IL-34介导的NF-кB信号通路对根尖牙乳头干细胞成牙成骨定向分化的调节作用

目的:探讨白细胞介素-34(IL-34)介导的核因子кB(NF-кB)对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成牙/成骨定向分化调节作用。方法:使用酶消化法从小鼠根尖牙乳头组织传代培养SCAPs;流式细胞术鉴定SCAPs中CD44、CD90、CD45及集落刺激因子1受体(CSF-1R)的表达;实验分为4组:空白对照组、IL-34组(100 ng/mL IL-34)、CSF-1R组(100 ng/mL IL-34+25 ng/mL anti-CSF-1R)、NF-кB组(100 ng/mL IL-34+1umol/L BMS-345541)。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析各组30、60、120 min时SCAPs胞浆中NF-кB关键蛋白p-IкBα、IкBα、p-P65及P65蛋白的表达情况;矿化诱导4组SCAPs 3、7、14 d时,茜素红染色和半定量分析比较各组细胞的矿化结节形成能力;通过RT-qPCR检测各组SCAPs中成骨相关基因Runt相关转录因子-2(RUNX2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)mRNA水平。结果:流式细胞术显示,SCAPs中CD44(90.4%)、CD90(93.5%)阳性表达,造血干细胞CD45(3.1%)阴性表达,SCAPs表达CSF-1R(23.2%)阳性。与对照组比较,IL-34组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平上调,矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量增多,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与IL-34组比较,CSF-1R组和NF-кB组SCAPs胞浆蛋白内p-IкBα、p-P65表达水平下调(P<0.05),矿化诱导3、7、14 d矿化结节形成量减少,细胞中RUNX2、DSPP、OCN mRNA相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-34可通过IL-34/CSF-1R调节SCAPs中NF-кB信号通路,并通过IL-34/CSF-1R/NF-кB信号调节SCAPs的成牙/成骨定向分化能力。