但浸润深度并不能作为指导OSCC患者术后是否需要做放化疗的单独指标。

人胎盘滋养层细胞的分离和鉴定

目的:体外分离足月妊娠胎盘滋养层细胞,观察其形态学特点,检测人类白细胞抗原-E(HLA-E)在滋养层细胞的表达情况。方法:采用0.25%胰酶和胶原酶I联合消化法及Percoll密度梯度分离法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,光学显微镜观察分离出的细胞形态,透射电镜观察分离出的细胞超微结构;RT-PCR技术检测分离出的滋养层细胞HLA-E的表达。结果:光学显微镜下初分离的细胞呈大圆形,以单个核为主;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富,胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴。在分离的细胞上检测到HLA-E的表达。结论:采用胰酶和胶原酶I联合消化及Percoll密度梯度分离法可获得高纯度的滋养细胞,在透射电镜下可见到超微结构,同时检测到滋养层细胞上表达HLA-E。

子宫肌瘤患者血清及局部白细胞介素6水平的检测与意义

目的探讨白细胞介素6(IL-6)在子宫肌瘤的表达及意义。方法采用ELISA检测20例子宫肌瘤和健康对照组血清中IL-6的水平,采用RT-PCR和免疫组织化学检测子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌组织IL-6的表达。结果子宫肌瘤患者血清中IL-6水平为(6.73±2.84)pg/ml,健康对照组为(6.59±2.16)pg/ml,两组差异无统计学意义(P>0.05)。同源子宫平滑肌IL-6 mRNA的相对表达量为(0.86±0.03),子宫肌瘤为(0.40±0.02),免疫组织化学正常子宫平滑肌IL-6的平均光密度值为(0.27±0.02),子宫肌瘤为(0.14±0.01),两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论子宫肌瘤局部低表达IL-6可能与子宫肌瘤发病有关。

早孕外周血及蜕膜中NK细胞表型及T淋巴细胞亚群的变化

目的:检测孕妇外周血及蜕膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞表型,探讨它们与母-胎界面免疫耐受的关系。方法:收集20例早孕同一患者的蜕膜组织及外周血,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、T细胞含量及其表面分子CD16、NKG2A、NKG2D表达水平。结果:蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占蜕膜淋巴细胞(57.15±4.0)%,外周血自然杀伤(pNK)细胞占外周血淋巴细胞(11.46±1.58)%;dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞,二者分别(10.3±3.9)%与(95.6±2.6)%(P<0.05);dNK细胞表面NKG2A的表达明显高于pNK细胞,二者分别为(87.10±4.5)%与(27.5±4.2)%(P<0.01),dNK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(88.70±4.1)%与(93.10±3.6)%(P<0.05);蜕膜中的CD4+T淋巴细胞的表达低于外周血中CD4+T淋巴细胞,二者分别为(13.70±1.0)%与(15.85±2.4)%(P<0.05),蜕膜中CD8+T淋巴细胞表达明显低于外周血中CD8+T淋巴细胞,二者分别为(15.23±1.5)%与(18.85±1.73)%(P<0.01)。结论:妊娠期蜕膜中的NK细胞及T淋巴细胞可能是同维持母-胎界面的免疫耐受的重要原因。

FISH检测两种基因在宫颈癌筛查中的价值

目的探讨荧光原位杂交(FISH)检测人类染色体末端酶基因(hTERC)和c-MYC基因扩增在宫颈癌筛查以及疾病转归中的预警价值。方法收集符合条件的妇科门诊患者宫颈标本1 000例,行液基细胞学(TCT)和hTERC、c-MYC基因检测,任一项阳性者在阴道镜下取活检。病理异常者分别在第3、6、12个月重复行细胞学和基因检测及阴道镜随访。结果 hTERC和c-MYC阳性率分别为7.3%、4.6%。无论是细胞学或者病理学分类,两种基因的异常扩增率均随着病变级别加重而升高(P<0.05)。两基因表达也呈正相关性(P<0.01)。随访发现5例患者存在恢复缓慢或疾病进展甚至术后复发,其中4例为hTERC和c-MYC共同表达的患者。hTERC基因的灵敏度和约登指数高于c-MYC,但是特异度较低。结论 hTERC基因和c-MYC基因的异常扩增阳性率随宫颈病变程度、宫颈细胞异常程度增加而增加。两者可以与细胞学互为补充,用于宫颈病变初筛和高度病变风险的评估。

正常妊娠孕妇外周血及蜕膜中CD4^+CD25^+调节性T细胞比例的变化

目的研究正常妊娠孕妇外周血及蜕膜中CD4+CD25+T细胞的比例变化,探讨CD4+CD25+T细胞在母胎免疫调节中的作用。方法应用流式细胞技术检测正常妊娠孕妇早期、晚期、分娩发动期外周血及蜕膜中CD4+CD25+T细胞的比例变化。结果正常妊娠过程中孕妇外周血中CD4+CD25+T细胞比例变化:妊娠早期较高,明显高于妊娠晚期及分娩发动期(P<0.05),分娩发动期最低;蜕膜中CD4+CD25+T细胞比例变化:妊娠早期及妊娠晚期高于分娩发动期(P<0.05),但妊娠早期与妊娠晚期二者相比无显著差异。结论CD4+CD25+T细胞在正常妊娠的免疫耐受及分娩发动中发挥重要作用。

足月妊娠分娩发动时孕妇蜕膜组织中TH1及TH2型细胞的变化

目的研究足月妊娠孕妇分娩前后蜕膜组织中Th1/Th2细胞因子的变化并探讨其在分娩发动中的作用。方法应用流式细胞技术检测孕晚期未临产组(剖宫产组)和临产组蜕膜组织中TH1TH2型细胞因子。结果足月妊娠孕妇蜕膜NK细胞胞内IFN-γ的表达率为临产组明显高于剖宫产组,而IL-4的表达率为临产组明显低于剖宫产组,差异有显著性(P<0.05)。结论分娩发动时,孕妇蜕膜组织中Th1和Th2型细胞发生变化,其机制复杂有待进一步研究。

干细胞条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）条件培养液对小鼠体外成熟卵母细胞发育潜能的影响。方法：分离、培养小鼠MSCs,获得MSCs条件培养液;收集4~6周小鼠生发泡期（GV）卵母细胞,在MSCs条件培养液中体外成熟（IVM）;同时部分小鼠促排处理,收集体内成熟卵母细胞;体外受精（IVF）后,比较受精率、4-细胞形成率及囊胚形成率差异;Hoechst33342染色后观察内细胞团（ICM）和滋养层细胞形成情况,计数内细胞团数。结果：IVM卵母细胞IVF后的受精率、4-细胞形成率和囊胚形成率及囊胚内细胞总数与体内成熟组比较,无显著差异（P〉0.05）;IVM组各时期的胚胎形态正常,囊胚内细胞染色后的荧光图像与体内成熟组基本一致。结论：MSCs条件培养液能保持小鼠IVM卵母细胞良好的质量和发育潜能,是一种较理想的IVM培养体系。

间充质干细胞与肿瘤生物治疗

间充质干细胞（MSC）具有低的免疫原性和特异的组织趋向性，并且取材方便、体外扩增能力强，因而成为理想的工程细胞。修饰MSC使其表达特定的抗癌分子，或者将其作为靶向抗癌的一个载体成为近几年肿瘤生物治疗研究的热点。MSC在肿瘤生物治疗方面的应用显示着很大的潜力。