FL基因的克隆及在大肠杆菌中表达

目的获得人FLcDNA膜外序列 ,构建表达人FL蛋白的重组体并实现其有效表达 ,更深入地探讨FL的生物学功能。方法提取胎肝细胞总RNA经RT PCR扩增目的cDNA片段 ,并将其克隆至pUC 18T载体中 ,测定其DNA序列 ,将该基因重组于GST融合蛋白表达载体pEGX 4T 1并进行表达。结果从胎肝细胞总RNA中扩增得到 5 46bp片段 ,序列测定结果与文献报道一致 ,表达的FL蛋白占菌体总蛋白的 10 %左右。结论人FL基因在大肠杆菌DH5α中获得了有效表达 ,为进一步的基础研究和临床应用奠定基础。

脐血淋巴细胞的免疫学特性研究

目的 探讨脐血中T淋巴细胞的免疫功能 ,为脐血移植后移植物抗宿主病 (GVHD)、移植物抗白血病反应 (GVL)及免疫功能重建提供理论依据。方法 用免疫荧光抗体直接标记淋巴细胞分化抗原 ,应用流式细胞仪进行检测 ;用微量全血法进行单细胞内的细胞因子检测从而判断脐血T淋巴细胞分泌细胞因子 (IFN γ、IL 4)的能力 ;用植物血凝素 (PHA)作为刺激剂 ,观察T淋巴细胞CD2 5表达的动态变化。结果 脐血T淋巴细胞CD4 + /CD8+ 为 1.93± 0 .91,较成人高 (P <0 .0 1) ,CD8+ 细胞百分比低于成人外周血 (P <0 .0 1) ,而且 90 %以上T淋巴细胞表达初始型CD4 5RA,显著高于成人外周血淋巴细胞 (P <0 .0 1) ;CD2 5、CD2 8、HLA DR二者间差异无显著性。脐血CD4 + 、CD8+ 细胞分泌IFN γ、IL 4的水平显著低于成人T淋巴细胞 (P <0 .0 1)。脐血T淋巴细胞经PHA刺激可以活化 ,但活化的时相与成人略有不同。结论 脐血淋巴细胞各细胞亚群的构成比例及发育成熟度与成人均不相同 ,脐血CD4 +CD8+ 淋巴细胞中 ,以代表初始型、未接触抗原刺激的CD4 5RA+ 细胞为主 ,而且分泌细胞因子的能力低下 ,可能是脐血移植后急、慢GVHD发生率低、强度弱的原因之一。脐血淋巴细胞经适当刺激可以活化 。