甜叶菊种质离体保存后的DNA甲基化研究

目的:以甜叶菊组培苗为材料,研究培养温度、甘露醇及多效唑等三个因素对种质保存时再生苗生长的影响,并检测离体保存过程中甲基化水平与模式的变化。方法:离体保存试验采用正交设计法,培养温度设定5、10、15℃3个温度,甘露醇浓度设定0、20、40 g/L 3个浓度,多效唑浓度设定0、0.4、0.8 mg/L 3个浓度;甲基化水平和模式的变化采用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)进行检测。结果:T4处理(10℃条件下添加20 g/L的甘露醇)能有效地减缓甜叶菊种质的生长速度,并保持较高的存活率;与对照相比,保存6个月后各处理再生苗的甲基化水平存在不同程度的降低,且T4处理的甲基化模式以超甲基化为主。结论:甜叶菊离体保存中的最佳培养体系为:MS+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂粉+20 g/L甘露醇的培养基中10℃低温处理,该处理条件下组培苗的表观遗传变化为甲基化水平的降低和以超甲基化模式为主。

甜叶菊离体保存技术研究

为探究适合甜叶菊种质资源中长期保存的方法,以甜叶菊无菌苗为材料,研究蔗糖、多效唑、培养温度等3个因素对甜叶菊无菌苗离体保存的影响,并对保存后材料生根继代培养,进而运用生化和分子标记技术鉴定保存材料的遗传稳定性。研究结果表明,在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+琼脂5.0 g/L基础保存培养基和1 000 Lx、12 h/d的培养条件下,30 g/L蔗糖、2.0 mg/L多效唑以及培养温度为10℃~15℃时,能有效抑制甜叶菊无菌苗生长、延长其保存时间,保存12个月试管苗存活率为70.4%~78.5%;离体生根后再生苗生长旺盛,形态正常,其过氧化物酶酶谱和SRAP分子标记扩增图谱与对照苗无明显差异,遗传性稳定。本研究结果为延缓甜叶菊种苗生长、种质资源离体保存及遗传稳定性提供了理论依据和技术参考。