CCK-8检测新鲜脐带组织中细胞活性的初步研究

目的探索采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测新鲜脐带不同大小与数量组织中细胞活性,选用合适的组织块大小与数量诱导培养间充质干细胞,以获得最佳的细胞数量与细胞活性。方法临床获取新鲜脐带加工处理剪切成1/8组织块大小,重量为(0.045±0.001)g,采用CCK-8检测试剂盒检测新鲜脐带组织块活性,对CCK-8试剂的剂量、加入试剂后孵育时间、脐带组织块剪切大小与数量等做了比较与分析,并在6孔板中加入3块不同脐带组织块大小(1/2组、1/4组、1/8组)诱导培养间充质干细胞,对3组生成的细胞数量和细胞活性做了实验研究。结果新鲜脐带组织块剪切成厚度为0.5 cm左右环形组织块的1/8组织块大小,重量为(0.045±0.001)g,24孔板内脐带组织放置3块,CCK-8试剂浓度为15%,于37℃下孵育7-8 h为检测新鲜脐带组织块活性的最佳检测条件;6孔板中加入3块不同脐带组织块大小(1/2组、1/4组、1/8组)诱导培养间充质干细胞,3组中培养生成的细胞活性无明显差异(P>0.05)。但3组中培养生成的细胞数量,其中1/8组与1/2组或1/4组相比,差异有统计学意义(P<0.01),且每克组织块生成的细胞数量最多。结论 CCK-8试剂盒可用于准确地评估新鲜脐带组织中细胞活性。

丙型肝炎病毒基因变异及分型研究进展

HCV或HCV样病毒来源于灵长目动物，起源于跨种属的传播，主要通过经血液临床治疗、静脉药物滥用和其他未明途径流行于世界各地。由于其自身结构功能特点和宿主的压力选择，可产生自发性变异、适应性变异和基因重组，导致丙肝病毒基因型、亚型和准种的产生，且呈现明显的人群和地理分布特点。通过各种基因分型技术检测HCV病毒基因组核苷酸序列变化，不仅对于了解病毒进化史和疾病的诊断治疗预后分析，同时对研究HCV病毒免疫逃逸机制和疫苗的研制也有重要价值。

人脐带源间充质干细胞条件培养液对人肝癌HepG2细胞生长的影响

目的 探讨人脐带源间充质干细胞（HUC-MSC）条件培养液（CM）对人肝癌HepG2细胞生长的影响.方法 选择2011年2月至2014年1月于中国人民解放军第105医院妇产科分娩的35例足月妊娠剖宫产健康胎儿脐带为研究对象,取其用于分离、培养并扩增HUC-MSC.传代扩增至第3代HUC-MSC融合达80％时,更换培养液,继续培养24 h后收集上清液,即为HUC-MSC-CM备用.将对数生长期的人肝癌HepG2细胞按照随机数字表法随机分成相等的3份,分别于含50％,20％及不含HUC-MSC-CM的培养中培养,并分别纳入高含量组、低含量组和空白对照组.采用倒置显微镜观察人肝癌HepG2细胞生长状态,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法和细胞划痕愈合实验分别检测3组人肝癌HepG2细胞增殖和迁移情况,并采用流式细胞术（FCM）法检测各组细胞的细胞周期变化情况.本研究遵循的程序符合中国人民解放军第105医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,脐带获取前,均征得孕妇知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①所分离的原代HUC-MSC培养至第3代后,细胞形态开始比较均一.②MTT法检测结果显示,人肝癌HepG2细胞培养24,48和72 h时,3组相对吸光度（A）值比较,差异均有统计学意义（F=21.330,6.223,9.345;P=0.004,0.032,0.027）,且在这3个时间点,高含量组和低含量组相对A值均显著高于空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,高含量组相对A值亦显著高于低含量组,差异亦均有统计学意义（P＜0.05）.③划痕愈合实验结果显示,3组人肝癌HepG2细胞过河时间比较,差异有统计学意义（F=12.860,P=0.025）,且高含量组人肝癌HepG2细胞过河时间短于低含量组和空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,低浓度组人肝癌HePG2细胞过河时间亦短于对照组,差异亦有统计学意义（P＜0.05）.④FCM法检测人肝癌HepG2细胞周期结果显示,3组G0/G1期和S期人肝癌HepG2细胞比例比较,差异均有统计学意义（F=30.600,30.590;P＜0.05）.且与空白对照组相比,高含量组和低含量组人肝癌HepG2细胞G0/G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）;且高含量组G0/G1期细胞比例比低含量组下降更显著,而S期细胞比例显著增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 HUC-MSC-CM可促进入肝癌HepG2细胞增殖和迁移,并可促进人肝癌HepG2细胞周期G1/S转换.