瓦尼桑黄核苷类成分的液体发酵工艺优化及其细胞毒活性

瓦尼桑黄(Sanghuangporus vaninii)是一种珍贵的药用真菌,其所含有的核苷类成分可开发为具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗菌等活性的药品或保健产品等.该文通过单因素和正交试验对瓦尼桑黄液体发酵工艺进行优化,以核苷产量为指标,探究了最优发酵条件以及碳源、氮源、无机盐的最佳比例,并考察了添加不同前体物质以及调控因子对核苷产量的影响.试验筛选出影响核苷产量的关键因素之一为外源添加前体物质如次黄嘌呤、腺嘌呤,并确定了最优发酵条件:接种量10%、初始pH值为7、培养温度32℃、摇床转速140 r·min^(-1)、培养时间5 d;最佳培养基配比:葡萄糖15.00 g·L^(-1)、蔗糖20.00 g·L^(-1)、蛋白胨5.00 g·L^(-1)、牛肉膏2.50 g·L^(-1)、MgSO_(4)1.00 g·L^(-1)、CaCl_(2)1.50 g·L^(-1)、ZnSO_(4)1.00 g·L^(-1)、MnSO_(4)0.50 g·L^(-1);最优前体物质和调控因子及其添加量:次黄嘌呤1.50 g·L^(-1)、腺嘌呤2.50 g·L^(-1)、丙酮酸钠3.50 g·L^(-1)、槲皮素0.25 g·L^(-1).在最优工艺下瓦尼桑黄液体发酵核苷产量为291.16±6.21 mg·L^(-1),是优化前的32.3倍.此外,该研究还比较了优化前后以及子实体核苷富集产物的体外细胞毒活性,试验结果表明优化后的核苷富集产物对人肝癌细胞HepG2的抑制活性最好,抑制率高于优化前以及子实体的富集产物,为瓦尼桑黄进一步开发利用提供了理论基础.

两种C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型建立方法及比较

目的短期内建立以酒精液体饲料和酒精加高脂饲料所诱导的两种C57BL/6J小鼠酒精性脂肪肝模型,并基于生物化学及组织病理学等方法进行比较,以筛选出较为高效的小鼠酒精性脂肪肝模型。方法24只健康C57BL/6J雄性小鼠,适应性饲养2周后,随机分为维持饲料组、液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组共4个组(n=6)。各组记录每日饲料消耗量及体重变化情况。第16天处死后测定血清转氨酶活性及血清血脂、血糖含量。制备肝石蜡切片及冰冻切片,分别进行HE染色和油红O染色。结果根据统计学分析,相比其他三组酒精液体饲料组小鼠体重呈明显的下降趋势且体重增长率为负增长。高脂饲料组饮食热量摄入明显低于其他三组。液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组三组肝质量与肝质量系数明显低于维持饲料组。生化结果显示,酒精液体饲料组ALT、AST、TC水平显著高于维持饲料组,血糖水平高于维持饲料组;酒精液体饲料组ALT、AST、TC、血糖也高于液体饲料对照组。高脂饲料组血清TC显著高于维持饲料组,AST、血糖高于维持饲料组;高脂饲料组血糖显著高于液体饲料对照组。病理染色结果显示,酒精液体饲料组小鼠肝中有大量脂质沉积,高脂饲料组次之。结论短期Gao-Binge模型与酒精加高脂饲料模型都能成功诱导C57BL/6J小鼠出现AFL的相应生化与病理特征,且Gao-Binge模型组的相应病理指标比后者更加显著,适合于急性AFL模型的建立。